本文關鍵詞：EV71感染樹突狀細胞MAPK信號通路分子差異表達研究

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【摘要】：目的：篩選樹突狀細胞（DCs）感染腸道病毒71型（EV71）前后絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路分子基因差異表達，闡明MAPK信號通路在EV71感染中的作用及效應機制，為預防和治療EV71感染提供新的策略。 方法：(1)密度梯度離心法分離人外周血單個核細胞，貼壁2小時后去除懸浮細胞，加入含10%胎牛血清（FBS）的RPMI1640培養(yǎng)基、重組人粒細胞－巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）、重組人白細胞介素-4(IL-4)的培養(yǎng)液誘導培養(yǎng)6天，流式細胞儀檢測其表型，獲得未成熟DCs；隨后用EV71感染未成熟DCs，并檢測感染后DCs表型。（2）采用qRT-PCR方法分別檢測EV71感染前和感染2h及8h后DCs中MEK/ERK信號通路相關基因表達情況。（3）Western Blot檢測MEK/ERK信號通路關鍵蛋白的磷酸化水平及EV71/VP1的表達量。 結果：（1）流式細胞技術檢測培養(yǎng)第6天DCs表型，CD11c，HLA-DR表達率高達90%以上，CD80、CD86達60%以上，CD83表達率為19.9%，淋巴細胞型CD3低表達，是未成熟DCs的標志。EV71感染后DCs CD11c、HLA-DR依舊高表達，CD83、CD86表達較未感染DCs表達率高。（2）RT-PCR結果顯示EV71感染DCs后IκB-α、IKKβ、IL-1α、IL-12、JUN、Fos、NF-ΚB1等基因表達明顯上調；而MAP2K1、MAP2K2、MAPK1和MAPK3的mRNA表達量并未見明顯變化。（3） Western Blot實驗結果顯示，ERK信號通路相關蛋白MEK1/2和核內轉錄因子c-Jun在EV71感染8h后磷酸化水平增高，ERK1/2在2h、8h和20h后分別呈現(xiàn)出增高、降低再增高的雙相激活趨勢。NF-κB蛋白磷酸化水平及EV71VP1蛋白表達量隨感染時間延長而增加。 結論EV71感染DCs后，，可明顯刺激DCs的成熟并雙相激活MEK/ERK信號通路，以上結果說明MEK/ERK信號通路的激活與EV71感染有一定的相關性�；罨蟮腗APK能夠參與細胞的增殖、凋亡、炎癥反應等過程，可能為預防和治療EV71感染提供新的思路。
【關鍵詞】：腸道病毒71型 樹突狀細胞 絲裂原活化蛋白激酶 細胞因子
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R373;R392.12
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 實驗流程11-12
• 第一部分 DCs 的體外誘導、培養(yǎng)和鑒定12-20
• 1 材料12-13
• 2 方法13-15
• 3 結果15-18
• 4 討論18-20
• 第二部分 EV71 感染樹突狀細胞 MEK/ERK 信號通路分子差異表達研究20-35
• 1 材料20-23
• 2 方法23-29
• 3 結果29-33
• 4 討論33-35
• 結論35-36
• 參考文獻36-40
• 綜述一 樹突狀細胞 TLR7/8 信號通路機制的研究進展40-49
• 參考文獻46-49
• 綜述二 MAPK 信號轉導通路與病毒性疾病關系研究進展49-58
• 參考文獻55-58
• 中英文對照縮略詞表58-60
• 攻讀學位期間公開發(fā)表的論文60-61
• 致謝61-62

【參考文獻】

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本文編號：580507