本文關(guān)鍵詞：3T3-fGFP細(xì)胞攝取神經(jīng)干細(xì)胞胞外泌囊泡的途徑

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【摘要】：目的以超速離心方案提取胞外囊泡的鑒定為基礎(chǔ),初步探求小鼠神經(jīng)干細(xì)胞C17.2胞外囊泡與小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3T3-fGFP細(xì)胞之間的通訊交流通路。方法分別用超速離心法獲得胞外囊泡(EV)和Total Exosome Isolation Kit試劑盒獲得外泌體(EXO);用透射電鏡和原子力顯微鏡分別對(duì)兩種樣品進(jìn)行形態(tài)學(xué)比較;用SDS-PAGE和Western blot分別對(duì)兩種樣品進(jìn)行生物化學(xué)比較;用染料標(biāo)記超速離心法獲得胞外囊泡;將標(biāo)記的胞外囊泡與3T3-fGFP細(xì)胞共孵育,對(duì)3T3-fGFP細(xì)胞攝取胞外囊泡進(jìn)行研究;通過(guò)藥理實(shí)驗(yàn)篩選3T3-fGFP細(xì)胞攝取胞外囊泡的主要通路。結(jié)果 C17.2細(xì)胞生長(zhǎng)良好,形態(tài)規(guī)則未出現(xiàn)明顯分化現(xiàn)象。在透射電鏡下兩種樣品均觀察到圓形雙層膜結(jié)構(gòu)和"杯狀"外形的囊泡,直徑分布多集中在300 nm以內(nèi),并且發(fā)現(xiàn)胞外囊泡的平均直徑大于外泌體。原子力顯微鏡的結(jié)果顯示,兩種樣品的高度分布多集中在2~20 nm以內(nèi),直徑分布多集中在300 nm以內(nèi),并且外泌體的平均高度和平均直徑均大于胞外囊泡。SDS-PAGE結(jié)果顯示兩種樣品所含蛋白種類、表達(dá)豐度接近。在相同上樣量下HSP70的表達(dá)強(qiáng)度兩者接近,但CD63、CD9和CD81 3種蛋白在胞外囊泡中表達(dá)更強(qiáng)。攝取實(shí)驗(yàn)表明C17.2細(xì)胞胞外囊泡可以被3T3-fGFP細(xì)胞內(nèi)化,被包裹在囊泡內(nèi),轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核周圍的區(qū)域,并且攝取數(shù)量隨著時(shí)間延長(zhǎng)而增加(P0.05)。通過(guò)藥理實(shí)驗(yàn)確定網(wǎng)格蛋白(Clathrin)介導(dǎo)的內(nèi)吞通路為3T3-f GFP細(xì)胞攝取C17.2細(xì)胞胞外囊泡的主要通路。結(jié)論小鼠神經(jīng)干細(xì)胞外泌體可能主要經(jīng)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的通路參與了神經(jīng)干細(xì)胞與3T3-fGFP細(xì)胞的通訊。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍眼科中心視覺(jué)損傷與再生修復(fù)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞 胞外囊泡 T-fGFP細(xì)胞 網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)通路
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃,2013CB967002)~~
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 針對(duì)視網(wǎng)膜色素變性(retinitis pigmentosa,RP)等不可逆性感光細(xì)胞死亡所導(dǎo)致的視功能障礙,目前研究較多的治療方法有視網(wǎng)膜細(xì)胞移植、基因治療、干細(xì)胞移植研究等,但仍然無(wú)有效的治療手段。神經(jīng)干細(xì)胞移植為目前最有前景的治療方法之一,但作用機(jī)制仍不清楚。過(guò)去認(rèn)為干細(xì)胞的

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：556207