本文關(guān)鍵詞：重組人血管生成素制備和生物活性鑒定

  更多相關(guān)文章： 血管生成素 原核表達 核糖核酸酶活性 管腔形成 細胞核轉(zhuǎn)位

【摘要】：血管生成素(angiogenin,ANG)是一種很強的促血管生成因子,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系,拮抗ANG被認為是抗腫瘤血管靶向治療的一個有效途徑.同時,ANG具有促進傷口愈合、保護神經(jīng)元以及抗細菌感染等活性.但是,開展相關(guān)研究所需的最基本的天然ANG蛋白來源非常有限,大規(guī)模表達和純化有生物活性的重組血管生成素蛋白(r ANG)具有廣泛的應(yīng)用前景.我們可以在大腸桿菌中表達r ANG,但表達產(chǎn)物在胞內(nèi)聚集形成不溶性的包含體,需經(jīng)變性、復(fù)性、陽離子交換層析和反向C18的HPLC方法純化后,才能獲得高純度的r ANG.經(jīng)SDS-PAGE鑒定,純化蛋白質(zhì)為單一條帶,質(zhì)譜鑒定蛋白分子量與理論分子量一致.經(jīng)體外活性檢測,證實純化的蛋白質(zhì)具有核糖核酸酶活性、促內(nèi)皮細胞管腔形成和細胞核轉(zhuǎn)位等生物學(xué)活性.本文詳細描述了r ANG的表達、純化、活性鑒定等過程和所使用的方法與技術(shù).
【作者單位】： 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所;浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院分子醫(yī)學(xué)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 血管生成素 原核表達 核糖核酸酶活性 管腔形成 細胞核轉(zhuǎn)位
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.31170721,No.31400648)資助~~
【分類號】：R392
【正文快照】： 血管生成素(angiogenin,ANG)是第一個基于血管生成活性從人結(jié)直腸癌細胞HT-29培養(yǎng)液中分離和純化的細胞因子(產(chǎn)量約為500 ng/L)[1].ANG有微弱的核糖核酸酶活性,屬于核糖核酸酶A超家族成員[1,2].目前認為,ANG與腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、組織損傷修復(fù)、糖尿病引起的視網(wǎng)膜受損等疾

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳麗金,陳宇光;包含體內(nèi)重組蛋白質(zhì)的復(fù)性[J];生命的化學(xué);2001年04期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 溫茜;馬驪;蘇瑾;羅微;王小寧;;小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子的表達、純化與鑒定[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年08期

2 梁海勇;李騫;陳金軍;;蜘蛛毒素研究進展[J];檢驗醫(yī)學(xué)與臨床;2013年19期

3 劉先俊,劉方欣,漆洪波;重組人瘦素的分離純化[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2003年04期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉朝輝;黃瓜花葉病毒運動蛋白與微絲作用關(guān)系及胞間連絲通透性調(diào)節(jié)機制的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

2 占利;淋球菌外膜蛋白NspA在大腸桿菌中高效表達及其性能的初步研究[D];四川大學(xué);2006年

3 張明;牛IFNτ基因成熟蛋白CDS區(qū)的克隆、原核表達及其在妊娠建立過程中的生物學(xué)功能研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 宋曉暉;H5N1亞型禽流感病毒HA1基因在大腸桿菌中的表達與純化[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

2 湯輝;虎紋捕鳥蛛毒素-Ⅰ和ω-芋螺毒素MVIIA嵌合體的合成和活性鑒定[D];湖南師范大學(xué);2002年

3 喻志強;虎紋捕鳥蛛毒素-Ⅰ（HWTX-Ⅰ）突變體及天然ω-芋螺毒素MVIIA的合成和活性鑒定[D];湖南師范大學(xué);2002年

4 姚建聰;豬繁殖與呼吸綜合征病毒BJ-4株GP5單克隆抗體的研制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

5 苗佩宏;hTERT蛋白表達及其模擬表位篩選[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

6 劉文華;2型RA42KDa外膜蛋白的原核表達及免疫活性研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

7 符芳;新城疫病毒La Sota株F和HN基因的克隆表達及免疫原性分析[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

8 傅容湛;牛血清白蛋白變性復(fù)性過程及其部分折疊中間體的研究[D];西北大學(xué);2006年

9 溫茜;雙功能分子hIL-2/mGM-CSF蛋白的改建、表達、純化及功能的初步研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

10 李茜;H5N1亞型禽流感病毒NS1基因的克隆與表達及ELISA檢測方法的初步建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 彭辰;葛昊;何書英;高向東;;重組巴氏桿菌透明質(zhì)酸合成酶的克隆、表達及活性鑒定[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報;2009年06期

2 張德震,張勁一,孫侖泉;菜豆凝集素的分離純化及活性鑒定[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1987年01期

3 鄒冬輝;張家穎;路英麗;郭焱;王忠山;;重組人前列腺特異性抗原純化與活性鑒定[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年01期

4 肖樂;王琴;蔡昆;屠偉;侯曉軍;李濤;王慧;;腸出血性大腸桿菌轉(zhuǎn)移緊密黏附素受體的表達及其活性鑒定[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2010年09期

5 張薇;高紅梅;葉賢龍;于藝雪;劉銘瑤;王文飛;任桂萍;李德山;;小鼠白細胞介素17A的克隆、表達及活性鑒定[J];中國免疫學(xué)雜志;2010年09期

6 孫安源,孫，

本文編號：548729