本文關(guān)鍵詞：云南省瀾滄江流域蚊蟲(chóng)及蚊媒病毒調(diào)查研究

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【摘要】：云南省是我國(guó)蚊類(lèi)區(qū)系和物種分布的核心地帶和關(guān)鍵地區(qū)，也是我國(guó)蚊媒傳染病較多的省份。迄今為止，在云南從蚊蟲(chóng)中分離并已鑒定的病毒包括5個(gè)病毒科11種病毒，包括披膜病毒科甲病毒屬的辛德畢斯病毒、基孔肯雅病毒、蓋塔病毒，黃病毒科黃病毒屬的乙腦病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）、登革病毒（Dengue virus，DENV），呼腸孤病毒科的云南環(huán)狀病毒（Yunnan orbivirus，YUOV）、Colti病毒、Kadipiro病毒、版納病毒（Banna virus，BAV），細(xì)小病毒科濃核病毒屬的濃核病毒，布尼亞病毒科布尼亞病毒屬的巴泰病毒。在云南已從15種蚊蟲(chóng)中分離到乙腦病毒。瀾滄江在云南省境內(nèi)1247km，縱貫云南南北。流域面積約90000km2，是我國(guó)蚊類(lèi)區(qū)系和蚊種分布的核心地帶和關(guān)鍵地區(qū)之一。以往開(kāi)展蚊蟲(chóng)及蚊媒病毒的調(diào)查多集中于滇西南邊境地區(qū)，在滇西北地區(qū)開(kāi)展的調(diào)查較少。隨著全球氣候變暖、人口流動(dòng)增加、人們的生產(chǎn)生活方式改變以及瀾滄江－湄公河國(guó)際航運(yùn)的開(kāi)通，有必要對(duì)云南省瀾滄江流域蚊蟲(chóng)分布及其與疾病的關(guān)系進(jìn)行系統(tǒng)的調(diào)查研究。 2007-2009年，在云南省瀾滄江上、中、下流域共選擇10個(gè)居民點(diǎn)進(jìn)行蚊蟲(chóng)分布調(diào)查，在蚊蟲(chóng)密度高峰季節(jié)，采用誘蚊燈法在畜圈和人房?jī)?nèi)進(jìn)行夜間捕蚊。并于2010年，在下游地區(qū)村寨竹林采集伊蚊。對(duì)采集的蚊蟲(chóng)標(biāo)本用白紋伊蚊C6/36細(xì)胞進(jìn)行病毒分離、分子生物學(xué)鑒定和系統(tǒng)進(jìn)化分析。同時(shí)收集疑似病人血清和腦脊液標(biāo)本進(jìn)行病毒分離和分子生物學(xué)鑒定。 調(diào)查結(jié)果顯示，瀾滄江流域居民點(diǎn)畜圈共采集到8屬40種共計(jì)112344只蚊蟲(chóng)。其中構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是三帶喙庫(kù)蚊（80.26%）、中華按蚊（8.35%）、環(huán)帶庫(kù)蚊（5.41%）和紋腿庫(kù)蚊（2.42%），其余36種蚊蟲(chóng)的構(gòu)成比均小于1.00%。在人房中共采集到7屬32種4427只蚊蟲(chóng)，蚊蟲(chóng)構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是三帶喙庫(kù)蚊（35.71%）、中華按蚊（27.51%）、紋腿庫(kù)蚊（10.68%）、騷擾阿蚊（3.55%）。在上游地區(qū)畜圈中共采集到6屬20種蚊蟲(chóng)，其中構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是紋腿庫(kù)蚊（36.47%）、三帶喙庫(kù)蚊（30.63%）、中華按蚊（14.85%）和昆明按蚊（11.63%）。人房中共采集到4屬6種蚊蟲(chóng)，構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是騷擾阿蚊（29.41%）、致倦庫(kù)蚊（23.53%）、中華按蚊（17.65%）、多斑按蚊和白胸庫(kù)蚊（11.76%）；在中游地區(qū)畜圈共采集到6屬28種蚊蟲(chóng)，其中構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是三帶喙庫(kù)蚊（84.03%）、中華按蚊（6.67%）、環(huán)帶庫(kù)蚊（5.49%）和紋腿庫(kù)蚊（1.26%）。人房中共采集到5屬20種蚊蟲(chóng)，構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是三帶喙庫(kù)蚊（36.15%）、中華按蚊（29.09%）、紋腿庫(kù)蚊（12.15%）、致倦庫(kù)蚊（11.82%）；在下游地區(qū)畜圈共采集到7屬35種蚊蟲(chóng)，其中構(gòu)成比在前四位的蚊蟲(chóng)依次是三帶喙庫(kù)蚊（77.15%）、中華按蚊（12.53%）、環(huán)帶庫(kù)蚊（5.76%）和致倦庫(kù)蚊（0.90%）。