發(fā)布時(shí)間：2017-08-10 15:23

  本文關(guān)鍵詞：Cx43在PDGF-BB誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖中的作用

  更多相關(guān)文章： VSMCs siRNA Cx43 p-Cx43 ERK1/2 PDGF-BB

【摘要】：目的： 本實(shí)驗(yàn)旨在通過Cx43siRNA下調(diào)VSMCs Cx43蛋白表達(dá)，并用PDGF-BB與ERK1/2特異性阻斷劑PD98059處理細(xì)胞，探討Cx43在PDGF-BB誘導(dǎo)的大鼠VSMCs增殖中的作用及信號通路機(jī)制。 方法： 1.通過脂質(zhì)體將Cx43siRNA轉(zhuǎn)染入大鼠胸主動脈VSMCs，使VSMCs低表達(dá)Cx43蛋白，檢測沉默效率。 2.MTT比色法檢測各組VSMCs活性。實(shí)驗(yàn)分為6組：①PDGF-BB組；②Cx43siRNA+PDGF-BB組；③Scramble RNA+PDGF-BB組；④PD98059+PDGF-BB組；⑤Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB組；⑥ScrambleRNA+PD98059+PDGF-BB組。下同。 3.流式細(xì)胞技術(shù)檢測各組VSMCs增殖率。 4.Western blot分別檢測Cx43，p-Cx43，p-ERK1/2及cyclin E蛋白表達(dá)。 結(jié)果： 1. Western blot結(jié)果顯示，，Cx43siRNA組Cx43蛋白表達(dá)為對照組的47%，提示Cx43siRNA沉默效果良好（P＜0.01）。 2. MTT比色法顯示Cx43siRNA+PDGF-BB組較PDGF-BB組吸光度值顯著減�。≒＜0.01）；Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB組較Cx43siRNA+PDGF-BB組吸光度值顯著減�。≒＜0.05）。 3.流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果顯示Cx43siRNA+PDGF-BB組增殖率較PDGF-BB組顯著減小（P＜0.01）；Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB組增殖率較Cx43siRNA+PDGF-BB組顯著減�。≒＜0.05），提示Cx43低表達(dá)，PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs增殖能力明顯下降；ERK1/2通路被阻斷后PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs增殖能力也顯著下降。 4. Western blot結(jié)果顯示： ①Cx43siRNA+PDGF-BB組比PDGF-BB組Cx43蛋白表達(dá)顯著減少（P＜0.05）；Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB組比Cx43siRNA+PDGF-BB組Cx43蛋白表達(dá)顯著減少（P＜0.05），提示Cx43siRNA沉默效果良好，且ERK1/2途徑被阻斷后，Cx43蛋白表達(dá)明顯下調(diào)。 ②PD98059+PDGF-BB組比PDGF-BB組p-Cx43蛋白表達(dá)明顯降低（P0.05），提示ERK1/2途徑被阻斷后，p-Cx43蛋白表達(dá)顯著下調(diào)。 ③Cx43siRNA+PDGF-BB組比PDGF-BB組p-ERK1/2蛋白表達(dá)明顯減少（P＜0.05）；Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB組比Cx43siRNA+PDGF-BB組p-ERK1/2蛋白表達(dá)顯著下降（P＜0.05），提示Cx43蛋白低表達(dá)促進(jìn)了p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平明顯降低。 ④Cx43siRNA+PDGF-BB組比PDGF-BB組cyclin E蛋白表達(dá)明顯減少（P＜0.01）；Cx43siRNA+PD98059+PDGF-BB組比Cx43siRNA+PDGF-BB組cyclinE蛋白表達(dá)明顯下降（P＜0.05），提示Cx43蛋白低表達(dá)，促進(jìn)cyclin E蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)，兩者呈正相關(guān)；同時(shí)阻斷ERK1/2通路，cyclin E蛋白表達(dá)更低。 結(jié)論： 1. RNA干擾特異性沉默Cx43蛋白表達(dá)后，能顯著抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs增殖，顯著降低p-ERK1/2和cyclin E蛋白表達(dá)。 2. PD98059預(yù)處理能顯著增強(qiáng)Cx43低表達(dá)對VSMCs增殖的抑制作用，同時(shí)顯著降低p-ERK1/2，Cx43，p-Cx43和cyclin E蛋白表達(dá)。 3.以上結(jié)果提示Cx43蛋白可能通過ERK1/2途徑增強(qiáng)PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs增殖，進(jìn)而促進(jìn)As病變過程。
【關(guān)鍵詞】：VSMCs siRNA Cx43 p-Cx43 ERK1/2 PDGF-BB
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 前言11-14
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與儀器14-17
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-16
• 2.1.1 主要購置試劑14-15
• 2.1.2 主要配置溶液15-16
• 2.2 主要儀器設(shè)備16-17
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法17-25
• 3.1 VSMCs 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 3.1.1 VSMCs 傳代培養(yǎng)17
• 3.1.2 VSMCs 凍存17
• 3.1.3 VSMCs 復(fù)蘇17-18
• 3.2 VSMCs 轉(zhuǎn)染 Cx43 siRNA18
• 3.3 Western blot 檢測 Cx43 siRNA 沉默效率18-21
• 3.4 MTT 比色法測定細(xì)胞活性21-22
• 3.5 流式細(xì)胞技術(shù)測定細(xì)胞增殖率22-23
• 3.6 Western blot 檢測 Cx43，p-Cx43，p-ERK1/2 及 cyclin E 蛋白表達(dá)23-24
• 3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理24-25
• 第4章 結(jié)果25-33
• 4.1 Cx43 siRNA 沉默效率25-26
• 4.2 Cx43 siRNA 轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞增殖情況26-28
• 4.2.1 MTT 比色法測定各組細(xì)胞活性26-27
• 4.2.2 流式細(xì)胞技術(shù)測定各組細(xì)胞增殖率27-28
• 4.3 各組細(xì)胞 Cx43，p-Cx43，p-ERK1/2 及 cyclin E 蛋白表達(dá)鑒定28-33
• 第5章 討論33-37
• 5.1 Cx43 與 VSMCs 增殖33
• 5.2 Cx43 與 ERK1/2 途徑33-34
• 5.3 Cx43 磷酸化與 MAPK 途徑34-35
• 5.4 Cx43 獨(dú)立于 GJIC 作用35-36
• 5.5 展望36-37
• 第6章 結(jié)論37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述42-50
• 參考文獻(xiàn)47-50

