本文關(guān)鍵詞：熒光蛋白報告載體觀察剛地弓形蟲SAGl、MIC3、ROP2雞尾酒DNA疫苗的表達(dá)及其免疫原性的研究

  更多相關(guān)文章： 剛地弓形蟲 基因重組 表面抗原 微線體蛋白 棒狀體蛋白 雞尾酒疫苗 免疫原性

【摘要】：目的構(gòu)建能同時表達(dá)多個基因的剛地弓形蟲DNA雞尾酒疫苗并初步觀察其免疫原性。方法從基因組DNA擴(kuò)增剛地弓形蟲表面抗原(surface antigen,SAG)、微線體蛋白(microneme,MIC)和棒狀體蛋白(rhoptry protein,ROP)基因片段,克隆到真核熒光表達(dá)載體pShuttle-CMV-MCS-EF1α-Am Cyan,pLVX-IRES-Zsgreen及pLVX-IRES-rfp中,構(gòu)建pShuttle-SAG1,pLVX-Zsgreen-MIC3和pLVX-rfp-ROP2表達(dá)質(zhì)粒。通過聚乙烯亞胺法用混合質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293F細(xì)胞48 h,熒光顯微鏡下觀察3個基因的表達(dá)情況。將30只C57BL/6雄性小鼠隨機分為A、B、C組,分別肌內(nèi)注射生理鹽水(50μl)、pShuttle+pLVX-Zsgreen+pLVX-rfp混合空質(zhì)粒(2μg/μl,各17μl)、pShuttle-SAG1+pLVX-Zsgreen-MIC3+pLVX-rfp-ROP2混合重組質(zhì)粒(2μg/μl,各17μl)。免疫28 d后,ELISA檢測血清抗剛地弓形蟲IgG抗體水平,初步評價該疫苗的免疫原性。結(jié)果從剛地弓形蟲基因組成功擴(kuò)增出1、1.1及1.7 kb的SAG1、MIC3和ROP2序列。成功構(gòu)建了pShuttle-SAG1、pLVX-Zsgreen-MIC3和pLVX-rfp-ROP2真核熒光表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293F細(xì)胞后觀察到相應(yīng)的藍(lán)、綠、紅報告熒光。免疫小鼠后28 d,ELISA測得A、B、C組IgG抗體的吸光度(A450值)分別為(0.620±0.029)、(0.741±0.040)、(1.561±0.131),C組顯著高于A、B組(P0.01)。結(jié)論剛地弓形蟲SAG1、MIC3和ROP2基因混合重組質(zhì)粒組成的DNA雞尾酒疫苗能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生良好的免疫原性,且多個熒光蛋白真核表達(dá)載體能夠較好地指示目的基因的表達(dá)。
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學(xué)重點實驗室世界衛(wèi)生組織熱帶病合作中心;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲 基因重組 表面抗原 微線體蛋白 棒狀體蛋白 雞尾酒疫苗 免疫原性
【基金】：上海市衛(wèi)生局青年科研項目(No.20124Y038) 國家自然科學(xué)基金(No.81202301)~~
【分類號】：R382.5
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種呈世界性分布的機會性致病原蟲,是導(dǎo)致艾滋病、器官移植、惡性腫瘤等免疫功能受損或抑制患者死亡的病因之一。孕婦感染剛地弓形蟲可導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、畸胎,以及先天性腦、眼疾病等嚴(yán)重后果。由于一直沒有有效且不良反應(yīng)小的治療藥物,且在體

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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4 孔t，

本文編號：617070