本文關鍵詞：狂犬病病毒糖蛋白膜外區(qū)重組基因的表達與鑒定

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【摘要】：目的構建狂犬病病毒糖蛋白外膜區(qū)基因質(zhì)粒并在大腸埃希菌中表達,為研制狂犬病病毒抗原診斷試劑盒奠定基礎。方法采用RT-PCR方法擴增狂犬病病毒CTN株糖蛋白膜外區(qū)基因,目的片段與表達載體PET32a(+)分別經(jīng)雙酶切、膠回收后連接并轉(zhuǎn)化至E.coli BL21(DE3)菌株。陽性重組菌經(jīng)IPTG誘導表達,表達產(chǎn)物用SDS-PAGE分析后進行純化,利用Western blot鑒定其反應原性。結果以狂犬病病毒CTN株為模板擴增的糖蛋白膜外區(qū)基因片段經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定大小為1 323bp,與理論值相符;重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定后轉(zhuǎn)化入E.coli BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導表達的融合蛋白分子質(zhì)量單位大小約為66.6ku,與理論值相符;重組菌在IPTG終濃度為1mmol/L,誘導時間為4h,溫度為37℃時蛋白表達產(chǎn)量最高。該融合蛋白主要以包涵體形式存在,可被His標簽抗體識別。結論成功表達了狂犬病病毒糖蛋白膜外區(qū)蛋白,該蛋白反應原性良好,為研制狂犬病病毒抗原診斷試劑盒奠定了基礎。
【作者單位】： 濰坊醫(yī)學院醫(yī)學檢驗學系;濰坊醫(yī)學院基礎醫(yī)學院病原生物學教研室;
【關鍵詞】： 狂犬病病毒 糖蛋白膜外區(qū) 基因克隆 原核表達
【基金】：國家自然科學基金項目(No.81170080)
【分類號】：R373
【正文快照】： ***狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的一種嚴重的人獸共患傳染病,目前尚無有效的治療方法,病死率幾乎為100%�？袢“l(fā)生于世界上的80多個國家和地區(qū),全世界每年約有5.5萬人死于狂犬病[1-2]。我國狂犬病發(fā)病率自1998年以來呈逐年上升趨勢[3],已成為嚴重

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本文編號：564879