本文關(guān)鍵詞：溫度對大鼠腹腔肥大細(xì)胞和RBL-2H3細(xì)胞活力和功能的影響

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【摘要】：肥大細(xì)胞通常被認(rèn)為是IgE介導(dǎo)的過敏性疾病中關(guān)鍵的效應(yīng)細(xì)胞,最近研究表明,它在調(diào)節(jié)先天和適應(yīng)性免疫反應(yīng),自身免疫,耐受移植排斥,促進(jìn)或抑制癌癥發(fā)生發(fā)展等方面都具有一定的作用。肥大細(xì)胞可合成和分泌多種細(xì)胞因子和生物活性物質(zhì),包括組胺、肝素、腫瘤壞死因子、血小板活化因子以及白細(xì)胞介素等。此外,肥大細(xì)胞的顆粒內(nèi)還含有類胰蛋白酶和糜蛋白酶等重要的蛋白水解酶。受外源性或內(nèi)源性刺激后,肥大細(xì)胞會脫顆粒釋放上述生物活性物質(zhì),驅(qū)動過敏反應(yīng),或誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增生,促進(jìn)膠原合成,參與病理性纖維化進(jìn)程,還可引發(fā)炎癥反應(yīng)。肥大細(xì)胞通常位于結(jié)締組織以及皮膚、呼吸道和胃腸道等器官的粘膜層。人體核心溫度為37℃,平均皮膚溫度為34℃,肥大細(xì)胞分布位置的溫度通常介于這兩者之間。溫度的不同可能會引起肥大細(xì)胞活力和功能的不同,致使肥大細(xì)胞脫顆粒,產(chǎn)生一系列反應(yīng)。RBL-2H3細(xì)胞系是體外研究肥大細(xì)胞功能的重要工具,但也有研究表明RBL-2H3細(xì)胞與肥大細(xì)胞之間存在一定差異。鑒于此,本實(shí)驗(yàn)以大鼠腹腔提取的肥大細(xì)胞和RBL-2H3細(xì)胞作為研究對象,探討不同溫度對肥大細(xì)胞活力和功能的影響,同時比較原代培養(yǎng)的肥大細(xì)胞和RBL-2H3細(xì)胞在體外研究中的差異。研究目的：探究不同溫度對于大鼠腹腔提取的肥大細(xì)胞和RBL-2H3細(xì)胞活力和功能的影響研究方法：1.選用體重220-250 g的SD雄性大鼠,使用Percoll密度梯度離心法分離純化大鼠腹腔肥大細(xì)胞,采用甲苯胺藍(lán)染色,c-kit抗體標(biāo)記、流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞純度。2.選取培養(yǎng)2h,4h,6h,12h,24 h,48 h,72 h時間點(diǎn),CCK8法檢測35。C和37℃培養(yǎng)條件下的腹腔提取的肥大細(xì)胞及RBL-2H3細(xì)胞增殖活力的變化。3.35℃和37℃下培養(yǎng)腹腔提取的肥大細(xì)胞及RBL-2H3細(xì)胞,使用外源性刺激物C48/80和IgE刺激細(xì)胞脫顆粒,并使用肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑色甘酸鈉抑制細(xì)胞脫顆粒。4.底物顯色法測定外源性刺激物作用后腹腔提取的肥大細(xì)胞及RBL-2H3細(xì)胞β-氨基己糖苷酶釋放率。5.ELISA方法測定外源性刺激物作用后腹腔提取的肥大細(xì)胞及RBL-2H3細(xì)胞組胺含量,計算組胺釋放率研究結(jié)果：1.通過改良密度梯度離心法提取純化大鼠腹腔肥大細(xì)胞,鑒定肥大細(xì)胞純度,甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果顯示細(xì)胞純度達(dá)到95%,細(xì)胞活性良好。