本文關(guān)鍵詞：吐溫80促進(jìn)鄰苯二甲酸酯腸道吸收效應(yīng)及機(jī)制研究

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【摘要】：背景 鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯[(di-(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP)作為增塑劑被廣泛用于高分子材料中,比如聚氯乙烯(Polyvinyl chloride polymer, PVC),可以增加材料的柔韌性。DEHP是公認(rèn)的一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,具有生殖毒性和雌激素效應(yīng),具有致癌、致畸、致突變的“三致”效應(yīng)。 吐溫80(Polysorbate80,聚山梨醇酯80)是一種非離子型表面活性劑,可用作乳化劑和潤(rùn)滑劑等廣泛應(yīng)用于食品中,并且在藥劑學(xué)研究中可以通過(guò)抑制P-gp增加藥物的生物利用度。 目的 本課題的目的是驗(yàn)證吐溫80增加大鼠中DEHP的生物利用度的假說(shuō),并闡明其中可能機(jī)制。 方法 1.建立大鼠血漿中DEHP和其主要代謝產(chǎn)物MEHP簡(jiǎn)單、快速及高效的液相色譜(HPLC)檢測(cè)方法。 2.檢測(cè)在大鼠體內(nèi)吐溫80對(duì)DEHP的生物利用度的影響。 3.選用Caco-2細(xì)胞模型模擬腸道環(huán)境進(jìn)行吐溫80促進(jìn)吸收的機(jī)理研究。以JC-1熒光探針研究吐溫80對(duì)Caco-2細(xì)胞線粒體膜電位的影響；運(yùn)用XF98線粒體功能檢測(cè)系統(tǒng)研究吐溫80對(duì)細(xì)胞線粒體能量產(chǎn)生和線粒體呼吸鏈的影響,進(jìn)而探討對(duì)能量依賴的P-gp外排泵的作用。 結(jié)果 1.在同一色譜條件下,圖譜中DEHP. MEHP.內(nèi)標(biāo)DNHP及血漿中內(nèi)源性物質(zhì)均分離完全,峰形正常。DEHP和MEHP的保留時(shí)間分別約為20min和3.4min。內(nèi)標(biāo)物DNHP的保留時(shí)間為24min,其它雜峰為內(nèi)源性物質(zhì)。在所建立的HPLC條件下,血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾DEHP、MEHP和內(nèi)標(biāo)物DNHP的測(cè)定,為本課題之后毒代動(dòng)力學(xué)研究打下基礎(chǔ)。 2.毒代動(dòng)力學(xué)結(jié)果表明聯(lián)合染毒,吐溫80可明顯增強(qiáng)DEHP的腸道吸收及生物利用度。 3.吐溫80通過(guò)時(shí)間及濃度依賴性降低線粒體膜電位、耗竭胞內(nèi)ATP、降低電子傳遞鏈活性對(duì)Caco-2細(xì)胞線粒體功能產(chǎn)生影響。進(jìn)而使能量依賴的P-gp的外排作用減少,增加鄰苯二甲酸酯的吸收。 結(jié)論 吐溫80能顯著增加大鼠DEHP的吸收,提高其體內(nèi)DEHP及MEHP的生物利用度。其機(jī)理可能由于吐溫80對(duì)小腸上皮細(xì)胞中線粒體功能造成損傷、抑制了細(xì)胞中能量依賴性的P-gp的外排作用有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：鄰苯二甲酸酯 食品乳化劑 吐溫80 毒代動(dòng)力學(xué) 吸收 P糖蛋白 線粒體
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R333.3
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表3-4
• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述11-27
• 第1章 鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)的研究進(jìn)展12-17
• 1.1 鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯的毒代動(dòng)力學(xué)與毒性效應(yīng)12-14
• 1.2 DEHP的吸收,分布和代謝14-15
• 1.2.1 DEHP的吸收14-15
• 1.2.2 DEHP的分布15
• 1.2.3 DEHP的代謝15
• 1.3 DEHP的毒性作用15-17
• 第2章 食品乳化劑對(duì)胃腸道功能的影響17-22
• 2.1 食品乳化劑的用途17
• 2.2 食品乳化劑對(duì)胃腸道屏障的影響17-20
• 2.2.1 第一層保護(hù)：疏水性粘液層17-18
• 2.2.2 跨細(xì)胞通道：上皮細(xì)胞膜18-19
• 2.2.3 環(huán)境毒物有效的防線：P-gp蛋白19
• 2.2.4 細(xì)胞旁通道：緊密連接19-20
• 2.3 吐溫80的研究進(jìn)展20-21
• 2.3.1 吐溫80的理化性質(zhì)及應(yīng)用20
• 2.3.2 吐溫80對(duì)P-gp的影響20-21
• 2.4 食品乳化劑實(shí)際應(yīng)用及協(xié)同效應(yīng)21-22
• 第3章 P-gp的研究進(jìn)展22-27
