發(fā)布時(shí)間：2017-07-19 17:36

  本文關(guān)鍵詞：兔癲癇模型腦組織中NOS的變化以及拉莫三嗪和NOS抑制劑L-NNA對(duì)腦部神經(jīng)元變化的研究

  更多相關(guān)文章： 兔 癲癇 一氧化氮 一氧化氮合酶 L-硝基-精氨酸 拉莫三嗪

【摘要】：本實(shí)驗(yàn)成功制備了以兔為試驗(yàn)動(dòng)物的癲癇模型，并且分別選用拉莫三嗪和NOS抑制劑L-硝基精氨酸（L-NNA）對(duì)成功的癲癇兔模型進(jìn)行比較治療。通過測(cè)定各組兔腦勻漿中NO含量、海馬及顳葉內(nèi)NOS活性以及海馬內(nèi)nNOS和iNOS這兩種陽性神經(jīng)元的表達(dá)變化以探究癲癇發(fā)病機(jī)理與一氧化氮的關(guān)系和一氧化氮合酶抑制劑L-NNA以及拉莫三嗪對(duì)其主要病變部位NO含量、NOS活性及神經(jīng)元的影響。 采用LiCl-PILO對(duì)家兔進(jìn)行腹腔注射重復(fù)刺激建立點(diǎn)燃模型，制備癲癇兔模型，并通過行為學(xué)及免疫組織化學(xué)方法對(duì)模型進(jìn)行檢測(cè)。行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，本試驗(yàn)制備的癲癇兔模型有80%的兔達(dá)到成功模型標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)作等級(jí)在III~IV之間。HE染色可見，海馬CA1和CA3區(qū)錐體細(xì)胞缺失，神經(jīng)元排列紊亂，CA3區(qū)病變較明顯。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，海馬區(qū)免疫組化染色可見對(duì)照組內(nèi)有神經(jīng)元數(shù)量較多，胞漿濃染、軸突長度較長且突起較明顯的nNOS和iNOS免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元分布；而模型組海馬內(nèi)nNOS和iNOS免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元與正常對(duì)照組相比，殘存的細(xì)胞免疫組化染色較淺，細(xì)胞體的輪廓和突起均不清晰，前期nNOS陽性神經(jīng)元的表達(dá)明顯減弱，中后期iNOS免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元表達(dá)增加，，進(jìn)一步驗(yàn)證了模型的可靠性。 采用硝酸還原酶和生化檢測(cè)方法分別檢測(cè)各組兔海馬及顳葉內(nèi)NO含量及NOS的活性變化。結(jié)果表明，在模型組中家兔腦組織的NO濃度NOS活性較正常對(duì)照組顯著高；模型組腦海馬及顳葉內(nèi)NOS的活性從6h開始迅速升高，1d達(dá)到峰值，隨后逐漸降低，7d后基本恢復(fù)正常水平，但仍高于其它各組；拉莫三嗪治療組和L-NNA治療組上述指標(biāo)則與模型組呈顯著性差異。各組家兔NOS活性的檢測(cè)結(jié)果表明，海馬及顳葉內(nèi)TNOS活性強(qiáng)弱順序?yàn)椋耗Ｐ徒M拉莫三嗪治療組 L-NNA治療組正常對(duì)照組。各組兔海馬及顳葉內(nèi)iNOS和cNOS的活性強(qiáng)弱順序都與TNOS基本一致。在腦組織中iNOS活性較弱，只有在癲癇模型組中iNOS活性與正常對(duì)照組之間存在顯著的差異。 利用SABC免疫組織化學(xué)法，在光鏡下對(duì)各組兔海馬內(nèi)nNOS、iNOS兩種陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布進(jìn)行觀測(cè)。結(jié)果顯示：各組兔腦組織內(nèi)nNOS和iNOS陽性神經(jīng)元的表達(dá)與NO的含量及NOS活性在腦組織中的變化趨勢(shì)保持一致。癲癇模型組NOS陽性神經(jīng)元的表達(dá)與對(duì)照組呈顯著差異，L-NNA治療組在6h-3d內(nèi)NOS陽性神經(jīng)元的表達(dá)與拉莫三嗪相比更接近對(duì)照組，拉莫三嗪治療組在3d后與L-NNA治療組相比更接近對(duì)照組。 結(jié)果表明：LiCl-PILO誘導(dǎo)的癲癇模型組海馬CA3區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞缺失、排列紊亂，腦勻漿內(nèi)NO含量的增加，L-NNA治療組和拉莫三嗪治療組在各時(shí)間點(diǎn)顯著或極顯著低于癲癇模型組（P0.05或P0.01），NO的變化規(guī)律與NOS變化規(guī)律基本一致且成正相關(guān);且海馬nNOS表達(dá)減弱和iNOS表達(dá)的增強(qiáng)，表明一氧化氮參與了EP模型的發(fā)病機(jī)制， NOS抑制劑L-NNA對(duì)海馬神經(jīng)元具有良好的保護(hù)作用。鑒于兔癲癇模型和EP患者之間的相似性，表明一氧化氮可能與該疾病的發(fā)病機(jī)理有關(guān)，推測(cè)可以使用NOS抑制劑-L-NNA作為開發(fā)EP藥物新的思路。
【關(guān)鍵詞】：兔 癲癇 一氧化氮 一氧化氮合酶 L-硝基-精氨酸 拉莫三嗪
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R742.1;R-332
【目錄】：

