發(fā)布時間：2017-08-07 21:11

  本文關(guān)鍵詞：100株中國HBV全長基因序列的克隆及分析

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【摘要】：[目的]：不同基因型的HBV可能有不同的生物學(xué)特性,病毒基因型可能與長期感染的病程進(jìn)展及對干擾素的治療反應(yīng)有關(guān)。目前我國HBV全長序列較少,本研究通過建立一種高效快速的HBV全基因組克隆方法,進(jìn)行病毒基因序列測定并獲取一定數(shù)量的HBV全長序列基因,為實現(xiàn)HBV結(jié)構(gòu)和功能蛋白特異性原核表達(dá)做準(zhǔn)備,利用序列分析軟件對得到的序列進(jìn)行基本的型別分析,分析不同基因型之間的區(qū)別及聯(lián)系,從而豐富我國的HBV全長基因庫,為HBV基因特點與HBV變異研究、HBV藥物及疫苗研究以及乙型肝炎的個體化治療提供參考依據(jù)。 [方法]：收集100份HBV-DNA陽性的慢性HBV感染者血清標(biāo)本,提取HBV全基因組,從Genbank中下載100條HBV全長序列作為引物設(shè)計參考,設(shè)計合適的特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增,用一步法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)得至HBV PCR產(chǎn)物,與合適的載體進(jìn)行快速連接,通過藍(lán)白斑篩選挑出正確的單克隆進(jìn)行測序得到HBV全長序列,利用序列分析軟件對所得到的全長序列進(jìn)行基本的分析。 [結(jié)果]：建立了一種區(qū)別于傳統(tǒng)TA克隆的連接方法,利用兩對引物可直接將HBV全長序列(插入片段)與pMD18T(T載體)進(jìn)行連接,提高了連接效率與成功率；從乙型肝炎患者血清中提取了HBV基因組DNA,經(jīng)PCR擴(kuò)增得到預(yù)期大小的全長基因；構(gòu)建重組pMD18T-HBV載體,經(jīng)酶切證實具有與日標(biāo)片段長度相符的插入片段：在已經(jīng)向NCBI提交的51株HBV全長序列,測序結(jié)果分析顯示,B基因型18例(35.29%),C基因型33例(64.70%),沒有B+C型,發(fā)現(xiàn)YMDD耐藥株3例。 [結(jié)論]：利用高效的克隆連接方法,可以大大簡化插入片段與載體的連接步驟,提高效率與成功率�？寺×薍BV DNA中國株的全基因序列,可以作為研究中HBV流行株的參考序列。對完成克隆的51株HBV全長序列分析,發(fā)現(xiàn)全部為B型與C型,未發(fā)現(xiàn)其他基因型。由于樣本量較小,且人口流動性較大,無法對地域方面的流行病學(xué)特征做進(jìn)一步的分析。
【關(guān)鍵詞】：肝炎病毒 乙型 HBV全基岡組克隆 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373.21;R3416
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 中文摘要6-7
• ABSTRACT7-8
• 前言8-11
• 材料與方法11-13
• 1. 材料11-12
• 2. 方法12-13
• 結(jié)果13-27
• 1. HBV全基因組序列引物的設(shè)計13-14
• 2. 新型載體連接方法的建立14-16
• 3. 質(zhì)粒的構(gòu)建16-20
• 4. 序列分析結(jié)果20-27
• 討論27-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 附錄35-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況67-68
• 致謝68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 邊濤;沈立萍;王峰;王岳;張麗文;張勇;畢勝利;;一株重組乙型肝炎病毒的全基因克隆和序列分析[J];病毒學(xué)報;2008年04期

2 徐煙青,周永東,畢勝利;我國藏族居民乙型肝炎病毒基因型的初步研究[J];中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志;2005年02期

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本文編號：636716