本文關(guān)鍵詞：小腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞在抵抗鼠傷寒沙門氏菌感染中的作用

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【摘要】：研究目的： 腸道是接觸大量食物抗原和微生物定居的主要場所。腸道黏膜免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御腸道病原體感染的第一道防線,同時也在宿主與外環(huán)境間建立和維持穩(wěn)態(tài)平衡中發(fā)揮重要的作用。鼠傷寒沙門氏菌是主要的腸道致病菌,是導(dǎo)致食物來源的疾病和腹瀉的常見病因,其致病因子主要包括毒力島SPI、pSLT毒力質(zhì)粒、粘附素、鞭毛等。腸道免疫細(xì)胞在抵抗病原菌感染中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。腸道粘膜上皮層由上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(IELs)和上皮細(xì)胞(IECs)組成,大約每6-10個上皮細(xì)胞中就有一個上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞,上皮細(xì)胞和上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞共同形成了腸道抵抗外界感染的第一道屏障。 腸上皮在腸道黏膜的免疫反應(yīng)過程中起關(guān)鍵性作用,是阻止過量病原菌和其他抗原由腸腔進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)的一道關(guān)鍵的物理屏障。已有研究表明腸上皮細(xì)胞通過細(xì)胞間緊密連接以及細(xì)胞因子和抗菌肽的分泌,抵抗病原菌的侵襲。腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞是一類獨(dú)特的殺傷性淋巴細(xì)胞群,通過維持上皮細(xì)胞的屏障功能,調(diào)節(jié)獲得性和天然免疫,抵抗病原菌感染。因此,腸上皮細(xì)胞和上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞在抵抗病原菌感染中均能發(fā)揮重要作用。同時上皮細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子如IL-15對CD8aαα+IEL細(xì)胞的比例及功能有重要影響,并能促進(jìn)腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞細(xì)胞凋亡相關(guān)分子Bcl-2和Bcl-xl的表達(dá),影響上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞的功能。腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞高表達(dá)IFN-γ和TNF-α影響上皮細(xì)胞的緊密連接分子的表達(dá)。但是,目前對腸上皮細(xì)胞和上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞相互調(diào)節(jié)在抵抗病原菌感染中的作用的研究尚少。本研究通過腸道感染模型的建立,觀察小鼠經(jīng)口感染鼠傷寒沙門氏菌后腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞在抵抗病原菌感染中發(fā)揮的作用,并探討其清除感染病原菌過程中是否存在相互調(diào)節(jié)作用,為腸道感染性疾病的治療提供新的方向。 方法： 1.灌胃感染鼠傷寒沙門氏菌,建立小鼠腸道感染模型。通過小鼠體重、腸外觀、HE染色和載菌量檢測感染模型是否成功建立。 2. Western Blot和定量PCR檢測鼠傷寒沙門氏菌感染后上皮細(xì)胞炎癥小體(NLRP3、NLRC4)表達(dá)的變化。 3. Western Blot和定量PCR檢測鼠傷寒沙門氏菌感染后上皮細(xì)胞抗菌肽(β-defensin3、β-defensin4)的表達(dá)變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測抗菌物質(zhì)ROS的表達(dá)變化。 4.流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠感染鼠傷寒沙門氏菌后,IELs活化分子(CD44、CD69)及殺傷相關(guān)分子(NKG2D、CD107a、IFN-γ)的表達(dá)變化。 5.流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-1β刺激IELs后對其表達(dá)活化及殺傷相關(guān)分子的影響。 6.LDH法檢測IL-1p刺激IELs后對其殺傷感染上皮細(xì)胞的影響。 7.LDH法檢測加入anti-IL-1β阻斷抗體后,IELs對鼠傷寒沙門氏菌感染上皮細(xì)胞殺傷效率的變化。 8.Tranwell法檢測感染上皮細(xì)胞對IELs趨化能力的影響。 結(jié)果： 1.成功建立鼠傷寒沙門氏菌腸道感染模型。 2.鼠傷寒沙門氏菌感染后小腸上皮細(xì)胞后炎癥小體NLRP3和NLRC4的表達(dá)上調(diào),caspase-1的活化增加,成熟IL-1p的分泌增加。 3.鼠傷寒沙門氏菌感染小腸上皮細(xì)胞后抗菌物質(zhì)ROS、defensin-β3和defensin-β4表達(dá)上調(diào)。 4.鼠傷寒沙門氏菌感染時CD8α+TCRγδ+IELs亞群的比例增加,同時活化相關(guān)分子(CD44、CD69)和殺傷相關(guān)分子(NKG2D、CD107a、IFN-γ)的表達(dá)上調(diào)。 5.鼠傷寒沙門氏菌感染腸道后CD8αα+IELs、CD8αβ+IELs活化相關(guān)分子(CD44、CD69)和殺傷相關(guān)分子(NKG2D、CD107a、IFN-γ)表達(dá)上調(diào)。 6.鼠傷寒沙門氏菌感染后IELs對上皮細(xì)胞的殺傷能力明顯增強(qiáng)。 7.體外加入IL-1β促進(jìn)IELs對傷寒感染上皮細(xì)胞的殺傷能力。 8.傷寒感染的上皮細(xì)胞產(chǎn)生的趨化因子促進(jìn)對IELs的趨化。 結(jié)論： 1.小腸上皮細(xì)胞通過炎癥小體的活化和抗菌物質(zhì)的分泌,在抵抗鼠傷寒沙門氏菌感染中發(fā)揮重要作用。 2.IELs,尤其是CD8α+TCRγδ+IELs亞群,在抵抗鼠傷寒沙門氏菌感染中發(fā)揮重要作用。 3.IL-1β能促進(jìn)IELs對鼠傷寒沙門氏菌感染上皮細(xì)胞的殺傷。 4.趨化因子能促進(jìn)上皮細(xì)胞對IELs的募集,有利于IELs細(xì)胞對傷寒感染上皮細(xì)胞的殺傷。
【關(guān)鍵詞】：鼠傷寒沙門氏菌 上皮細(xì)胞 上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞 白介素-1β
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R378
【目錄】：

