本文關(guān)鍵詞：白花蛇舌草可吸收成分測定及其對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的影響

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【摘要】：目的擬采用超高效液相色譜-光電二極管陣列UPLC-PDA法檢測白花蛇舌草化學(xué)成分的含量以及經(jīng)胃入血的可吸收成分；并探討血漿中可吸收成分對類風濕性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的治療作用。 方法(1)采用UPLC-PDA法測定白花蛇舌草中成分的含量。繪制各成分的標準曲線,并對精密度、回收率、樣本穩(wěn)定性和重現(xiàn)性進行驗證； (2)比較空白對照組血漿,阿魏酸、對香豆酸對照品與白花蛇舌草溶液灌胃SD大鼠血漿樣本的紫外光譜圖及色譜圖,測定該兩種成分是否被SD大鼠吸收入血。 (3)分別用低中高劑量阿魏酸干預(yù)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)模型大鼠,用酶聯(lián)免疫吸附劑測定法(ELISA)測定血清中TNF-α和IL-1β的含量,篩選阿魏酸高中低三個劑量中最佳干預(yù)劑量。 (4)以篩選出的阿魏酸劑量為干預(yù)措施,從CIA大鼠的一般情況、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、足爪腫脹度、關(guān)節(jié)滑膜組織病理改變及關(guān)節(jié)X線攝片,以及血清IL-1β、TNF-α水平多個方面,進一步探討阿魏酸治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的作用。 結(jié)果(1)白花蛇舌草中阿魏酸、對香豆酸成分色譜峰獲得分離,阿魏酸線性范圍0.005-0.08mg/ml (R2=0.9994),平均加樣回收率為100.40%,相對標準差(RSD)為1.26%；對香豆酸線性范圍0.0028-0.045mg/ml (R2=0.9998),平均加樣回收率為99.86%,相對標準差(RSD)為2.41%。測得白花蛇舌草生藥中阿魏酸含量為233ng/mg,對香豆酸為529ng/mg。 (2)在灌胃白花蛇舌草SD大鼠血漿中測得阿魏酸、對香豆酸兩種成份； (3)低、中、高劑量的阿魏酸,均能不同程度地下調(diào)CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α水平,但以高劑量阿魏酸下調(diào)幅度最為明顯差異有顯著性。 (4)以高劑量阿魏酸干預(yù)CIA大鼠,①一般情況觀察：模型組大鼠精神委靡,飲食、活動減少,后期可見毛發(fā)枯燥等癥狀;阿魏酸治療組,在治療2周后上述情況改善,正常組大鼠則未出現(xiàn)上述表現(xiàn)。②體質(zhì)量增長變化情況：模型組與治療組較正常組大鼠體重增長緩慢；治療3周后,治療組大鼠體質(zhì)量增長較模型組明顯(P0.05)。③關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分：在實驗的前4周,模型組、治療組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分逐漸增加,在第21天左右達到高峰；在第35天、42天時,治療組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)明顯低于模型組(P0.01)。④足爪腫脹度檢測：模型組大鼠足爪厚度較正常組明顯增加(P0.01),并逐漸上升；治療組大鼠足爪厚度,在治療3周后與模型組比較明顯減少(P0.01)。⑤關(guān)節(jié)X線攝片觀察：免疫后14天左右,模型組大鼠踝關(guān)節(jié)周圍組織腫脹,隨著病程延長,足趾關(guān)節(jié)出現(xiàn)明顯骨侵蝕病灶、關(guān)節(jié)間隙狹窄及融合等表現(xiàn)。治療4周后,治療組大鼠關(guān)節(jié)周圍組織腫脹程度減低,骨質(zhì)破壞程度減弱。⑥HE染色病理學(xué)觀察：模型組滑膜組織可見炎性細胞浸潤、大量新生血管、滑膜增厚等病理特征；治療組新生血管及炎癥細胞浸潤減少,滑膜輕度增厚。⑦血清IL-1β、TNF-α水平：在第28天、42天時,模型組、治療組大鼠血清IL-1β、TNF-α水平較正常組明顯升高(P0.01),但治療組大鼠血清IL-1β、TNF-α水平明顯低于模型組(P0.01)。 結(jié)論①采用UPLC-PDA首次測得了阿魏酸是白花蛇舌草中可經(jīng)胃吸收入血的成分,該成分可能為白花蛇舌草治療類風濕關(guān)節(jié)炎的有效成分。 ②阿魏酸可以降低細胞炎癥因子IL-1β、TNF-α的水平,緩解膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠的炎癥反應(yīng)及骨質(zhì)侵蝕,提示阿魏酸對膠原誘導(dǎo)性性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)具有保護作用,白花蛇舌草有效成分可能是痹腫消湯治療類風濕性關(guān)節(jié)炎療效的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。
【關(guān)鍵詞】：UPLC-PDA 白花蛇舌草 阿魏酸 對香豆酸 膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型 類風濕性關(guān)節(jié)炎
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R284.1;R285.5
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-14
• 英文縮寫詞匯對照表14-15
• 前言15-18
• 第一章 UPLC-PDA法測定白花蛇舌草中化學(xué)成分的含量18-27
• 1. 引言18-19
• 2. 實驗材料19-20
• 3. 方法20-22
• 4. 結(jié)果22-27
• 第二章 白花蛇舌草溶液灌胃SD大鼠血漿中可吸收成分的測定27-31
• 1. 引言27
• 2. 實驗材料27-28
• 3. 方法28
• 4. 結(jié)果28-31
• 第三章 血漿中可吸收成分對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎抗炎作用干預(yù)劑量的篩選31-35
• 1. 引言31
• 2. 材料31-32
• 3. 方法32-33
• 4. 實驗結(jié)果33-35
• 第四章 阿魏酸對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎療效的研究35-44
• 1. 前言35
• 2. 材料和方法35-37
• 3. 結(jié)果37-44
• 第五章 討論44-47
• 1. 白花蛇舌草基礎(chǔ)研究概況及存在問題44
• 2. UPLC法測定白花蛇舌草中經(jīng)胃吸收入血成分的經(jīng)驗和不足44-45
• 3. 炎癥因子與RA的發(fā)病機制45-46
• 4. 阿魏酸對RA的療效46
• 5. 實驗展望46-47
• 第六章 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-54
• 綜述54-63
• 參考文獻58-63
• 攻讀學(xué)位期間的主要研究成果63-64
• 致謝64

【參考文獻】

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本文編號：575679