2.35℃和37℃培養(yǎng)條件下,培養(yǎng)2h時腹腔肥大細(xì)胞增殖活力無顯著性差異,2h之后,35℃培養(yǎng)條件下的腹腔肥大細(xì)胞增殖活力明顯弱于37℃培養(yǎng)條件下的腹腔肥大細(xì)胞(P0.05),并隨時間的變化差異程度逐漸變大；腹腔肥大細(xì)胞在無外界刺激的情況下,35℃培養(yǎng)條件下的細(xì)胞p-氨基己糖苷酶釋放率和組胺釋放率明顯高于37℃培養(yǎng)條件下的細(xì)胞；C48/80或IgE刺激后,35℃培養(yǎng)條件下的細(xì)胞p-氨基己糖苷酶釋放率和組胺釋放率明顯升高,且升高程度顯著高于37℃培養(yǎng)條件下的細(xì)胞。3.35℃和37℃培養(yǎng)條件下,RBL-2H3細(xì)胞增殖活力都大于腹腔肥大細(xì)胞；無外界刺激時,35℃和37℃的腹腔肥大細(xì)胞p-氨基己糖苷酶釋放率都顯著高于RBL-2H3細(xì)胞,但組胺釋放率有波動；C48/80刺激后,腹腔肥大細(xì)胞和RBL-2H3細(xì)胞β-氨基己糖苷酶及組胺釋放率都升高,細(xì)胞脫顆粒程度加劇,但RBL-2H3細(xì)胞升高幅度顯著低于腹腔肥大細(xì)胞；IgE刺激后,肥大細(xì)胞β-氨基己糖苷酶釋放率升高,且顯著高于RBL-2H3細(xì)胞,肥大細(xì)胞組胺釋放率也有升高,但35℃培養(yǎng)條件下高于RBL-2H3細(xì)胞,37℃培養(yǎng)條件下情況相反。結(jié)論：1.改良方法,建立大鼠腹腔肥大細(xì)胞原代培養(yǎng)體系。2.35℃培養(yǎng)條件下腹腔肥大細(xì)胞增殖活力明顯弱于37℃培養(yǎng)條件下的腹腔肥大細(xì)胞,并隨時間的變化差異程度逐漸變大；腹腔肥大細(xì)胞在35℃培養(yǎng)條件下脫顆粒程度高于37℃,更易受到外界刺激；3.相同培養(yǎng)溫度條件下,RBL-2H3細(xì)胞增殖活力大于腹腔肥大細(xì)胞；針對不同刺激物,腹腔肥大細(xì)胞和RBL-2H3細(xì)胞的β-氨基己糖苷酶和組胺釋放率不同。4.腹腔肥大細(xì)胞與RBL-2H3細(xì)胞在兩種培養(yǎng)溫度條件下的活力和功能不同,不同刺激物的生物刺激效果不同,RBL-2H3細(xì)胞在體外研究中不能完全代替肥大細(xì)胞。本研究的特色與創(chuàng)新：1.確認(rèn)了溫度對于肥大細(xì)胞活力和功能的影響,為探究機(jī)體不同位置肥大細(xì)胞的致病機(jī)理提供一定理論依據(jù)。2.揭示了腹腔肥大細(xì)胞和RBL-2H3細(xì)胞在不同培養(yǎng)溫度條件下存在差異。
【關(guān)鍵詞】：腹腔肥大細(xì)胞 RBL-2H3細(xì)胞 C48/80 IgE 溫度
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-14
• 一、前言14-17
• 二、材料與方法17-23
• 1. 儀器與試劑17-18
• 2、實(shí)驗(yàn)方法18-22
• 3、統(tǒng)計分析22-23
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-34
• 1. 大鼠腹腔肥大細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定23-24
• 2. RBL-2H3細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定24-25
• 3. 不同溫度對腹腔肥大細(xì)胞活力和功能的影響25-28
• 4. 不同溫度下腹腔肥大細(xì)胞與RBL-2H3細(xì)胞活力和功能的差異28-32
• 5. 大鼠睪丸中肥大細(xì)胞的定位32-34
• 四、討論34-36
• 五、全文總結(jié)36-37
• 六、參考文獻(xiàn)37-40
• 文獻(xiàn)綜述40-56
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 碩士研究生期間發(fā)表的論文56-57
• 致謝57-58

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本文編號：562571