發(fā)布時(shí)間：2017-08-10 12:01

  本文關(guān)鍵詞：內(nèi)源性DNA加合物方法建立及人群生物監(jiān)測

  更多相關(guān)文章： 內(nèi)源性DNA加合物 生物標(biāo)志物 UPLC-ESI-MS/MS 苯 生物監(jiān)測

【摘要】：DNA加合物是一類極其重要的生物標(biāo)志物，既可以作為接觸(暴露)生物標(biāo)志物，準(zhǔn)確反映化學(xué)毒物接觸的內(nèi)劑量來評價(jià)化學(xué)毒物的毒性，為人群生物監(jiān)測及分析致癌性化學(xué)污染物的暴露提供有效的手段，又可以作為效應(yīng)標(biāo)志物，篩檢高危人群，為生物體的癌癥風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)提供重要信息，同時(shí)，可發(fā)展合理的癌癥預(yù)防和治療策略。在人類組織中絕大多數(shù)的突變，可以確定是內(nèi)源性的。內(nèi)源性DNA損傷比起外源性發(fā)生的頻率更高。因此，內(nèi)源性DNA加合物的檢測是毒理學(xué)研究的重點(diǎn)，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。但內(nèi)源性DNA加合物在人體中含量很低，這就要求檢測方法靈敏度要高、檢測限低、特異性要好。長期接觸苯誘發(fā)再生障礙性貧血和白血病的因果關(guān)系已經(jīng)流行病學(xué)的研究證實(shí)。本研究以基于隊(duì)列的橫斷面研究為基礎(chǔ)，通過建立高特異性、高靈敏度和高通量的UPLC-MS-MS檢測方法，檢測接苯作業(yè)工人和非接苯作業(yè)工人生物樣本（尿、血）中內(nèi)源性etheno-DNA加合物作為生物標(biāo)志物，研究苯誘發(fā)氧化應(yīng)急和脂質(zhì)過氧化“二次打擊”導(dǎo)致的DNA氧化損傷與機(jī)體抗氧化防御機(jī)制之間的關(guān)聯(lián)，揭示苯中毒和致癌新的分子機(jī)制，為苯中毒和致癌早期臨床診斷和治療提供理論依據(jù)。本文的主要研究內(nèi)容包括以下兩個(gè)方面： 1、在本實(shí)驗(yàn)室研究基礎(chǔ)上，建立和優(yōu)化了UPLC-ESI-MS/MS檢測血中etheno-DNA（εdA，εdC）加合物的方法。本方法靈敏度高，檢測限低，回收率好，樣品需求量�。�20μg），最低可以檢測5g DNA。該方法能夠用于大樣本血中εdA，εdC的定量分析。εdA，εdC的檢測限為：1.45fmol，1.27fmol。 2、利用該方法以及本實(shí)驗(yàn)室建立的尿中etheno-DNA檢測方法，對采集自某鞋廠的接苯作業(yè)工人和某電纜廠非接苯作業(yè)工人血、尿中etheno-DNA（εdA，εdC）加合物進(jìn)行了分析檢測并進(jìn)行了綜合分析。研究苯誘發(fā)氧化應(yīng)急和脂質(zhì)過氧化"二次打擊"導(dǎo)致的DNA氧化損傷與機(jī)體抗氧化防御機(jī)制之間的關(guān)聯(lián)，，揭示苯中毒和致癌新的分子機(jī)制，為苯中毒和致癌早期臨床診斷和治療提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)源性DNA加合物 生物標(biāo)志物 UPLC-ESI-MS/MS 苯 生物監(jiān)測
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R3416;O629.74
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目錄7-10
• 第一章 緒論10-34
• 1 內(nèi)源性 DNA 加合物11-13
• 1.1 DNA 氧化損傷11-12
• 1.2 脂質(zhì)過氧化導(dǎo)致的 DNA 損傷12-13
• 2 內(nèi)源性 DNA 加合物的種類13-18
• 2.1 Propano-DNA 加合物14
• 2.2 MDA-DNA 加合物14-15
• 2.3 Etheno-DNA 加合物15-18