• 英文縮略表4-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 引言12-22
• 1.1 一氧化氮的概述12-16
• 1.1.1 一氧化氮的生物學(xué)特性12-13
• 1.1.2 一氧化氮的生物合成和一氧化氮合酶的分類13-15
• 1.1.3 一氧化氮合酶在腦內(nèi)的分布15-16
• 1.2 癲癇的研究進(jìn)展16-19
• 1.2.1 癲癇損傷腦組織機(jī)制16-17
• 1.2.1.1 興奮性機(jī)制增高16-17
• 1.2.1.2 抑制性機(jī)制降低17
• 1.2.2 癲癇模型的研究進(jìn)展17-19
• 1.2.2.1 點(diǎn)燃模型17-18
• 1.2.2.2 海人酸模型18-19
• 1.2.2.3 匹羅卡品卡品癲癇模型19
• 1.2.2.4 癲癇小鼠模型19
• 1.3 NO 與癲癇19-20
• 1.4 拉莫三嗪與癲癇20-21
• 1.5 NOS 抑制劑與癲癇21-22
• 1.6 本課題研究的目的和意義22
• 2 材料與方法22-28
• 2.1 試驗(yàn)材料22-23
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物22-23
• 2.1.2 主要試劑23
• 2.1.3 主要試驗(yàn)儀器23
• 2.1.4 試驗(yàn)場(chǎng)地及預(yù)備試驗(yàn)23
• 2.2 試驗(yàn)方法23-28
• 2.2.1 分組及其給藥方法23-24
• 2.2.2 動(dòng)物模型的制備24
• 2.2.3 各組兔模型行為學(xué)檢測(cè)24
• 2.2.4 取材24-25
• 2.2.5 腦切片制作25
• 2.2.6 SABC 免疫組織化學(xué)染色25
• 2.2.7 切片觀察和測(cè)量25-26
• 2.2.8 NO 含量的測(cè)定26
• 2.2.9 NOS 活性的測(cè)定26-28
• 3 結(jié)果與分析28-41
• 3.1 各組家兔行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果28-29
• 3.2 病理改變29
• 3.3 各組家兔海馬及顳葉 NO 含量檢測(cè)結(jié)果29-30
• 3.4 各組家兔海馬和顳葉 NOS 活性檢測(cè)結(jié)果30-33
• 3.4.1 TNOS 活性檢測(cè)結(jié)果30-31
• 3.4.2 iNOS 活性檢測(cè)結(jié)果31-32
• 3.4.3 cNOS 活性檢測(cè)結(jié)果32-33
• 3.5 各組家兔海馬內(nèi) NOS 陽性神經(jīng)元的變化33-41
• 3.5.1 各組家兔海馬內(nèi) nNOS 陽性神經(jīng)元的變化33-37
• 3.5.2 各組家兔海馬內(nèi) iNOS 陽性神經(jīng)元的變化37-41
• 4 討論41-47
• 4.1 用兔作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物制備 EP 模型的優(yōu)點(diǎn)及意義41-42
• 4.2 各組兔腦海馬及顳葉 NO 含量的變化42
• 4.3 各組兔腦海馬及顳葉 NOS 活性的變化42-44
• 4.4 各組兔腦海馬 nNOS、iNOS 陽性神經(jīng)元的數(shù)量形態(tài)變化44-46
• 4.5 PILO 兔模型的致癲機(jī)制及拉莫三嗪和 L-NNA 對(duì)模型兔腦組織內(nèi)的 NOS 的影響46-47
• 5 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-57
• 附圖57-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：564088