本文關鍵詞：Sirt1對間充質干細胞成脂分化能力的調控

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【摘要】：間充質干細胞(MSC)是干細胞家族的成員之一,作為一種成體干細胞,MSC能分化為肌肉、脂肪、骨骼等成體細胞。近年來越來越的研究重點放在了MSC的自我跟新能力以及分化潛能的調控機制上。Nanog、sox2以及oct4被證實在MSC的干性維持中具有不可替代的作用。MSC在諸多研究中還被證實可以用于諸多疾病的治療,如神經性疾病、肺損傷、脊髓損傷以及在再生醫(yī)學領域。 沉默信號調節(jié)因子(sirt1)是近年發(fā)現(xiàn)的sirtuin家族成員之一,它在NAD+輔助下進行對靶基因的脫乙�；饔�,從而參與到機體諸多代謝通路當中。在sirt1對于干細胞的調控研究單中,諸多研究顯示sirt1是有利于干細胞的增殖和分化潛能保持的。在造血干細胞中sirt1也是起著維持功能以及避免DNA損傷等重要功能。但是關于sirt1在MSC中調控MSC的成脂分化的相關研究很少,相關機制并不清楚。 本文通過使用sirt1酶活的特異性抑制劑ex527,利用real-time pcr、β半乳糖苷酶染色以及油紅O染色等方法,研究了sirt1在MSC成脂分化中的作用。獲得如下結果： 1、Sirt1酶活抑制劑(ex527)可影響分化啟動后的MSC細胞的成脂分化效率；而Sirt1激動劑白藜蘆醇則不影響其分化效率； 2、抑制nampt酶活能顯著抑制C3H10t成脂分化的效率； 3、Sirt1抑制劑(NAM)處理分化中的C3H10t會加速細胞衰老； 4、Sirt1酶活抑制劑(ex527)除了引起C3H10t細胞成脂分化效率降低外,也導致炎癥信號通路相關基因(IL-6、cox2)的上調及自噬通路（atg5、atg7、beclin1)和蛋白酶體信號通路(foxo4、psmd11)相關基因的下調。
【關鍵詞】：MSC sirt1 成脂分化 細胞自噬 細胞衰老
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：Q25;R329
【目錄】：

• 摘要7-8
• ABSTRACT8-9
• 縮略語表9-10
• 1 前言10-28
• 1.1 間充質干細胞10-20
• 1.1.1 nanog、sox2、oct4對于干細胞的重要性10-13
• 1.1.2 MSC的成脂分化13-16
• 1.1.3 影響MSC分化的信號通路以及相關因子16-19
• 1.1.4 MSC的醫(yī)學應用前景19-20
• 1.2 沉默信號因子(sirt1)20-26
• 1.2.1 sirt1的相關功能21-23
• 1.2.2 sirt1與干細胞23-24
• 1.2.3 sirt1與成脂分化24-25
• 1.2.4 sirt1的抑制劑與激動劑25-26
• 1.3 研究目的與意義26-28
• 2 材料與方法28-33
• 2.1 實驗材料28
• 2.2 主要儀器、試劑和工作液28-30
• 2.2.1 主要儀器28
• 2.2.2 主要試劑28-29
• 2.2.3 主要工作液29
• 2.2.4 常用生物學軟件29-30
• 2.3 實驗方法30-33
• 2.3.1 細胞分離、培養(yǎng)及分化30
• 2.3.2 細胞轉染30
• 2.3.3 RNA提取及反轉錄30-31
• 2.3.4 實時熒光定量PCR31-32
• 2.3.5 骨髓間充質干細胞的分離32
• 2.3.6 數據處理及誤差分析32-33
• 3 結果與分析33-40
• 3.1 SIRT1在原代MSC中下調nanog及sox233-34
• 3.2 sirt1對C3H10t細胞系干性基因的調控34
• 3.3 抑制sirt1酶活對C3H10t細胞系成脂分化能力的影響34-36
• 3.4 白藜蘆醇以及Nampt抑制劑(Fk866)對于C3H10t成脂分化能力的影響36-37
• 3.5 NAM處理成脂分化中的C3H10t將會加速細胞衰老37-38
• 3.6 Sirt1抑制劑(ex527)處理啟動分化后的C3H10t細胞引起其它通路基因改變38-40
• 4 討論40-44
• 5 結論與創(chuàng)新點44-45
• 5.1 結論44
• 5.2 創(chuàng)新點44-45
• 參考文獻45-55
• 致謝55

【共引文獻】

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