人房中共采集到6屬25種蚊蟲(chóng)，排在前四位的蚊蟲(chóng)依是三帶喙庫(kù)蚊（33.59%）、致倦庫(kù)蚊（19.69%）、中華按蚊（16.60%）、環(huán)帶庫(kù)蚊（8.49%）。 對(duì)云南瀾滄江流域10個(gè)縣采集到的共14706只193組蚊蟲(chóng)標(biāo)本進(jìn)行病毒分離，共獲得55株有細(xì)胞病變的病毒分離物，對(duì)11份腦脊液標(biāo)本、23份發(fā)熱病人血清進(jìn)行病毒分離，獲得1株有細(xì)胞病變的病毒分離物。 采用特異引物或通用引物對(duì)49株分離物進(jìn)行RT-PCR鑒定，有40株分離物得到鑒定，仍有9株為未知分離物。40株分離物中包括5科（黃病毒科、披膜病毒科、呼腸孤病毒科、Toti病毒科、Mesoniviridae病毒科）8種病毒（乙腦病毒11株、庫(kù)蚊黃病毒6株、伊蚊黃病毒6株、蓋塔病毒5株、版納病毒3株、云南環(huán)狀病毒5株、Toti病毒6株、Alphamesonivirus1樣病毒1株），其中蚊蟲(chóng)黃病毒、Toti病毒、Alphamesonivirus1樣病毒為云南首次分離到。40株分離物中，有2株同時(shí)檢測(cè)到BAV和Toti病毒、1株同時(shí)檢測(cè)到庫(kù)蚊黃病毒和Toti病毒。8種病毒主要來(lái)自三帶喙庫(kù)蚊、中華按蚊及白紋伊蚊。從三帶喙庫(kù)蚊中分離到7種病毒（JEV、BAV、YUOV、GETV、Alphamesonivirus1樣病毒、庫(kù)蚊黃病毒、Toti病毒），從中華按蚊中分離到3種病毒（JEV、GETV、庫(kù)蚊黃病毒）。首次從老撾輸入病例血清標(biāo)本中分離到1株登革2型病毒。 11株JEV的蚊蟲(chóng)采集地區(qū)分布在云南瀾滄江流域的上、中、下游地區(qū)，瀾滄江上、中、下游地區(qū)三帶喙庫(kù)蚊乙腦病毒的最低感染率分別為24.63/萬(wàn)、7.15/萬(wàn)和9.02/萬(wàn)。新分離JEV的外膜蛋白（E）基因核苷酸相似性為98.0%～100.0%，氨基酸同源性為99.8%～100.0%，與我國(guó)乙腦減毒活疫苗株SA14-14-2的核苷酸相似性為86.1%～86.9%，氨基酸相似性為96.8%～97.2%。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示，新分離10株JEV均屬于基因Ⅰ型。 從瀾滄江上、中、下游地區(qū)采集的三帶喙庫(kù)蚊、中華按蚊和白紋伊蚊及未分類(lèi)伊蚊中鑒定到12株黃病毒。對(duì)12株黃病毒部分非結(jié)構(gòu)蛋白5（NS5）基因進(jìn)行進(jìn)化分析，庫(kù)蚊和按蚊與伊蚊分離到的病毒分別位于不同的分枝，庫(kù)蚊和按蚊中分離到的病毒與庫(kù)蚊黃病毒（Culex flavivirus，CxFV）進(jìn)化關(guān)系相近，而從伊蚊中分離到的黃病毒與CFA病毒（Cell fusing agent virus，CFA）和Kamiti河病毒（Kamiti River virus，KRV）相近，但位于不同分枝中。 在瀾滄江中游地區(qū)采集的三帶喙庫(kù)蚊中首次分離到6株Toti病毒。對(duì)該病毒編碼RNA依賴(lài)的RNA聚合酶基因的部分氨基酸進(jìn)行進(jìn)化分析顯示，新分離Toti病毒和尚未分類(lèi)的病毒Omono River virus AK4株和ToV-TJ株同在一個(gè)進(jìn)化分支。屬于Totivirus病毒科尚未分類(lèi)病毒。 在瀾滄江中游地區(qū)采集的三帶喙庫(kù)蚊中首次分離到1株Alphamesonivirus1樣病毒,命名為NDiV-NJ8-09。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)顯示，新分離株NDiV-NJ8-09與NDiV02VN178和Cavally virus (CAVV)共同位于同一進(jìn)化分枝，關(guān)系最近，屬于套式病毒目(order Nidovirales) Mesoniviridae病毒科。 在瀾滄江中游地區(qū)南澗縣采集的三帶喙庫(kù)蚊中鑒定出3株BAV，在瀾滄江下游地區(qū)采集的三帶喙庫(kù)蚊中鑒定到5株YUOV，在瀾滄江上游和下游采集的三帶喙庫(kù)蚊和中華按蚊中鑒定到5株GETV。