發(fā)布時間：2017-07-26 23:19

  本文關鍵詞：小鼠皮膚無綠藻感染差異表達基因的篩選

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【摘要】：第一部分：小鼠皮膚無綠藻感染動物模型的構建 目的：構建小鼠皮膚無綠藻感染模型。 方法：BALB/C小鼠分為4組,A組為免疫抑制小鼠,腹部皮下接種1x109孢子數/ml中型無綠藻波多黎各變種懸液組；B組為免疫抑制小鼠,腹部皮下接種1x106孢子數/ml懸液組：C組為健康小鼠,腹部皮下接種1x109孢子數/ml懸液組；D組為對照組,健康小鼠腹部皮下接種生理鹽水溶液,每個部位接種量均為200μl。接種后第7、14、28天時觀察各組小鼠腹部皮損變化,并進行腹部皮膚病理及真菌檢查。 結果：A、B、C組小鼠接種處均出現(xiàn)丘疹、膿腫,部分出現(xiàn)潰瘍、結痂,感染率均為100%。A、B、C三組小鼠的腹部皮損直徑,組內相比,均在第7天時最大(P0.05),分別為(6.75±1.09) mm、(5.88±1.17) mm和(5.96+0.99)mm;組間相比,在接種后第7、14天時,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),在第28天時,A組最大(P0.05)為(4.38±0.86)mm。實驗組基本病理改變?yōu)閴乃�、膿腫、肉芽腫形成,HE染色和PAS染色均可見孢子,皮損直接鏡檢可見孢子,培養(yǎng)為無綠藻生長。對照組未感染無綠藻。 結論：腹部皮下接種法可在免疫抑制和健康小鼠成功建立皮膚無綠藻病動物感染模型。 第二部分：小鼠皮膚無綠藻感染差異表達基因的篩選 目的：利用基因表達譜芯片篩選小鼠感染無綠藻皮膚組織的差異表達基因,探討這些基因在皮膚無綠藻病中的作用,從而對皮膚無綠藻病有更新的認識。 方法：分別提取免疫抑制小鼠感染無綠藻的皮膚組織和對照組皮膚組織,抽提總RNA,反轉錄成cDNA同時進行單色標記,和小鼠全基因組表達譜芯片雜交,經過芯片掃描和數據處理,分析出差異表達的基因,并對部分差異基因采用實時熒光定量PCR的方法進行驗證。 結果：感染無綠藻的小鼠皮膚組織中表達差異2倍的基因共有9902個,其中表達上調的基因4974個,表達下調的基因4928個。生物信息學分析發(fā)現(xiàn),差異基因功能主要涉及炎癥反應、免疫應答、信號轉導、細胞粘附等多個生物學過程。另外還發(fā)現(xiàn)了一些有意義的信號通路如趨化因子信號通路、Jak-STAT信號傳導途徑、Toll樣受體信號傳導途徑等。差異基因的實時熒光定量PCR結果與基因芯片的結果趨勢一致。 結論：皮膚無綠藻病的發(fā)生涉及眾多基因表達的改變,芯片技術可以有效地篩選出皮膚無綠藻感染小鼠的差異表達基因,對進一步探索皮膚無綠藻病的發(fā)病機制,有效干預或治療皮膚無綠藻病具有重要意義。
【關鍵詞】：無綠藻屬 疾病模型 基因芯片 差異表達 基因 皮膚組織
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R756;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 第一部分 小鼠皮膚無綠藻感染動物模型的構建10-19
• 材料與方法10-13
• 結果13-18
• 討論18-19
• 第二部分 小鼠皮膚無綠藻感染差異表達基因的篩選19-40
• 材料和方法19-28
• 結果28-37
• 討論37-40
• 全文小結40-41
• 參考文獻41-44
• 綜述44-51
• 參考文獻48-51
• 附錄51-52
• 致謝52-53

【參考文獻】

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1 駱瑜;熊瑋;楊純玉;梁旭;;血管緊張素轉換酶基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關系[J];海南醫(yī)學;2011年03期

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本文編號：578861