發(fā)布時(shí)間：2017-07-18 14:27

  本文關(guān)鍵詞：適合人肌母細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基

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【摘要】：背景:肌母細(xì)胞體外培養(yǎng)大多使用添加胎牛血清培養(yǎng)基,存在很多不足,開發(fā)無(wú)血清培養(yǎng)基,更加穩(wěn)定、安全、經(jīng)濟(jì),有廣泛的應(yīng)用前景。目的:初步探索適合人肌母細(xì)胞培養(yǎng)的無(wú)血清培養(yǎng)基。方法:配制含胎牛血清培養(yǎng)基(DMEM/F12 1∶1添加胰島素樣生長(zhǎng)因子1、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和體積分?jǐn)?shù)20%胎牛血清),間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基組(無(wú)血清培養(yǎng)基、2%血清替代物、2 mmol/L L-谷氨酰胺,人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞純度大于99%,UltraC ULTURETM添加血清替代物,谷氨酰胺)。自制無(wú)血清培養(yǎng)基組(GibcoTM添加胰島素樣生長(zhǎng)因子1,堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子,谷氨酰胺)。3種培養(yǎng)基分別對(duì)人肌母細(xì)胞分別進(jìn)行培養(yǎng),觀察肌母細(xì)胞的形態(tài)、免疫組織化學(xué)的鑒定,計(jì)算克隆的形成率,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)的曲線,MTT檢測(cè)肌母細(xì)胞的活性,比較3種培養(yǎng)基培養(yǎng)肌母細(xì)胞增殖、分化的差異。結(jié)果與結(jié)論:各組細(xì)胞形態(tài)上無(wú)明顯差異;各組免疫組織化學(xué)鑒定肌母細(xì)胞純度均達(dá)99%;含胎牛血清培養(yǎng)基組和自制無(wú)血清培養(yǎng)基組克隆形成率顯著高于間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基組(P0.01),含胎牛血清培養(yǎng)基組克隆形成率顯著高于自制無(wú)血清培養(yǎng)基組(P0.01);含胎牛血清培養(yǎng)基組與自制無(wú)血清培養(yǎng)基組細(xì)胞數(shù)遠(yuǎn)高于間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基組;自制無(wú)血清培養(yǎng)基組細(xì)胞活性顯著高于含胎牛血清培養(yǎng)基組和間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基組(P0.01)。自制無(wú)血清培養(yǎng)基組可有效用于肌母細(xì)胞的培養(yǎng),在促進(jìn)肌母細(xì)胞早期貼壁、增殖上還需進(jìn)一步優(yōu)化。
【作者單位】： 武警總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;災(zāi)害救援醫(yī)學(xué)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;遼寧醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 肌纖維母細(xì)胞 幼牛血清 培養(yǎng)基 組織構(gòu)建 組織工程 肌母細(xì)胞 胎牛血清 無(wú)血清 血清替代物 谷氨酰胺 增殖 細(xì)胞培養(yǎng)
【分類號(hào)】：R329.2;Q813
【正文快照】： 0引言Introduction實(shí)驗(yàn)細(xì)胞:采集成年燒傷志愿者股直肌手術(shù)后2 h內(nèi)的肌母細(xì)胞是已分化的最原始的肌性細(xì)胞,能夠彼此天肌肉組織2 g,剪碎組織塊除去脂肪后用膠原酶,胰酶消化,然融合和核傳遞,產(chǎn)生收縮蛋白,適用于細(xì)胞治療和基因過(guò)濾收集肌母細(xì)胞,接種到T25培養(yǎng)瓶,于37℃,體積分組

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