本文關(guān)鍵詞：人腺病毒南京、湖南、蘭州地方株型別鑒定及Hexon全基因序列進化分析

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【摘要】：研究目的： 1.了解2009-2012年南京、湖南及蘭州三個地區(qū)人腺病毒(human adenovirus, HAdV)的分子流行病學特征,為我國急性呼吸道感染的防治提供理論數(shù)據(jù)。 2.分離鑒定南京、湖南及蘭州三個地區(qū)HAdV的陽性株,深入研究腺病毒Hexon基因的結(jié)構(gòu),分析其分子進化特征,對今后開發(fā)研究腺病毒載體、疫苗和抗腺病毒藥物提供理論依據(jù)。 研究對象和方法： 1.采集南京、湖南(2010年8月-2012年7月)和蘭州(2009年12月-2011年11月)三個地區(qū)確診為急性呼吸道感染的門診和住院患兒鼻炎抽吸物和咽試子標本共3530份。 2.采用普通巢式PCR (Nest-PCR)對這3530份標本進行人腺病毒檢測。 3.對549份人腺病毒陽性標本,隨機抽選382份分別進行Hela細胞、293T細胞和A549細胞培養(yǎng)分離,并進行HAdV株分離及血清學鑒定。對培養(yǎng)分離成功的39株人腺病毒株進行Hexon基因全序列測定,并與GenBank已知序列進行比對及進化分析。 研究結(jié)果： 1.2010-2012年南京市兒童醫(yī)院人腺病毒檢出率為19.6%(253/1291),湖南省兒童醫(yī)院人腺病毒檢出率為14.0%(164/1170),2009-2011年蘭州大學第一醫(yī)院兒科人腺病毒檢出率為12.3%(132/1069)。 2.382份腺病毒陽性標本分離腺病毒39株,分別是南京25株,湖南9株,蘭州5株,通過PCR及BLAST比對分型顯示：腺病毒1型(HAdV-1)6株,HAdV-2型6株,HAdV-3型9株,HAdV-4型1株,HAdV-5型3株,HAdV-7型13株,HAdV-21型1株。 3.39株腺病毒Hexon基因擴增全長約2800bp,編碼約900個氨基酸。7個不同的血清型與GenBank中的參考株比對發(fā)現(xiàn),南京HAdV1-5, HAdV-7和HAdV-21不同血清型的同源性為68%-100%,差異性為0%-37.4%；湖南分離株與GenBank中的參考株的同源性為69.2%-100%,差異性為0%-35.5%；蘭州的分離株和GenBank參考株對比分析得到核苷酸序列同源性為63.1%-100%,差異性為0%-34.2%。 研究結(jié)論： 1.南京、湖南、及蘭州三個地區(qū)連續(xù)兩年檢測引起嬰幼兒急性呼吸道感染的人腺病毒檢出率均大于10%(19.6%,14.0%,12.3%),僅次于呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syneytial virus, RSV)。提示人腺病毒是這三個地區(qū)兒童呼吸道感染的主要病原體。 2.HAdV感染全年均都可發(fā)生,無明顯的季節(jié)差異性,多感染5歲以下的嬰幼兒。2010-2012年南京和湖南、2009-2010年蘭州的優(yōu)勢流行株均以HAdV-3和HAdV-7為主,其他少見的血清型HAdV-1, HAdV-2, HAdV-5, HAdV-6, HAdV-11, HAdV-31, HAdV-57有檢出,但檢出率較低。 3.分離培養(yǎng)人腺病毒株主要以B組HAdV-7型為主,占總分離株的33.3%(13/39), HAdV-3型為輔,21型比較少見,C組主要有HAdV-1, HAdV-2, HAdV-5也較常見,E組的HAdV-4只有1株。 4.39株分離株的Hexon全基因序列與GenBank中的其他序列比較,有較高同源性,但也有個別核苷酸和氨基酸的替換和變異,而這些替換和變異主要存在于中和性抗原Hexon蛋白的保守區(qū),高變區(qū)未出現(xiàn)明顯的變異,這對今后開發(fā)研究人腺病毒載體、疫苗和抗腺病毒藥物具有重要的指導意義。 研究結(jié)論： 1.南京、湖南、和蘭州三個地區(qū)連續(xù)兩年檢測引起嬰幼兒急性呼吸道感染的相關(guān)病毒,人腺病毒檢出率均大于10%(19.6%,14.0%,12.3%),僅次于呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syneytial virus, RSV)。提示HAdV是這三個地區(qū)兒童呼吸道感染的主要病原體。 2. HAdV感染全年均都可發(fā)生,無明顯季節(jié)分布,多感染3歲以下的嬰幼兒。2010-2012兩年南京和湖南、2009-2010兩年蘭州的優(yōu)勢流行株都主要HAdV-3和HAdV-7,其他少見的血清型HAdV-1, HAdV-2, HAdV-5, HAdV-6, HAdV-11, HAdV-31, HAdV-57也都有檢出,檢出率較低。 3.分離培養(yǎng)人腺病毒株主要以B組的HAdV-7型為主,占總分離株的1/3(13/39),HAdV-3型為輔,21型比較少見,C組主要有HAdV-1, HAdV-2, HAdV-5也較常見,E組的HAdV-4只有1株。 4.39株陽性分離株的Hexon全基因序列與GenBank中的其他序列比較,有較高同源性,但也有個別核苷酸和氨基酸的替換和變異,而這些替換和變異主要存在于中和性抗原Hexon蛋白的保守區(qū),高變區(qū)未出現(xiàn)明顯的變異,這對今后開發(fā)研究人腺病毒載體、疫苗和抗腺病毒藥物具有重要的指導意義。
【關(guān)鍵詞】：人腺病毒 分離 鑒定 Hexon基因 序列分析
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R373.1;Q78
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 引言9-20
• 1.1 人腺病毒簡介9-14
• 1.2 腺病毒的疾病相關(guān)性14-18
• 1.3 Hexon基因特征研究的目的和意義18-20
• 第二章 南京、蘭州和湖南地區(qū)呼吸道感染腺病毒的檢測20-32
• 2.1 實驗材料20-21
• 2.2 實驗方法21-25
• 2.3 結(jié)果25-30
• 2.4 討論30-32
• 第三章 人腺病毒南京、蘭州、湖南株的培養(yǎng)分離鑒定與Hexon基因全長擴增32-47
• 3.1 實驗材料32-33
• 3.2 實驗方法33-37
• 3.3 結(jié)果37-45
• 3.4 討論45-47
• 第四章 結(jié)論47-48
• 4.1 重要結(jié)論47
• 4.2 研究展望47-48
• 參考文獻48-54
• 在學期間的研究成果54-55
• 致謝55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：633952