• 3.1 外排性轉(zhuǎn)運(yùn)體：P-gp22-23
• 3.1.1 P-gp的結(jié)構(gòu)和分布22
• 3.1.2 P-gp的生理功能22-23
• 3.1.3 P-gp與藥代及毒代動(dòng)力學(xué)23
• 3.2 P-gp抑制劑的研究概況23-24
• 3.2.1 傳統(tǒng)P-gp抑制劑23
• 3.2.2 輔料作為P-gp抑制劑23-24
• 3.3 輔料抑制劑的作用機(jī)制24-25
• 3.3.1 改變細(xì)胞膜的流動(dòng)性24
• 3.3.2 抑制P-gp的ATP酶活性24
• 3.3.3 降低細(xì)胞內(nèi)ATP水平24-25
• 3.3.4 下調(diào)P-gp的表達(dá)25
• 3.3.5 降低細(xì)胞膜膽固醇含量25
• 3.4 P-gp與線粒體的研究概況25-27
• 3.4.1 膜電位25-26
• 3.4.2 能量關(guān)系26
• 3.4.3 ROS水平26-27
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究27-51
• 第4章 大鼠血漿中DEHP的HPLC檢測(cè)方法學(xué)研究28-35
• 4.1 前言28
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 4.2.1 儀器28
• 4.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑28-29
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法29-30
• 4.3.1 溶液配制29
• 4.3.2 色譜條件29
• 4.3.3 樣品預(yù)處理29
• 4.3.4 工作曲線29
• 4.3.5 提取回收率和方法回收率29-30
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-34
• 4.4.1 方法專屬性30-31
• 4.4.2 工作曲線及檢測(cè)限31-33
• 4.4.3 回收率與精密度33-34
• 4.5 小結(jié)34-35
• 第5章 吐溫80對(duì)DEHP的毒代動(dòng)力學(xué)及生物利用度的影響35-40
• 5.1 前言35-36
• 5.2 實(shí)驗(yàn)材料36
• 5.2.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑36
• 5.2.2 受試動(dòng)物36
• 5.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器36
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法36-37
• 5.3.1 給藥和采樣36-37
• 5.3.2 血漿樣品處理及測(cè)定37
• 5.3.3 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算37
• 5.3.4 相對(duì)生物利用度的計(jì)算37
• 5.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析37
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-39
• 5.4.1 專屬性實(shí)驗(yàn)結(jié)果37
• 5.4.2 血藥濃度37-38
• 5.4.3 毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)38-39
• 5.5 小結(jié)39-40
• 第6章 吐溫80促進(jìn)DEHP吸收的機(jī)理研究40-51
• 6.1 前言40
• 6.2 實(shí)驗(yàn)材料40-41
• 6.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑40
• 6.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器40-41
• 6.3 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 6.3.1 吐溫80對(duì)Caco-2細(xì)胞株的細(xì)胞毒性研究41
• 6.3.2 吐溫80對(duì)線粒體膜電位影響研究41
• 6.3.3 線粒體呼吸能量功能分析41-42
• 6.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析42
• 6.4 結(jié)果42-47
• 6.4.1 吐溫80對(duì)Caco-2細(xì)胞生存率的影響42-43
• 6.4.2 吐溫80對(duì)線粒體膜電位影響的研究43-45
• 6.4.3 線粒體呼吸功能分析45-47
• 6.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析47
• 6.5 討論47-49
• 6.6 小結(jié)49-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果58-59
• 致謝59

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本文編號(hào)：649766