本文關(guān)鍵詞：家蠅溶菌酶MDLZM基因克隆、表達(dá)和序列分析

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【摘要】：目的探討家蠅溶菌酶(MDLZM)基因及編碼的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和特征。方法利用美國國家生物技術(shù)信息中心和瑞士生物信息學(xué)研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)中有關(guān)基因和蛋白序列的分析工具,結(jié)合其他生物信息學(xué)分析軟件包,從Gen Bank上家蠅基因組序列識別出編碼MDLZM的基因,分析預(yù)測該蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能;設(shè)計(jì)引物PCR擴(kuò)增MDLZM基因,將其克隆到原核表達(dá)質(zhì)粒PEASY-E1中,重組質(zhì)粒在大腸桿菌中的表達(dá)產(chǎn)物用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定。結(jié)果 MDLZM基因序列最大開放閱讀框(ORF)為435 bp,編碼145個(gè)氨基酸,理論分子量為15 958.4 Da,等電點(diǎn)為8.65;構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、雙酶切及測序鑒定確為MDLZM基因;SDS-PAGE分析結(jié)果顯示,重組質(zhì)粒可在大腸桿菌Origmi B/DE3中表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物純化后得到的融合蛋白相對分子質(zhì)量約為15958.4 Da,誘導(dǎo)18 h蛋白表達(dá)量最高,SDS-PAGE鑒定得到的蛋白條帶與目的蛋白大小相符。結(jié)論成功構(gòu)建PEASY-E1-MDLZM重組原核表達(dá)質(zhì)粒并表達(dá)出融合MDLZM蛋白。
【作者單位】： 貴陽醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室;皖北礦務(wù)局煤電集團(tuán)總醫(yī)院普外科;貴州省疾病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 家蠅 家蠅溶菌酶(MDLZM) 克隆 表達(dá) 序列分析
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81360254) 國家科技支撐計(jì)劃課題(2011BAC06B12)
【分類號】：R384.2
【正文快照】： 溶菌酶(lysozyme,LZM)在機(jī)體的先天免疫中發(fā)揮重要作用,具有破壞菌體胞壁,導(dǎo)致細(xì)菌死亡的作用。廣泛分布于生物體的體液、組織液[1]。根據(jù)來源不同分為:T4噬菌體溶菌酶、植物溶菌酶、微生物溶菌酶和動(dòng)物溶菌酶,動(dòng)物溶菌酶細(xì)分為:C型(chicken-lysozyme type)、G型(goose-type)[

【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：618886