本文關(guān)鍵詞：基于IgG4介導(dǎo)的蛋白質(zhì)組學(xué)日本血吸蟲診斷標(biāo)志物的篩選及應(yīng)用

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【摘要】：目的血吸蟲病仍然是世界上危害最為嚴(yán)重的寄生蟲疾病，由于我國政府的高度重視，我國血吸蟲病疫情目前已達(dá)到基本控制階段，傳統(tǒng)的病原體直接檢測技術(shù)已失去了金標(biāo)準(zhǔn)作用，低流行區(qū)血吸蟲病的診斷遇到了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，提高監(jiān)測敏感性為導(dǎo)向的低流行區(qū)監(jiān)測技術(shù)是當(dāng)前的重中之重，而血吸蟲病的正確診斷是血吸蟲病監(jiān)控的第一步，也是最關(guān)鍵步驟。發(fā)展一種簡便、經(jīng)濟(jì)、敏感和特異，尤其適合現(xiàn)場大規(guī)模檢測的快速血吸蟲病診斷方法，為我國血吸蟲病的防控并最終消除提供重要的工具。 方法制作日本血吸蟲感染動物模型，，收集日本血吸蟲成蟲；制備日本血吸蟲成蟲抗原（AWA），進(jìn)行兩維電泳（2-DE），再雇傭western-blot方法、用混合的血吸蟲感染患者血清篩選，最后用抗人IgG4二抗檢測血吸蟲成蟲抗原中能夠與患者血清中IgG4抗體反應(yīng)的抗原分子。切取這些與患者血清中IgG4結(jié)合的抗原分子用胰酶消化，進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，并進(jìn)行進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析，尋找具有診斷價值的候選分子，并克隆重組候選分子。最后將重組抗原包被反應(yīng)板，用基于IgG4二抗作為檢測工具的ELISA方法，來評估候選抗原在血吸蟲病診斷中的應(yīng)用價值。 結(jié)果建立了日本血吸蟲成蟲兩維電泳圖譜，western-blot結(jié)果顯示，基于IgG4為檢測工具的血清蛋白組學(xué)篩選出40多個具有免疫反應(yīng)性的陽性蛋白點(diǎn)，其中有16個點(diǎn)能夠與原始的2-DE凝膠相對應(yīng)。質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明，這16個點(diǎn)分屬于10個蛋白質(zhì)，它們分別是日本血吸蟲順烏頭酸酶（SjAA）、熱休克蛋白70（SjHSP70）、M2型丙酮酸激酶（SjPKM2）、磷酸甘油酸酯激酶（SjPGK1）、α-L-巖藻糖苷酶（SjALF）、無機(jī)焦磷酸酶（SjIPP）、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（SjGST）、日本血吸蟲21.7kDa抗原（Sj21.7）、22.6kDa膜相關(guān)抗原（Sj22.6）和曼氏血吸蟲肌漿鈣結(jié)合蛋白（SmSCP）。通過生物信息學(xué)分析，SjIPP具有多種潛在的生物學(xué)功能，更重要的是，SjIPP含有豐富的B細(xì)胞抗原表位，可能預(yù)示，SjIPP在血吸蟲病的疫苗開發(fā)和診斷應(yīng)用中具有良好的前景。進(jìn)一步，我們成功克隆并原核表達(dá)出了重組SjIPP（rSjIPP），而且純化的rSjIPP純度好，濃度也達(dá)到了3.5mg/ml。ELISA結(jié)果顯示，rSjIPP對急性血吸蟲感染診斷的敏感性極高，達(dá)到了100%，對慢性血吸蟲感染診斷也較高，其敏感性為87.1%，其特異性為95%；可喜的是，與其它寄生蟲的交叉反應(yīng)較低，分別是肺吸蟲為3.7%、肝吸蟲為4.5%、線蟲為4.2%。 結(jié)論利用IgG4為檢測工具的血清蛋白質(zhì)組學(xué)，成功從日本血吸蟲成蟲中篩選出了SjIPP診斷候選分子，并成功重組出rSjIPP。ELISA結(jié)果證明，rSjIPP在血吸蟲病的診斷中具有良好的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：日本血吸蟲 蛋白質(zhì)組學(xué) IgG4 無機(jī)焦磷酸酶（IPP） 診斷
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R383.24
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 1. 材料與方法12-34
• 1.1 實(shí)驗材料12-18
• 1.2 實(shí)驗方法18-34
• 2. 結(jié)果34-56
• 2.1 AWA 抗原濃度34-35
• 2.2 AWA 的血清蛋白質(zhì)組學(xué)分析35-37
• 2.3 免疫反應(yīng)性抗原的質(zhì)譜鑒定37-45
• 2.4 SjIPP 生物信息學(xué)分析45-47
• 2.5 SjIPP 克隆、表達(dá)及鑒定47-51
• 2.6 rSjIPP 的誘導(dǎo)表達(dá)51-52
• 2.7 rSjIPP 的免疫學(xué)鑒定52-53
• 2.8 rSjIPP 純化53-54
• 2.9 rSjIPP 在血吸蟲病診斷中的評估54-56
• 3 討論56-58
• 4 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 個人簡歷64-65
• 致謝65-66
• 綜述66-78
• 參考文獻(xiàn)73-78

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 吳福東,謝治民,袁斯姣,趙清海,郭家鋼,董長安,潘炳榮,黃文長,周憲民;間接血凝試驗診斷血吸蟲病的研究[J];中國血吸蟲病防治雜志;1991年03期

2 宋鴻燾,梁幼生,戴建榮,紀(jì)長生,神學(xué)慧,李龍根,殷芳;膠體染料試紙條法用于血吸蟲病低度流行區(qū)化療對象篩查的研究[J];中國血吸蟲病防治雜志;2003年02期

3 何偉;朱蔭昌;梁幼生;戴建榮;徐明;唐建霞;曹國群;華萬全;李遠(yuǎn)林;楊忠;;糞檢與免疫診斷方法檢測日本血吸蟲感染效果比較[J];中國血吸蟲病防治雜志;2007年02期

4 鄭浩;張利娟;朱蓉;許靜;李石柱;郭家鋼;肖寧;周曉農(nóng);;2011年全國血吸蟲病疫情通報[J];中國血吸蟲病防治雜志;2012年06期

本文編號：633780