經(jīng)BLAST比對(duì)顯示，分別與以往在云南分離到的相應(yīng)病毒具有很高的相似性。 對(duì)新分離的登革病毒MLDENV-09株E基因核苷酸序列進(jìn)行進(jìn)化分析，結(jié)果顯示該病毒株位于2型登革病毒亞洲基因Ⅰ型拓?fù)淙褐小Ｅc2006年泰國(guó)株D2/Thailand/0606aTw的E基因核苷酸相似性為99.6%。 本研究首次在云南省瀾滄江流域系統(tǒng)地進(jìn)行了蚊蟲(chóng)和蚊媒病毒的流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果提示云南省瀾滄江流域不僅存在蚊種的多樣性分布，也同時(shí)存在蚊媒病毒的多樣性。具體得出以下結(jié)論： 1.三帶喙庫(kù)蚊和中華按蚊在瀾滄江上、中、下游地區(qū)畜圈中均是優(yōu)勢(shì)蚊種。三帶喙庫(kù)蚊和中華按蚊是瀾滄江中、下游地區(qū)人房中的優(yōu)勢(shì)蚊種。該地區(qū)蚊蟲(chóng)種類(lèi)從高緯度地區(qū)向低緯度地區(qū)逐漸增多。 2.三帶喙庫(kù)蚊是自然感染病毒種類(lèi)最多的蚊種，從三帶喙庫(kù)蚊中分離到7種病毒（JEV、BAV、YUOV、GETV、Alphamesonivirus1樣病毒、庫(kù)蚊黃病毒、Toti病毒）。其次，從中華按蚊中分離到3種病毒（JEV、GETV、庫(kù)蚊黃病毒）。本次調(diào)查提示瀾滄江流域居民點(diǎn)廣泛存在蟲(chóng)媒病毒性疾病的媒介。 3.在云南首次從三帶喙庫(kù)蚊中分離到蚊蟲(chóng)黃病毒、 Toti病毒和Alphamesonivirus1樣病毒，它們的生物學(xué)性狀與人類(lèi)疾病關(guān)系需進(jìn)一步研究。 4.在瀾滄江中游地區(qū)分離到BAV，結(jié)合以往調(diào)查數(shù)據(jù)，提示BAV在整個(gè)瀾滄江流域均有分布。JEV在瀾滄江流域廣泛分布。由于這兩種病毒與人類(lèi)疾病關(guān)系密切，提示應(yīng)加強(qiáng)居民點(diǎn)蚊蟲(chóng)媒介控制措施，以確保居民健康。 5. GETV是導(dǎo)致家畜疾病的病原，，本次調(diào)查提示該病毒在整個(gè)瀾滄江流域均有分布，提示畜牧部門(mén)在相應(yīng)地區(qū)應(yīng)注意對(duì)該疾病的防控。 6.首次從鄰國(guó)老撾輸入病例中分離到2型登革病毒。提示應(yīng)加強(qiáng)云南邊境地區(qū)出入境人員登革熱監(jiān)測(cè)和疑似病人管理，避免因輸入而造成本地登革熱暴發(fā)流行。
【關(guān)鍵詞】：瀾滄江 蚊蟲(chóng) 蟲(chóng)媒病毒 病毒分離 系統(tǒng)進(jìn)化分析
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R373
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 摘要5-9
• Abstract9-14
• 前言14-17
• 第一部分 云南省瀾滄江流域蚊蟲(chóng)媒介調(diào)查17-26
• 材料與方法17-19
• 一、 調(diào)查地點(diǎn)與調(diào)查時(shí)間17-18
• 二、 蚊蟲(chóng)采集18-19
• 三、 蚊種鑒定19
• 結(jié)果19-25
• 一、 瀾滄江流域蚊蟲(chóng)種類(lèi)與構(gòu)成19-20
• 二、 瀾滄江不同流域蚊蟲(chóng)種類(lèi)與構(gòu)成20-25
• 討論25-26
• 第二部分 云南省瀾滄江流域蚊媒病毒的分離鑒定26-61
• 材料與方法26-32
• 一、 材料26-28
• 二、 方法28-32
• 結(jié)果32-56
• 一、 云南省瀾滄江流域蚊媒病毒分離情況32-35
• 二、 黃病毒屬病毒的分離鑒定35-41
• 三、 呼腸孤病毒科病毒的分離鑒定41-44
• 四、 蓋塔病毒的分離鑒定44
• 五、 其他病毒的分離鑒定44-52
• 七、 病例標(biāo)本病毒的分離鑒定52-56
• 討論56-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-68
• 文獻(xiàn)綜述68-74
• 參考文獻(xiàn)71-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷74-76
• 致謝76

【參考文獻(xiàn)】

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