本文關(guān)鍵詞：重組人血管生成素制備和生物活性鑒定

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【摘要】：血管生成素(angiogenin,ANG)是一種很強(qiáng)的促血管生成因子,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系,拮抗ANG被認(rèn)為是抗腫瘤血管靶向治療的一個(gè)有效途徑.同時(shí),ANG具有促進(jìn)傷口愈合、保護(hù)神經(jīng)元以及抗細(xì)菌感染等活性.但是,開展相關(guān)研究所需的最基本的天然ANG蛋白來源非常有限,大規(guī)模表達(dá)和純化有生物活性的重組血管生成素蛋白(r ANG)具有廣泛的應(yīng)用前景.我們可以在大腸桿菌中表達(dá)r ANG,但表達(dá)產(chǎn)物在胞內(nèi)聚集形成不溶性的包含體,需經(jīng)變性、復(fù)性、陽離子交換層析和反向C18的HPLC方法純化后,才能獲得高純度的r ANG.經(jīng)SDS-PAGE鑒定,純化蛋白質(zhì)為單一條帶,質(zhì)譜鑒定蛋白分子量與理論分子量一致.經(jīng)體外活性檢測,證實(shí)純化的蛋白質(zhì)具有核糖核酸酶活性、促內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成和細(xì)胞核轉(zhuǎn)位等生物學(xué)活性.本文詳細(xì)描述了r ANG的表達(dá)、純化、活性鑒定等過程和所使用的方法與技術(shù).
【作者單位】： 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所;浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院分子醫(yī)學(xué)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 血管生成素 原核表達(dá) 核糖核酸酶活性 管腔形成 細(xì)胞核轉(zhuǎn)位
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.31170721,No.31400648)資助~~
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 血管生成素(angiogenin,ANG)是第一個(gè)基于血管生成活性從人結(jié)直腸癌細(xì)胞HT-29培養(yǎng)液中分離和純化的細(xì)胞因子(產(chǎn)量約為500 ng/L)[1].ANG有微弱的核糖核酸酶活性,屬于核糖核酸酶A超家族成員[1,2].目前認(rèn)為,ANG與腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、組織損傷修復(fù)、糖尿病引起的視網(wǎng)膜受損等疾

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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6 孫安源,孫，

本文編號(hào)：548729