本文關(guān)鍵詞：小鼠巨細(xì)胞病毒重復(fù)感染促進(jìn)疾病進(jìn)展

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【摘要】：目的在整體水平觀察小鼠巨細(xì)胞病毒（murinecytomegalovirus,MCMV）重復(fù)感染（reinfection）對(duì)MCMV全身播散性感染小鼠模型各器官病理?yè)p害程度及病毒滴度的影響，初步探討其促進(jìn)疾病進(jìn)展的免疫學(xué)機(jī)制。 方法 1、MCMV重復(fù)感染動(dòng)物模型的建立及標(biāo)本收集：將96只4周齡8-10g幼年雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分成4組，分別為正常對(duì)照組（簡(jiǎn)稱M組，DMEM/H+DMEM/H）、單次感染組（簡(jiǎn)稱S組，DMEM/H+MCMVSmith）、兩次感染同株病毒組（簡(jiǎn)稱SS組，MCMVSmith+MCMVSmith）、兩次感染不同株病毒組（簡(jiǎn)稱SR組，MCMVSmith+MCMVRM461）。具體操作方法，給小鼠腹腔注射DMEM/H或者M(jìn)CMVSmith病毒懸液，于第1次注射后第5天再次腹腔注射DMEM/H、MCMVSmith或者M(jìn)CMVRM461病毒懸液，分別在第2次注射后的3d、7d、14d、28d無(wú)菌取唾液腺、肺臟、心臟、肝臟、腎臟、脾臟組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。 2、各臟器病理?yè)p害程度評(píng)估：取各組織臟器進(jìn)行石蠟切片和常規(guī)HE染色，不同臟器采用相應(yīng)的半定量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理?yè)p害程度評(píng)估。 3、各臟器感染性病毒滴度的檢測(cè)：采用標(biāo)準(zhǔn)蝕斑法檢測(cè)各組織臟器中的病毒滴度。 4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th1和Th2比率：收集各組脾臟，無(wú)菌分離脾細(xì)胞。采用滅活MCMV和PMA/I體外刺激培養(yǎng)6h后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組不同時(shí)間點(diǎn)脾細(xì)胞中Th1（CD4~+IFN-γ~+）和Th2（CD4~+IL-4~+）細(xì)胞的比率變化。 結(jié)果 1、感染后3d各組織臟器已出現(xiàn)明顯炎癥改變，除腎臟在感染后14d炎癥反應(yīng)最重外，余臟器組織在感染7d時(shí)最重，之后緩慢減輕，脾臟和唾液腺的病理?yè)p傷恢復(fù)最為迅速�？傮w而言，SS組和SR株組的炎癥改變程度較S組更嚴(yán)重。各感染組小鼠臟器的病變特點(diǎn)主要為：肺組織肺泡間隔增寬，肺泡間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡內(nèi)可見(jiàn)出血，水腫，終末細(xì)支氣管上皮細(xì)胞脫落，毛細(xì)血管充血，在終末細(xì)支氣管上皮細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)包涵體；肝組織肝細(xì)胞氣球樣變性，嗜酸性變，點(diǎn)灶狀壞死，門(mén)管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)病毒包涵體；腎組織為腎小球內(nèi)細(xì)胞增多，腫脹，包曼氏囊變窄,腎間質(zhì)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞壞死及上皮細(xì)胞核內(nèi)包涵體；心肌組織為心肌細(xì)胞水腫，溶解壞死，心肌間質(zhì)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)包涵體；脾臟次級(jí)淋巴細(xì)胞增生，吞噬細(xì)胞浸潤(rùn)，白髓病理性增生，嚴(yán)重時(shí)紅髓和白髓結(jié)構(gòu)破壞、組織壞死；唾液腺中出現(xiàn)炎性浸潤(rùn)灶，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)的破壞。 2、感染后3d，MCMV主要播散臟器中檢出感染性病毒，，同期各組織臟器中病毒滴度以唾液腺最高，其次為肺臟組織，感染后7d，唾液腺和肺組織中病毒滴度達(dá)到峰值，隨后逐漸下降，于28d檢測(cè)不到。各時(shí)間點(diǎn)SS組和SR株組平均病毒滴度均高于S組，急性感染早期（3d）SR株組與SS組唾液腺滴度相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），而余時(shí)間點(diǎn)SR株組與SS組之間無(wú)明顯差異。各感染組腎臟在7d時(shí)檢出病毒，S組的病毒迅速被清除，14d檢測(cè)不出，而二次感染組感染后14d病毒滴度達(dá)到高峰，28d時(shí)測(cè)不到。肝臟組織在感染后3d檢出較低的病毒滴度，各感染組之間沒(méi)有明顯的差異。脾臟組織只在感染后3d的二次感染組偶有檢出，余時(shí)間點(diǎn)均未檢出。心臟各時(shí)間點(diǎn)均未檢出感染性病毒。 3、脾臟淋巴細(xì)胞中Th1（CD4~+IFN-γ~+）和Th2（CD4~+IL-4~+）細(xì)胞比率變化：在MCMV感染后3d、7d后，各感染組Th1（CD4~+IFN-γ~+）水平明顯高于對(duì)照組，且SS組和SR株組均高于S組水平（P0.05）；在14d和28d時(shí)，其水平迅速下降，與對(duì)照組比無(wú)明顯差異；在感染后3d、7d、14d，Th2（CD4~+IL-4~+）的水平均較低，在28d時(shí)，SR株組Th2（CD4~+IL-4~+）細(xì)胞比率明顯升高，高于正常對(duì)照和其他感染組。 結(jié)論 1、通過(guò)給BALB/c序貫注射Smith和RM461毒株可以成功建立小鼠的重復(fù)感染模型。 2、MCMV的重復(fù)感染能增加急性期宿主組織臟器中感染性病毒含量，并加重臟器病理?yè)p傷程度。在急性感染早期，不同MCMV毒株的重復(fù)感染較同一毒株的重復(fù)感染可導(dǎo)致更高的組織病毒載量。 3、MCMV的重復(fù)感染對(duì)宿主的不利影響可能跟早期Th1(CD4~+IFN-γ~+)的水平明顯增高導(dǎo)致炎性損傷和后期Th2(CD4~+IL-4~+)水平增高導(dǎo)致免疫抑制密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：巨細(xì)胞病毒 重復(fù)感染 組織病理 干擾素γ 白細(xì)胞介素4
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-16
• 材料和方法16-23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-36
• 討論36-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 綜述48-66
• 參考文獻(xiàn)57-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 徐翼;方峰;董永綏;向稚丹;李革;;小鼠巨細(xì)胞病毒全身播散型感染模型的建立[J];臨床兒科雜志;2008年06期

2 劉興樓;舒賽男;王慧;張慧娟;李革;方峰;;鼠巨細(xì)胞病毒感染小鼠感染性病毒滴度和基因表達(dá)的研究[J];臨床兒科雜志;2011年04期

3 葛海霞;劉興樓;舒賽男;李亞男;羅丹;方峰;;大蒜新素對(duì)全身播散型人巨細(xì)胞病毒感染小鼠臟器病變的治療作用[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2009年05期

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5 徐翼,方峰,董永綏,向稚丹,甄宏,易文龍,李革;大蒜新素治療小鼠巨細(xì)胞病毒性心肌炎作用研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2005年06期

本文編號(hào)：593649