本文關(guān)鍵詞：IκBα低表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠的建立及其表達(dá)調(diào)控

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【摘要】：目的構(gòu)建IκBα低表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠并分析IκBα的表達(dá)調(diào)控機(jī)制,為體內(nèi)考察IκBα基因的整體效應(yīng)提供基礎(chǔ)。方法構(gòu)建轉(zhuǎn)基因構(gòu)件RV-IκBα-Loxp-Mut-Neo載體,將線性化載體電轉(zhuǎn)入胚胎干細(xì)胞,Southern blot篩選陽性克隆,再將陽性克隆進(jìn)行顯微囊胚注射,獲得嵌合鼠,嵌合鼠與C57BL/6N交配獲得F1代雜合型IκBα knockin小鼠。純合型IκBα knockin小鼠與Ella Cre鼠雜交,其后代自交獲得刪除Loxp位點(diǎn)區(qū)間的IκBα knockout純合型小鼠,PCR分別鑒定基因型。Western blot檢測轉(zhuǎn)基因小鼠各器官IκBα的表達(dá)情況,以正常野生C57/B6小鼠為對(duì)照。結(jié)果經(jīng)PCR方法鑒定得到IκBα knockin和IκBα knockout轉(zhuǎn)基因小鼠;Western blot結(jié)果顯示與野生型小鼠相比,F2代IκBα knockin純合型小鼠的脾、胸腺、肺等器官中IκBα的表達(dá)量降低,在IκBα knockin雜合型小鼠中,除上述器官外,皮膚、鼻咽、胃等器官中突變型染色單體IκBα的表達(dá)量也比野生型低;F2代IκBα knockout小鼠多數(shù)器官中IκBα的表達(dá)量低于正常野生C57/B6小鼠。結(jié)論成功建立了在多數(shù)器官低表達(dá)IκBa的轉(zhuǎn)基因鼠;其中κB位點(diǎn)可能參與調(diào)控胸腺、脾、肺、鼻咽、皮膚、胃等器官中IκBa的表達(dá),而其上游3 kb調(diào)控序列可能參與調(diào)控肝、鼻咽、胃、胰腺、小腸等器官中IκBa的表達(dá)。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所;
【關(guān)鍵詞】： IκBα 低表達(dá) 轉(zhuǎn)基因 調(diào)控機(jī)制
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):31070773)
【分類號(hào)】：Q78;R-332
【正文快照】： IκBα是核因子NF-κB蛋白家族的最主要抑制劑,能直接決定NF-κB通路激活與否,因此IκBα可以作為研究NF-κB通路的靶點(diǎn)[1]。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤、發(fā)炎性疾病、自身免疫性疾病、敗血性休克、病毒感染等多種疾病中均有NF-κB通路的不恰當(dāng)激活[2-3]。我們設(shè)想是否能建立一種由于IκBα

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9 賈永林;賈延R，

本文編號(hào)：543639