本文關鍵詞：重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白對帕金森病模型小鼠的作用及其機制研究

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【摘要】：靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白（Fungal Immunomodulatory Protein of Ganodermalucidium，LZ-8）是從赤靈芝菌絲體提取物中分離出的一種免疫調(diào)節(jié)蛋白，研究發(fā)現(xiàn)其具有促進淋巴細胞增殖、抑制全身性過敏反應、抑制器官移植后的排斥反應以及抑制腫瘤等生物學活性。本論文使用的重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(recombinant Ganoderma lucidum immunoregulatory protein，rLZ-8)，是應用基因工程方法，重新設計編碼LZ-8的蛋白基因，在畢赤酵母中分泌表達后得到的大量具有高純度和穩(wěn)定生物活性的rLZ-8樣品。 帕金森病(Parkinson’s Disease，PD)是中老年最常見的神經(jīng)退行性疾病之一，其主要病理特征是中腦黑質(zhì)多巴胺(dopamine，DA)能神經(jīng)元的緩慢、進行性變性死亡。在對其發(fā)病機制的研究領域，氧化應激損傷和神經(jīng)炎癥反應是近年來的研究熱點之一。PD發(fā)生后，機體出現(xiàn)氧化應激損傷，細胞免疫、體液免疫及各種細胞因子水平也發(fā)生變化，除此之外還伴隨著神經(jīng)膠質(zhì)細胞活性和數(shù)量的改變。研究也證實，一些抗炎類藥物，可能對黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元有保護作用。因此設計本實驗，探索rLZ-8是否對PD具有保護作用，并探索rLZ-8是否能通過抑制氧化應激和抑制炎癥反應來發(fā)揮其作用。 實驗選用C57BL/6小鼠120只，隨機分為6組：正常對照組、PD模型組、美多芭組（陽性藥組）、rLZ-8低劑量組、rLZ-8中劑量組、rLZ-8高劑量組，每組20只。小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine，MPTP，30mg/kg/day），，連續(xù)給藥5天建立PD模型。 MPTP首次注射9天前，正常對照組和PD模型組腹腔注射生理鹽水，陽性藥組灌胃給予120mg/kg美多芭，rLZ-8低、中、高劑量組分別腹腔注射60μg/kg rLZ-8、100μg/kg rLZ-8、160μg/kg rLZ-8，一直持續(xù)至MPTP末次給藥7天后。MPTP末次給藥7天后，對各組小鼠進行行為學實驗：爬桿實驗、懸掛實驗、轉棒實驗。行為學實驗結束后，使用免疫組化法檢測小鼠腦組織酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）的表達，ELISA法檢測小鼠腦組織白細胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白細胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）的含量，并使用比色法檢測小鼠腦組織超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）的活力和丙二醛（malondialdehyde， MDA）的含量。 行為學實驗表明，rLZ-8能縮短PD小鼠爬桿實驗的掉頭時間和爬桿時間，延長懸掛時間，改善懸掛情況，并延長轉棒實驗潛伏期，減少掉落次數(shù)。免疫組化結果表明，rLZ-8能顯著增加PD小鼠黑質(zhì)TH陽性細胞數(shù)，增強紋狀體神經(jīng)纖維上TH免疫陽性反應。此外，rLZ-8能顯著降低PD小鼠黑質(zhì)部位細胞因子IL-1β、IL-6的含量，增強SOD和GSH-Px活力，降低MDA含量。 通過上述的研究，初步證明rLZ-8能改善MPTP誘導的小鼠PD模型行為學損傷，拮抗MPTP誘導的DA能神經(jīng)元變性，表明rLZ-8對PD模型小鼠具有保護作用。其作用機制是通過抑制免疫反應以及抑制氧化應激發(fā)揮保護多巴胺能神經(jīng)元的作用。上述數(shù)據(jù)初步表明rLZ-8是一種潛在的可用于臨床治療PD的藥物。
【關鍵詞】：帕金森病 重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白 動物模型 氧化應激 白細胞介素-1β 白細胞介素-6
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R742.5;R285.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-21
• 1.1 帕金森病概述11
• 1.2 帕金森病藥物治療的進展11-15
• 1.3 PD 與免疫學異常和氧化應激之間的關系15-18
• 1.4 MPTP 模型在帕金森病研究中的應用18
• 1.5 靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白的研究現(xiàn)狀18-21
• 第2章 材料和方法21-31
• 2.1 實驗材料21-22
• 2.1.1 實驗動物21
• 2.1.2 藥品和試劑21
• 2.1.3 實驗耗材21-22
• 2.1.4 儀器設備22
• 2.2 實驗方法22-31
• 2.2.1 MPTP 誘導的小鼠 PD 模型的建立22-23
• 2.2.2 實驗分組及給藥方法23
• 2.2.3 觀察指標23-30
• 2.2.3.1 小鼠體重23
• 2.2.3.2 體征觀察23
• 2.2.3.3 行為學實驗23-26
• 2.2.3.4 小鼠腦組織各項指標的檢測26-30
• 2.2.3.5 小鼠各臟器系數(shù)的測定30
• 2.2.4 統(tǒng)計學處理30-31
• 第3章 實驗結果31-44
• 3.1 各組小鼠體重變化的測定結果31
• 3.2 各組小鼠體征變化的觀察結果31-33
• 3.3 各組小鼠行為學實驗的測定結果33-37
• 3.3.1 各組小鼠爬桿實驗測定結果33-34
• 3.3.2 各組小鼠懸掛實驗測定結果34-36
• 3.3.3 各組小鼠轉棒實驗測定結果36-37
• 3.4 小鼠腦組織各項指標的測定結果37-42
• 3.4.1 各組小鼠 TH 免疫組化染色結果37-39
• 3.4.2 各組小鼠腦組織 IL-1β含量測定結果39-40
• 3.4.3 各組小鼠腦組織 IL-6 含量測定結果40
• 3.4.4 各組小鼠 SOD 活力測定結果40-41
• 3.4.5 各組小鼠 MDA 含量測定結果41-42
• 3.4.6 各組小鼠 GSH-Px 活力測定結果42
• 3.5 小鼠各臟器系數(shù)測定結果42-44
• 第4章 結果分析與討論44-49
• 4.1 rLZ-8對小鼠無顯著毒副作用44
• 4.2 rLZ-8對PD 小鼠模型行為學損傷的改善作用44-45
• 4.3 rLZ-8對PD 小鼠模型 DA 能神經(jīng)元的保護作用45-46
• 4.4 rLZ-9對PD 小鼠模型促炎細胞因子的抑制作用46-47
• 4.5 rLZ-8對PD 小鼠模型氧化應激的抑制作用47-49
• 第5章 結論49-50
• 參考文獻50-58
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果58-59
• 致謝59

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