本文關(guān)鍵詞：小鼠巨細胞病毒重復感染促進疾病進展

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【摘要】：目的在整體水平觀察小鼠巨細胞病毒（murinecytomegalovirus,MCMV）重復感染（reinfection）對MCMV全身播散性感染小鼠模型各器官病理損害程度及病毒滴度的影響，初步探討其促進疾病進展的免疫學機制。 方法 1、MCMV重復感染動物模型的建立及標本收集：將96只4周齡8-10g幼年雌性BALB/c小鼠隨機分成4組，分別為正常對照組（簡稱M組，DMEM/H+DMEM/H）、單次感染組（簡稱S組，DMEM/H+MCMVSmith）、兩次感染同株病毒組（簡稱SS組，MCMVSmith+MCMVSmith）、兩次感染不同株病毒組（簡稱SR組，MCMVSmith+MCMVRM461）。具體操作方法，給小鼠腹腔注射DMEM/H或者MCMVSmith病毒懸液，于第1次注射后第5天再次腹腔注射DMEM/H、MCMVSmith或者MCMVRM461病毒懸液，分別在第2次注射后的3d、7d、14d、28d無菌取唾液腺、肺臟、心臟、肝臟、腎臟、脾臟組織標本進行檢測。 2、各臟器病理損害程度評估：取各組織臟器進行石蠟切片和常規(guī)HE染色，不同臟器采用相應(yīng)的半定量標準進行病理損害程度評估。 3、各臟器感染性病毒滴度的檢測：采用標準蝕斑法檢測各組織臟器中的病毒滴度。 4、流式細胞術(shù)檢測Th1和Th2比率：收集各組脾臟，無菌分離脾細胞。采用滅活MCMV和PMA/I體外刺激培養(yǎng)6h后，流式細胞術(shù)檢測各組不同時間點脾細胞中Th1（CD4~+IFN-γ~+）和Th2（CD4~+IL-4~+）細胞的比率變化。 結(jié)果 1、感染后3d各組織臟器已出現(xiàn)明顯炎癥改變，除腎臟在感染后14d炎癥反應(yīng)最重外，余臟器組織在感染7d時最重，之后緩慢減輕，脾臟和唾液腺的病理損傷恢復最為迅速�？傮w而言，SS組和SR株組的炎癥改變程度較S組更嚴重。各感染組小鼠臟器的病變特點主要為：肺組織肺泡間隔增寬，肺泡間質(zhì)炎性細胞浸潤，肺泡內(nèi)可見出血，水腫，終末細支氣管上皮細胞脫落，毛細血管充血，在終末細支氣管上皮細胞核內(nèi)可見包涵體；肝組織肝細胞氣球樣變性，嗜酸性變，點灶狀壞死，門管區(qū)炎性細胞浸潤，肝細胞核內(nèi)可見病毒包涵體；腎組織為腎小球內(nèi)細胞增多，腫脹，包曼氏囊變窄,腎間質(zhì)少量炎性細胞浸潤，可見腎小管上皮細胞壞死及上皮細胞核內(nèi)包涵體；心肌組織為心肌細胞水腫，溶解壞死，心肌間質(zhì)少量炎性細胞浸潤，心肌細胞核內(nèi)可見包涵體；脾臟次級淋巴細胞增生，吞噬細胞浸潤，白髓病理性增生，嚴重時紅髓和白髓結(jié)構(gòu)破壞、組織壞死；唾液腺中出現(xiàn)炎性浸潤灶，嚴重時出現(xiàn)結(jié)構(gòu)的破壞。 2、感染后3d，MCMV主要播散臟器中檢出感染性病毒，，同期各組織臟器中病毒滴度以唾液腺最高，其次為肺臟組織，感染后7d，唾液腺和肺組織中病毒滴度達到峰值，隨后逐漸下降，于28d檢測不到。各時間點SS組和SR株組平均病毒滴度均高于S組，急性感染早期（3d）SR株組與SS組唾液腺滴度相比，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），而余時間點SR株組與SS組之間無明顯差異。各感染組腎臟在7d時檢出病毒，S組的病毒迅速被清除，14d檢測不出，而二次感染組感染后14d病毒滴度達到高峰，28d時測不到。肝臟組織在感染后3d檢出較低的病毒滴度，各感染組之間沒有明顯的差異。脾臟組織只在感染后3d的二次感染組偶有檢出，余時間點均未檢出。心臟各時間點均未檢出感染性病毒。 3、脾臟淋巴細胞中Th1（CD4~+IFN-γ~+）和Th2（CD4~+IL-4~+）細胞比率變化：在MCMV感染后3d、7d后，各感染組Th1（CD4~+IFN-γ~+）水平明顯高于對照組，且SS組和SR株組均高于S組水平（P0.05）；在14d和28d時，其水平迅速下降，與對照組比無明顯差異；在感染后3d、7d、14d，Th2（CD4~+IL-4~+）的水平均較低，在28d時，SR株組Th2（CD4~+IL-4~+）細胞比率明顯升高，高于正常對照和其他感染組。 結(jié)論 1、通過給BALB/c序貫注射Smith和RM461毒株可以成功建立小鼠的重復感染模型。 2、MCMV的重復感染能增加急性期宿主組織臟器中感染性病毒含量，并加重臟器病理損傷程度。在急性感染早期，不同MCMV毒株的重復感染較同一毒株的重復感染可導致更高的組織病毒載量。 3、MCMV的重復感染對宿主的不利影響可能跟早期Th1(CD4~+IFN-γ~+)的水平明顯增高導致炎性損傷和后期Th2(CD4~+IL-4~+)水平增高導致免疫抑制密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：巨細胞病毒 重復感染 組織病理 干擾素γ 白細胞介素4
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-16
• 材料和方法16-23
• 實驗結(jié)果23-36
• 討論36-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-48
• 綜述48-66
• 參考文獻57-66
• 致謝66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 徐翼;方峰;董永綏;向稚丹;李革;;小鼠巨細胞病毒全身播散型感染模型的建立[J];臨床兒科雜志;2008年06期

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本文編號：593649