本文關(guān)鍵詞：EV71感染樹突狀細(xì)胞MAPK信號通路分子差異表達(dá)研究

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【摘要】：目的：篩選樹突狀細(xì)胞（DCs）感染腸道病毒71型（EV71）前后絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路分子基因差異表達(dá)，闡明MAPK信號通路在EV71感染中的作用及效應(yīng)機制，為預(yù)防和治療EV71感染提供新的策略。 方法：(1)密度梯度離心法分離人外周血單個核細(xì)胞，貼壁2小時后去除懸浮細(xì)胞，加入含10%胎牛血清（FBS）的RPMI1640培養(yǎng)基、重組人粒細(xì)胞－巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）、重組人白細(xì)胞介素-4(IL-4)的培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)6天，流式細(xì)胞儀檢測其表型，獲得未成熟DCs；隨后用EV71感染未成熟DCs，并檢測感染后DCs表型。（2）采用qRT-PCR方法分別檢測EV71感染前和感染2h及8h后DCs中MEK/ERK信號通路相關(guān)基因表達(dá)情況。（3）Western Blot檢測MEK/ERK信號通路關(guān)鍵蛋白的磷酸化水平及EV71/VP1的表達(dá)量。 結(jié)果：（1）流式細(xì)胞技術(shù)檢測培養(yǎng)第6天DCs表型，CD11c，HLA-DR表達(dá)率高達(dá)90%以上，CD80、CD86達(dá)60%以上，CD83表達(dá)率為19.9%，淋巴細(xì)胞型CD3低表達(dá)，是未成熟DCs的標(biāo)志。EV71感染后DCs CD11c、HLA-DR依舊高表達(dá)，CD83、CD86表達(dá)較未感染DCs表達(dá)率高。（2）RT-PCR結(jié)果顯示EV71感染DCs后IκB-α、IKKβ、IL-1α、IL-12、JUN、Fos、NF-ΚB1等基因表達(dá)明顯上調(diào)；而MAP2K1、MAP2K2、MAPK1和MAPK3的mRNA表達(dá)量并未見明顯變化。（3） Western Blot實驗結(jié)果顯示，ERK信號通路相關(guān)蛋白MEK1/2和核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun在EV71感染8h后磷酸化水平增高，ERK1/2在2h、8h和20h后分別呈現(xiàn)出增高、降低再增高的雙相激活趨勢。NF-κB蛋白磷酸化水平及EV71VP1蛋白表達(dá)量隨感染時間延長而增加。 結(jié)論EV71感染DCs后，，可明顯刺激DCs的成熟并雙相激活MEK/ERK信號通路，以上結(jié)果說明MEK/ERK信號通路的激活與EV71感染有一定的相關(guān)性�；罨蟮腗APK能夠參與細(xì)胞的增殖、凋亡、炎癥反應(yīng)等過程，可能為預(yù)防和治療EV71感染提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：腸道病毒71型 樹突狀細(xì)胞 絲裂原活化蛋白激酶 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373;R392.12
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 實驗流程11-12
• 第一部分 DCs 的體外誘導(dǎo)、培養(yǎng)和鑒定12-20
• 1 材料12-13
• 2 方法13-15
• 3 結(jié)果15-18
• 4 討論18-20
• 第二部分 EV71 感染樹突狀細(xì)胞 MEK/ERK 信號通路分子差異表達(dá)研究20-35
• 1 材料20-23
• 2 方法23-29
• 3 結(jié)果29-33
• 4 討論33-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 綜述一 樹突狀細(xì)胞 TLR7/8 信號通路機制的研究進展40-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 綜述二 MAPK 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與病毒性疾病關(guān)系研究進展49-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 中英文對照縮略詞表58-60
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文60-61
• 致謝61-62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陸蔭英 ,劉妍;乙型肝炎病毒X蛋白的功能研究進展[J];國外醫(yī)學(xué).病毒學(xué)分冊;2002年02期

2 仇慧仙;姜劍斌;陳其;;柯薩奇病毒B感染和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)調(diào)控[J];國際病毒學(xué)雜志;2006年05期

3 鄧筠;沈南;王元;;Toll樣受體7在抗感染與自身免疫疾病中的作用[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2008年01期

4 陳建勇;王聰;王娟;曹禮榮;;MAPK信號通路研究進展[J];中國醫(yī)藥科學(xué);2011年08期

5 王菲;TLR家族分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)新進展[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2005年05期

6 劉京濤;黎檀實;;Toll樣受體與樹突狀細(xì)胞的研究進展[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2006年02期

7 楊曙光;焦國慧;俞銀燕;楊榮存;;不同Toll樣受體介導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞因子表達(dá)[J];免疫學(xué)雜志;2009年05期

8 李羅清;孫圣剛;曹學(xué)兵;王云甫;;未成熟樹突狀細(xì)胞對T細(xì)胞功能及其IL-10和TGF-β1表達(dá)的影響[J];免疫學(xué)雜志;2011年02期

9 李娟,何濤;胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究進展[J];四川生理科學(xué)雜志;2004年02期

10 江雁;唐志琴;;樹突狀細(xì)胞及其免疫調(diào)節(jié)功能[J];山東醫(yī)藥;2006年26期

本文編號：580507