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1 倪燕;朱莉莉;蔣秀紅;丁正年;張國樓;;異氟醚對心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及CX43蛋白表達(dá)的保護(hù)作用[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年08期

2 吳其艷;張金英;鄧子輝;顏光濤;;瘦素對小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及表達(dá)Cx43的影響[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年03期

3 莊梅;羅紅鶴;劉曉冰;陳振光;;缺血預(yù)處理對心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及CX43蛋白表達(dá)的保護(hù)作用[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2006年05期

4 方鶴鶯;吳士堯;;急性病毒性心肌炎與Cx43的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究[J];實(shí)用診斷與治療雜志;2008年04期

5 李松南;毛曉波;馮義柏;王祥;曾秋棠;毛奕;吉慶偉;彭昱東;郭敏;梁志山;;大鼠Cx43基因慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)的觀察[J];臨床心血管病雜志;2010年11期

6 齊清會;代從新;;多器官功能障礙綜合癥大鼠小腸肌層Cx43和縫隙連接變化以及大承氣湯的干預(yù)作用[J];微循環(huán)學(xué)雜志;2011年02期

7 哈獻(xiàn)文;cx43基因的抗癌作用[J];中國腫瘤;1998年04期

8 陳萍,黃國英,常才,趙曉晴,謝利劍;Cx43基因在人類及小鼠胎心發(fā)育中的時(shí)空表達(dá)規(guī)律[J];中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報(bào);2005年01期

9 余煒昶;黃光英;張明敏;張強(qiáng);王偉;;縫隙連接蛋白Cx43基因在針刺鎮(zhèn)痛中的作用[J];中國針灸;2007年03期

10 顏燦群;占克斌;黃光英;王偉;;針刺治療Cx43基因敲除鼠膠原性關(guān)節(jié)炎的免疫學(xué)研究(英文)[J];World Journal of Acupuncture-Moxibustion;2007年04期

