發(fā)布時(shí)間：2017-07-26 19:34

  本文關(guān)鍵詞：蚊殺蟲劑表皮抗性的初步研究

  更多相關(guān)文章： 淡色庫蚊 溴氰菊酯 抗藥性 表皮蛋白 幾丁質(zhì)合成酶Ⅰ

【摘要】：背景：化學(xué)防制一直是蚊媒綜合防治的主要方法。殺蟲劑長(zhǎng)期、大量使用,導(dǎo)致了蚊抗藥性。本研究旨在探討昆蟲表皮蛋白(insect cuticle proteins, ICPs)和幾丁質(zhì)合成酶I (chitin synthase I, CHSI)在蚊抗藥性中的作用。 方法：選擇淡色庫蚊抗藥性蛋白質(zhì)組與轉(zhuǎn)錄組共同鑒定的差異表達(dá)表皮蛋白；采用qRT-PCR方法,分別比較淡色庫蚊實(shí)驗(yàn)室和現(xiàn)場(chǎng)種群的敏感與抗性品系的ICPs和CHSI表達(dá)差異；以溴氰菊酯誘導(dǎo)淡色庫蚊,對(duì)誘導(dǎo)前后ICPs和CHSI的差異表達(dá)進(jìn)行了定量檢測(cè)；克隆主效基因Unigene3941_All全長(zhǎng)序列,并進(jìn)行同源性比對(duì)與進(jìn)化樹分析；采用基因微注射方法驗(yàn)證主效基因Unigene3941_All的功能。 結(jié)果：淡色庫蚊實(shí)驗(yàn)室和現(xiàn)場(chǎng)種群敏感與抗性品系的14個(gè)表皮蛋白和幾丁質(zhì)合成酶Ⅰ存在差異表達(dá)；Unigene3941_All基因表達(dá)量的變化遠(yuǎn)大于其它13個(gè)表皮蛋白：Jnigene3941_All基因在敏感品系的表達(dá)占10.78%,而在抗性品系的表達(dá)則上升到73.95%；另13個(gè)表皮蛋白在敏感品系的表達(dá)占89.22%,而在抗性品系的表達(dá)則下降到26.05%；基因注射敲低Unigene3941_All基因的表達(dá)水平后,另13個(gè)表皮蛋白的表達(dá)量升高,結(jié)果蚊溴氰菊酯抗性下降,致死率增加；經(jīng)溴氰菊酯誘導(dǎo),表皮蛋白和幾丁質(zhì)合成酶Ⅰ的mRNA表達(dá)量均在誘導(dǎo)恢復(fù)12或24h后達(dá)到最高峰,隨后表達(dá)量急劇下降；克隆獲得Unigene3941_All基因全長(zhǎng)序列為732bp, ORF區(qū)域長(zhǎng)度為390bp,共編碼129個(gè)氨基酸(GenBank/KF723314,2013). 結(jié)論：表皮蛋白和幾丁質(zhì)合成酶Ⅰ均與蚊殺蟲劑抗性相關(guān),可能共同形成了蚊殺蟲劑表皮抗性；Unigene3941_All基因可能在抗藥性中發(fā)揮主效作用；表皮蛋白家族參與殺蟲劑抗性,可能存在某種內(nèi)部調(diào)節(jié)機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：淡色庫蚊 溴氰菊酯 抗藥性 表皮蛋白 幾丁質(zhì)合成酶Ⅰ
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R384.1
【目錄】：

• 目錄4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-31
• 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 1 實(shí)驗(yàn)蚊12-13
• 2 主要試劑13-14
• 3 主要儀器14-15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-31
• 1 淡色庫蚊種群選取15-16
• 2 淡色庫蚊RNA提取和cDNA合成16-18
• 3 引物設(shè)計(jì)、合成18-19
• 4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)19-21
• 5 誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)21
• 6 淡色庫蚊Unigene3941_All基因克隆21-28
• 7 生物信息學(xué)分析28-29
• 8 基因微注射抑制Unigene3941_All基因表達(dá)后對(duì)蚊敏感性的影響29-30
• 9 統(tǒng)計(jì)分析30-31
• 結(jié)果31-53
• 1 蛋白質(zhì)組和轉(zhuǎn)錄組中鑒定出的表皮蛋白31
• 2 表皮蛋白和幾丁質(zhì)合成酶Ⅰ在實(shí)驗(yàn)室抗性、敏感品系中的表達(dá)31-34
• 3 表皮蛋白和幾丁質(zhì)合成酶Ⅰ在現(xiàn)場(chǎng)抗性、敏感品系中的表達(dá)34-40
• 4 溴氰菊酯短期誘導(dǎo)表皮蛋白與幾丁質(zhì)合成酶Ⅰ表達(dá)分析40-45
• 5 淡色庫蚊Unigene3941_All全長(zhǎng)基因克隆與生物信息學(xué)分析45-46
• 6 基因微注射對(duì)淡色庫蚊溴氰菊酯敏感性的影響46-53
• 討論53-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-65
• 綜述65-81
• 參考文獻(xiàn)73-81
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況81-82
• 致謝82-83

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉清明;苑園園;林健榮;鐘楊生;;昆蟲表皮蛋白及其基因表達(dá)調(diào)控機(jī)理的研究進(jìn)展[J];昆蟲知識(shí);2010年02期

2 ;Cloning and Overexpression of CYP6F1,a Cytochrome P450 Gene,from Deltamethrin-resistant Culex pipiens pallens[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;2005年05期

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本文編號(hào)：578028