• 3 Etheno-DNA 加合物檢測方法研究進(jìn)展18-21
• 3.1 32~P 后標(biāo)記法18-19
• 3.2 免疫分析法19
• 3.3 色譜質(zhì)譜聯(lián)用法19-20
• 3.3.1 GC-MS/MS19-20
• 3.3.2 LC-MS/MS20
• 3.4 其它方法20-21
• 4 內(nèi)源性 DNA 加合物人群生物監(jiān)測中的應(yīng)用21-24
• 4.1 慢性炎癥21-22
• 4.2 遺傳性疾病22
• 4.3 膳食因素22-23
• 4.4 吸煙23
• 4.5 環(huán)境污染23-24
• 5 本文的研究目的和意義24-26
• 參考文獻(xiàn)26-34
• 第二章 UPLC-ESI-MS/MS 檢測血中 Etheno-DNA 加合物34-55
• 1 前言34-35
• 2 實(shí)驗(yàn)部分35-46
• 2.1 儀器與試劑35
• 2.2 試劑的配制35-36
• 2.3 標(biāo)準(zhǔn)品的合成36-40
• 2.4 血樣 DNA 提取及濃度測定40-41
• 2.4.1 血樣 DNA 的提取40-41
• 2.4.2 DNA 濃度的測定41
• 2.5 樣品前處理41-45
• 2.5.1 DNA 的酶解41-44
• 2.5.2 純化44
• 2.5.3 HPLC 富集44-45
• 2.6 UPLC-ESI-MS-MS 檢測血中 εdA,εdC 加合物45-46
• 2.6.1 UPLC 條件45
• 2.6.2 質(zhì)譜條件45-46
• 3 結(jié)果與討論46-53
• 3.1 方法學(xué)驗(yàn)證46-53
• 3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍46-47
• 3.1.2 檢出限與定量限47-48
• 3.1.3 精密度試驗(yàn)48-49
• 3.1.4 方法的重現(xiàn)性試驗(yàn)49-50
• 3.1.5 回收率試驗(yàn)50-51
• 3.1.6 樣品檢測51-53
• 4 小結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-55
• 第三章 苯職業(yè)暴露致 DNA 氧化損傷機(jī)制研究---橫斷面研究55-79
• 1 前言55-56
• 2 研究對象56
• 3 問卷調(diào)查56-57
• 4 接苯和不接苯作業(yè)工人血中 εdA、εdC 水平檢測57-63
• 4.1 UPLC-MS/MS 檢測血中 etheno-DNA 加合物方法57
• 4.1.1 標(biāo)準(zhǔn)品的合成、純化、定量57
• 4.1.2 DNA 樣品前處理57
• 4.2 接苯與非接苯女性、男性作業(yè)工人血中 εdA、εdC 含量檢測57-63
• 5 接苯和不接苯作業(yè)工人尿中 εdC、εdA 水平檢測63-70
• 5.1 UPLC-MS/MS 檢測尿中 etheno-DNA 加合物63-65
• 5.1.1 儀器與試劑63-64
• 5.1.2 試劑的配制64
• 5.1.3 標(biāo)準(zhǔn)品的合成、純化、定量64
• 5.1.4 尿樣前處理64-65
• 5.2 接苯與非接苯女性、男性作業(yè)工人血中 εdA、εdC 含量檢測65-70
• 6 結(jié)果與討論70-77
• 6.1 接苯和不接苯作業(yè)工人的特征70-72
• 6.2 使用不同種類膠工位空氣中苯及苯系物的檢測結(jié)果分析72-73
• 6.3 接苯和不接苯作業(yè)工人血中 etheno-DNA 加合物關(guān)聯(lián)性分析73-75
• 6.4 接苯和不接苯作業(yè)工人尿中 etheno-DNA 加合物關(guān)聯(lián)性分析75-77
• 7 小結(jié)77-78
• 參考文獻(xiàn)78-79
• 附件79-81
• 碩士期間發(fā)表或待發(fā)表的文章81-82
• 致謝82

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號：650572