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1 徐振平;王學(xué)惠;;n急性一氧化碳中毒大鼠心臟間隙連接蛋白Cx43的表達(dá)[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2006年

2 楊霞;江運(yùn)長;彭清華;;益氣活血法對激光損傷兔視網(wǎng)膜后視網(wǎng)膜縫隙連接蛋白Cx43表達(dá)影響的研究[A];第六屆全國中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2007年

3 許學(xué)兵;姚尚龍;佘守章;;鞘內(nèi)注射MK-801對慢性神經(jīng)痛大鼠的治療作用及對脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞Cx43表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會第六屆年會論文摘要[C];2005年

4 于雪芳;孫躍民;邊波;滕天明;王清;聶晶;萬征;;阿托伐他汀對自發(fā)性高血壓大鼠心肌肥厚和Cx43的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國心血管病學(xué)大會論文匯編[C];2013年

5 陳葵;黃從新;王騰;曹峰;包明威;王海容;曲哲;;卡維地洛對心肌梗死后家兔室性心律失常的影響及與Cx43的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病分會第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2004年

6 李伏娥;沈守榮;張熙純;鄒益友;李桂源;;人胃癌中Cx43基因點(diǎn)突變和甲基化的研究[A];2008全國消化腫瘤新技術(shù)治療研討會論文匯編[C];2008年

7 袁勇華;何學(xué)華;劉麗萍;;卡維地洛對擴(kuò)張型心肌病大鼠心肌Cx43表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2012年

8 劉雪華;高春錦;葛環(huán);劉福佳;劉洋;趙宏穎;;高壓氧對移植皮瓣VEGF、HIF-1及CX43的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十六次全國高壓氧學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

9 劉如秀;暴美靜;王妮娜;李匯搏;;康心復(fù)律方對損傷兔竇房結(jié)組織Cx40、Cx43、Cx45表達(dá)的影響[A];2011年中華中醫(yī)藥學(xué)會心病分會學(xué)術(shù)年會暨北京中醫(yī)藥學(xué)會心血管病專業(yè)委員會年會論文集[C];2011年

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1 李卉;與胚胎心肌共培養(yǎng)通過Cx43影響ESC源細(xì)胞間信號傳導(dǎo)的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

2 史悅;白藜蘆醇抑制氧化磷脂誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖和Cx43磷酸化的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

3 顏燦群;針刺治療膠原性關(guān)節(jié)炎Cx43基因敲除鼠的免疫學(xué)機(jī)理研究[D];華中科技大學(xué);2007年

4 李松南;過表達(dá)Cx43的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心梗后心衰的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2010年

5 司英健;Cx43基因修飾的白血病骨髓基質(zhì)細(xì)胞對Jurkat細(xì)胞體外調(diào)節(jié)作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

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1 張凱;低頻脈沖磁場對大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞及Cx43的影響與機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 王買紅;Cx43修飾的人臍血源基質(zhì)細(xì)胞對人外周血淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)作用的體外研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

3 王學(xué)惠;急性一氧化碳中毒大鼠心臟縫隙連接蛋白Cx43的表達(dá)及超微結(jié)構(gòu)的觀察[D];山西醫(yī)科大學(xué);2005年

4 高一菁;乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Cx43與E-cad表達(dá)的意義及相關(guān)性研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

5 陳果;Cx43修飾人臍血源基質(zhì)細(xì)胞對SUP-B15細(xì)胞體外調(diào)節(jié)作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

6 薩日娜;子宮結(jié)合帶的超微結(jié)構(gòu)及Cx43表達(dá)變化與子宮腺肌病、卵巢子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病學(xué)的關(guān)系[D];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院;2010年

7 程玉;Cx43和PI3K/Akt信號通路在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其相互關(guān)系的研究[D];承德醫(yī)學(xué)院;2014年

8 張權(quán)宇;κ-阿片受體通過調(diào)節(jié)Cx43穩(wěn)定性介導(dǎo)的抗缺血性心律失常作用機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

9 李真真;黃芪甲苷對異丙腎上腺素所致心肌梗死的保護(hù)作用及Cx43表達(dá)的影響[D];蘭州大學(xué);2013年

10 江書正;Cx43在PDGF-BB誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖中的作用[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

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