• 中文摘要8-11
• Abstract11-14
• 主要符號說明14-16
• 文獻(xiàn)綜述16-38
• 1. 鼠傷寒沙門氏菌16-17
• 2. 炎癥小體和鼠傷寒沙門氏菌感染的關(guān)系17-19
• 2.1 炎癥小體簡介17-19
• 2.2 炎癥小體和鼠傷寒沙門氏菌的感染的關(guān)系19
• 3. 腸道免疫屏障的組成和功能特點(diǎn)19-25
• 3.1 腸道免疫屏障的組成20
• 3.2 上皮細(xì)胞的屏障功能20-25
• 3.3 固有層淋巴細(xì)胞25
• 3.4 派氏結(jié)25
• 4. 小結(jié)25-27
• 參考文獻(xiàn)27-38
• 前言38-41
• 材料和方法41-55
• (一) 實驗材料41-44
• (二) 主要試劑配制44-45
• (三) 主要實驗儀器45-46
• (四) 主要試驗方法46-55
• 實驗結(jié)果55-75
• 1. 鼠傷寒沙門氏菌感染腸道模型的建立55-56
• 2. 小腸上皮細(xì)胞在抵抗鼠傷寒沙門氏菌感染中發(fā)揮重要作用56-62
• 2.1 小腸上皮細(xì)胞感染鼠傷寒沙門氏菌后炎癥小體的表達(dá)變化56-60
• 2.2 上皮細(xì)胞分泌的抗菌物質(zhì)在抵抗鼠傷寒沙門氏菌中的作用60-62
• 3. IELs在抵抗鼠傷寒沙門氏菌感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用62-67
• 3.1 鼠傷寒沙門氏菌感染后IELs分群及活化的變化62-65
• 3.2 鼠傷寒沙門氏菌感染后IELs細(xì)胞殺傷功能的變化65-67
• 4. IL-1β促進(jìn)IELs對傷寒感染的上皮細(xì)胞的殺傷67-71
• 5. 小腸上皮細(xì)胞通過分泌趨化因子促進(jìn)IELs到腸道感染部位募集71-75
• 討論75-78
• 參考文獻(xiàn)78-82
• 總結(jié)82-83
• 文章創(chuàng)新點(diǎn)83-84
• 致謝84-85
• 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果85-86
• 待發(fā)表中文綜述86-95
• 參考文獻(xiàn)91-95
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表95

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 徐凱進(jìn),李蘭娟;腸道正常菌群與腸道免疫[J];國外醫(yī)學(xué).流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊;2005年03期

2 徐昕怡;張s，

本文編號：632555