本文關(guān)鍵詞：BAFF拮抗肽活性的研究

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【摘要】：BAFF為B淋巴細胞刺激因子，屬于腫瘤壞死因子超家族中的一員，在B淋巴細胞的發(fā)展，成熟，抗體分泌過程中起重要的作用，是正常機體免疫必不可少的。研究發(fā)現(xiàn)BAFF表達失調(diào)與許多疾病之間存在一定的聯(lián)系，如自身免疫缺陷、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、感染和惡性腫瘤等等。目前，，針對BAFF的拮抗劑主要有：抗BAFF抗體，BAFF受體抑制劑、BAFF相關(guān)免疫毒素等等。其中BAFF單克隆抗體-Belimumab已獲得美國FDA的批準，應(yīng)用于治療SLE疾病，這充分肯定了以BAFF為靶點治療疾病的可行性。但是，在BAFF拮抗劑的臨床應(yīng)用中，仍有很多問題有待解決，例如，穩(wěn)定性和副作用。本課題的主要目的是研究三個多肽對BAFF與其受體結(jié)合的抑制作用，進而探索小分子多肽作為BAFF拮抗劑的可行性，為BAFF拮抗肽的研發(fā)和臨床試驗提供參考。這三個多肽分別為TA、TC和BC，均為通過InsightII軟件，根據(jù)TACI-BAFF、BCMA-BAFF的相互作用所涉及到的關(guān)鍵的氨基酸殘基，結(jié)合分子對接法，而設(shè)計得到。 本課題主要的研究方法為，采用菌液PCR、重組質(zhì)粒雙酶切法和基因測序驗證重組子TACI-Fc和BCMA-Fc的正確性。之后轉(zhuǎn)入原核表達宿主細胞中，進行大量表達，最后通過蛋白A柱進行純化融合蛋白。通過間接ELISA試驗考察所得融合蛋白與BAFF的結(jié)合活性，最后通過競爭ELISA試驗研究多肽對BAFF-TACI和BAFF-BCMA結(jié)合的抑制作用。具體研究成果如下： （1）驗證了實驗室保存的pET28a-TACI-Fc和pET30a-BCMA-Fc重組子的正確性，并且成功進行了這兩個融合蛋白的原核系統(tǒng)可溶性表達。 （2）通過間接ELISA試驗考察了所得融合蛋白與BAFF的結(jié)合活性，并且確定了BAFF-TACI-Fc和BAFF-BCMA-Fc結(jié)合的最佳飽和濃度，分別為5ng/μL和30ng/μL。 （3）競爭ELISA試驗證明三個多肽TA、TC和BC都對BAFF-TACI和BAFF-BCMA結(jié)合有一定的抑制作用，并且不同多肽兩兩混合之后增強了抑制作用，抑制率隨著隨著多肽的濃度的增加而增大。當多肽的濃度為100ng/μL時，TA、TC、BC、TA+BC、TA+TC和BC+TC對BCMA-BAFF的抑制率分別為42.2%、44.8%、48.6%、46.4%、46.6%和56.3%；對TACI-BAFF的抑制率分別為30.8%、40.9%、40.3%、34.6%、43.9%和44.6%。為多肽的進一步研究打下了良好基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：BAFF 多肽 BAFF拮抗劑
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 第一章 文獻綜述8-18
• 1.1 BAFF的結(jié)構(gòu)和分布8
• 1.2 BAFF受體8-11
• 1.2.1 BAFF-R8-9
• 1.2.2 TACI9-10
• 1.2.3 BCMA10-11
• 1.3 BAFF的生物功能11-13
• 1.3.1 對B細胞的作用11-12
• 1.3.2 對T細胞的作用12-13
• 1.4 BAFF相關(guān)疾病13-15
• 1.4.1 免疫缺陷病13
• 1.4.2 自身免疫性疾病13-14
• 1.4.3 過敏性疾病14
• 1.4.4 感染14-15
• 1.4.5 惡性腫瘤15
• 1.5 BAFF拮抗劑15-17
• 1.5.1 抗BAFF抗體15-16
• 1.5.2 BAFF受體抑制劑16-17
• 1.5.3 BAFF相關(guān)免疫毒素17
• 1.6 總結(jié)與展望17-18
• 第二章 材料、試劑與儀器18-23
• 2.1 實驗材料18-19
• 2.2 實驗試劑與溶液的配制19-22
• 2.2.1 實驗試劑19-20
• 2.2.2 實驗室溶液配制20-22
• 2.3 實驗儀器22-23
• 第三章 TACI-Fc和BCMA-Fc融合蛋白的表達、純化和結(jié)合活性鑒定23-44
• 引言23
• 3.1 實驗方法23-28
• 3.1.1 TACI-Fc和BCMA-Fc重組子的驗證23-25
• 3.1.2 TACI-Fc和BCMA-Fc重組蛋白的誘導(dǎo)和表達25-28
• 3.2 實驗結(jié)果與討論28-43
• 3.2.1 TACI-Fc重組子的驗證28-30
• 3.2.2 TACI-Fc融合蛋白的誘導(dǎo)和表達條件的優(yōu)化30-31
• 3.2.3 TACI-Fc融合蛋白的大量表達和純化31-33
• 3.2.4 TACI-Fc融合蛋白與BAFF結(jié)合活力的測定33-36
• 3.2.5 BCMA-Fc重組子的驗證36-37
• 3.2.6 BCMA-Fc融合蛋白的誘導(dǎo)和表達條件的優(yōu)化37-38
• 3.2.7 BCMA-Fc融合蛋白的大量表達38-39
• 3.2.8 BCMA-Fc融合蛋白與BAFF結(jié)合活力的測定39-43
• 3.2.9 蛋白濃度的測定43
• 3.3 本章小結(jié)43-44
• 第四章 拮抗肽對TACI-BAFF和BCMA-BAFF結(jié)合的抑制作用44-68
• 引言44
• 4.1 實驗方法44-47
• 4.1.1 多肽的獲得44-45
• 4.1.2 多肽的處理45-46
• 4.1.3 競爭ELISA46-47
• 4.2 實驗結(jié)果與討論47-67
• 4.2.1 多肽的處理47-48
• 4.2.2 多肽對BAFF-TACI結(jié)合的抑制作用48-58
• 4.2.3 多肽對BCMA-BAFF結(jié)合的抑制作用58-67
• 4.3 本章小結(jié)67-68
• 第五章 結(jié)論與展望68-70
• 5.1 結(jié)論68-69
• 5.2 展望69-70
• 參考文獻70-75
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明75-76
• 致謝76

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Generation and Characterization of C305,a Murine Neutralizing scFv Antibody That Can Inhibit BLyS Binding to Its Receptor BCMA[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;2005年06期

2 ;Diphtheria Toxin/Human B-Cell Activating Factor Fusion Protein Kills Human Acute Lymphoblastic Leukemia BALL-1 Cells: An Experimental Study[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年03期

本文編號：592474