本文關(guān)鍵詞：誘導(dǎo)多能干細(xì)胞移植促進(jìn)腦出血模型大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)并減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡

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【摘要】：腦出血(Intracerebral hemorrhage, ICH)是一種嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病,其病死率和致殘率均比較高,預(yù)后常遺留有嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙。如何能夠更好地使受損傷的各種神經(jīng)功能,得到及時(shí)有效的恢復(fù)和改善,是一個(gè)十分緊迫的現(xiàn)實(shí)問題,也是一個(gè)世界性的難題。 誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(induced pluripotentstem cells, iPSCs)具有自我更新、多向分化和細(xì)胞再生的能力,它能分化為神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等衍生細(xì)胞,成為細(xì)胞移植治療ICH的一個(gè)重要的選擇。iPSCs的出現(xiàn)成功地繞開了胚胎干細(xì)胞的免疫原性和倫理性兩個(gè)最關(guān)鍵的問題,并能解決神經(jīng)干細(xì)胞種子細(xì)胞來源不足的問題�；颊咦泽w的iPSCs移植的臨床前研究,將極大促進(jìn)自體iPSCs移植技術(shù)和方法的臨床應(yīng)用的可行性。 細(xì)胞凋亡在很大程度上對(duì)天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate-specific protease,caspase)家族的酶的活化具有依賴性,而caspase-3這種酶是哺乳動(dòng)物細(xì)胞凋亡過程中起關(guān)鍵作用的蛋白酶。大量的研究證實(shí)了caspase-3在多種腦損傷的病理變化中起了極其重要的作用,其中包括腦梗塞、腦外傷、癲癇等各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病,它是有效參與神經(jīng)細(xì)胞凋亡的效應(yīng)因子。移植的iPSCs是否通過下調(diào)caspase-3的表達(dá)量和減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡起到促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)的作用,尚有待于進(jìn)一步研究。 本實(shí)驗(yàn)采用立體定向紋狀體注入膠原酶法制作大鼠ICH模型,隨后將iPSCs移植入ICH模型大鼠腦內(nèi)。通過TUNEL法進(jìn)行凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)及觀察caspase-3表達(dá)的變化,從抗凋亡的角度,探討ICH患者來源的iPSCs移植改善ICH大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的可能機(jī)理,為促進(jìn)iPSCs的臨床應(yīng)用提供更多的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)支持。 目的 初步探討iPSCs移植對(duì)ICH模型大鼠神經(jīng)功能恢復(fù),血腫周圍細(xì)胞凋亡數(shù)變化和caspase-3表達(dá)的影響。 方法 1.采用立體定位儀在大鼠的右側(cè)紋狀體注入Ⅶ型膠原酶的方法法制作ICH大鼠模型。選擇體重在200-250g的SD雄性大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組(只進(jìn)行穿刺不注入Ⅶ型膠原酶)、ICH模型組(在造模后24h-48h內(nèi)立體定位注射,10ulPBS液)及iPSCs移植組(在造模后24h-48h內(nèi)立體定位注射1×105／只的iPSCs懸液)。 2.采用免疫熒光brdu示蹤標(biāo)記觀察移植的iPSCs細(xì)胞在大鼠體內(nèi)存活、遷移情況； 3.采用mNSS(modified Neurological Severity Scores)評(píng)分來定量評(píng)價(jià)iPSCs移植治療ICH后的第1、3、7、14、28天神經(jīng)功能的動(dòng)態(tài)變化； 4.TUNEL染色法研究血腫周圍細(xì)胞凋亡變化,免疫組織化學(xué)及western blot法檢測(cè)caspase-3的表達(dá)情況。 結(jié)果 1.假手術(shù)組在術(shù)后1d、3d、7d、14d、28d各個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)均未出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺損癥狀,ICH模型組及iPSCs移植組的大鼠在術(shù)后24h內(nèi)即出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀并且達(dá)到高峰,并且這種神經(jīng)缺損的癥狀的高峰期可持續(xù)三天,此后隨時(shí)間的推移大鼠的神經(jīng)缺損癥狀逐漸恢復(fù),在第七天時(shí)可見莊其神經(jīng)缺損恢復(fù)較明顯,在第14、28天時(shí)其神經(jīng)缺損癥狀有更進(jìn)一步的恢復(fù),iPSCs移植組的mNSS評(píng)分在第14d、28d較ICH模型組顯著降低,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)： 2. IPSCs在ICH大鼠腦內(nèi)可以存活,并向ICH血腫區(qū)遷移。 3.移植治療后iPSCs移植組較大鼠ICH模型組細(xì)胞凋亡數(shù)減少(p0.05)；iPSCs移植組血腫周圍caspase-3的表達(dá)在術(shù)后28d較ICH模型組明顯減少,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 1.移植iPSCs能夠顯著促進(jìn)ICH大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)。 2. IPSCs在ICH大鼠腦內(nèi)可以存活,向腦血腫區(qū)遷移。 3. IPSCs移植組較ICH模型組血腫周圍凋亡細(xì)胞明顯減少。 4. IPSCs移植能顯著下調(diào)caspase-3的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：iPSCs 腦出血 神經(jīng)功能 凋亡 caspase-3
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R743.34;R-332
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮略詞表11-12
• 1 引言12-14
• 2 材料和方法14-25
• 3 結(jié)果25-31
• 4 討論31-37
• 5 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 綜述 誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(IPSCS)的研究進(jìn)展41-55
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 個(gè)人簡歷55-56
• 在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 韓寧;丁素菊;吳濤;朱幼麗;;大鼠腦出血模型中神經(jīng)細(xì)胞凋亡與自由基水平的相關(guān)性(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2008年06期

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本文編號(hào)：563523