本文關(guān)鍵詞：經(jīng)MHCⅡ通路的屋塵螨1類變應原T細胞表位融合肽疫苗載體的構(gòu)建與表達

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【摘要】：目的構(gòu)建經(jīng)MHCⅡ通路的屋塵螨1類變應原Der p 1的T細胞表位肽疫苗重組載體。方法分別合成TAT、Ih C和含編碼Der p 1的3段T細胞表位的融合核苷酸序列,用特異性引物PCR擴增相應的基因片段,分別用相應的雙酶切后,用T4 DNA連接酶連接形成TAT-Ih C-Der p 1-3T融合基因,并插入至原核表達載體p ET-28a(+)中,構(gòu)建重組原核表達載體p ET-28a(+)-TATIh C-Der p 1-3T,Bam HⅠ和XhoⅠ進行雙酶切和測序鑒定。重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG誘導后,經(jīng)SDS-PAGE電泳分析和Western blot驗證,純化TAT-Ih C-Der p 1-3T蛋白后進行Ig E結(jié)合試驗。結(jié)果雙酶切和測序結(jié)果表明,成功構(gòu)建了p ET-28a-TAT-Ih C-Der p 1-3T重組原核表達載體;SDS-PAGE電泳分析顯示TAT-Ih C-Der p 1-3T可誘導表達;Western blot檢測表明該融合蛋白純化成功;Ig E結(jié)合試驗表明TAT-Ih C-Der p 1-3T結(jié)合屋塵螨過敏病人血清Ig E的能力強于Der p 1變應原(P0.001)。結(jié)論成功構(gòu)建了可表達經(jīng)MHC通路的編碼Der p 1的3段T細胞表位的重組p ET-28a-TAT-Ih C-Der p 1-3T載體,純化的TAT-Ih C-Der p 1-3T具有較強的Ig E結(jié)合能力,從而為后續(xù)經(jīng)MHC通路的特異性免疫治療奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 皖南醫(yī)學院醫(yī)學寄生蟲學教研室;皖南醫(yī)學院生理學教研室;皖南醫(yī)學院弋磯山醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 屋塵螨 融合肽疫苗 類變應原 原核表達 T細胞表位 IgE結(jié)合試驗
【基金】：國家自然科學基金(81270091,30872367,81172790)~~
【分類號】：R392
【正文快照】： 過敏性哮喘是以可逆性氣道阻塞、支氣管炎癥以及黏液分泌過多等主要臨床特征的Ⅰ型變態(tài)反應疾病[1-2]。屋塵螨是誘發(fā)過敏性哮喘的重要變應原,約80%的過敏性哮喘患者對屋塵螨1類變應原Der p 1結(jié)合呈陽性[3-6]。特異性免疫治療(specific immunotherapy,SIT)是惟一可長時間持續(xù)緩

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1 Waiyan Candy Ng,馮明釗;T輔助細胞在疫苗研制中的作用(英文)[J];熱帶醫(yī)學雜志;2002年03期

2 張雪菲;陳家祺;邵應峰;;靶向CⅡTA基因siRNA對大鼠角膜基質(zhì)細胞MHCⅡ基因表達影響的研究[J];中國病理生理雜志;2006年04期

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1 相瑞瑞;食蟹猴MHCⅡ類不同等位基因與SIV/HIV-2病毒載量相關(guān)性分析[D];華南理工大學;2014年

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本文編號：590266