本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌外膜蛋白F原核載體構(gòu)建、表達(dá)條件優(yōu)化及免疫保護(hù)作用研究

  更多相關(guān)文章： 外膜蛋白F 免疫保護(hù) 正交試驗(yàn) 誘導(dǎo)條件

【摘要】：目的構(gòu)建并鑒定銅綠假單胞菌(PA)外膜蛋白F(Opr F)原核表達(dá)載體,分析Opr F蛋白免疫保護(hù)作用,優(yōu)化Opr F蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件。方法通過分子克隆獲得Opr F蛋白的表達(dá)菌株。利用切膠純化獲得Opr F蛋白,免疫小鼠,通過PA攻毒實(shí)驗(yàn)分析Opr F蛋白免疫保護(hù)作用。采用正交試驗(yàn),獲得Opr F菌株的最佳表達(dá)條件與培養(yǎng)條件。結(jié)果 Opr F重組載體雙酶切、DNA測(cè)序鑒定結(jié)果與預(yù)測(cè)一致。Western blot檢測(cè)表明抗體能與Opr F蛋白結(jié)合。Opr F蛋白對(duì)小鼠保護(hù)率達(dá)64.29%。Opr F菌株最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件為:加IPTG終濃度0.1 mmol/L,誘導(dǎo)時(shí)菌液OD600值1.0,溫度32℃,誘導(dǎo)時(shí)間8 h;最佳培養(yǎng)條件為:轉(zhuǎn)速230 r/min,葡萄糖濃度為0%,裝液量50 ml。結(jié)論獲得Opr F表達(dá)菌株最佳的表達(dá)條件與培養(yǎng)條件;驗(yàn)證Opr F蛋白對(duì)小鼠PA感染有免疫保護(hù)作用。
【作者單位】： 陜西理工學(xué)院維生素D生理與應(yīng)用研究所;
【關(guān)鍵詞】： 外膜蛋白F 免疫保護(hù) 正交試驗(yàn) 誘導(dǎo)條件
【基金】：陜西省教育廳科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目(No:2013JK0723)
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 表1 Opr F菌株培養(yǎng)條件正交試驗(yàn)不同因子的表達(dá)水平因子代號(hào)水平1 2 3葡萄糖濃度/%a 0 0.4 1搖床轉(zhuǎn)速/(r/min)b 180 200 230裝液量/ml c 50 75 100表2 Opr F誘導(dǎo)表達(dá)條件正交試驗(yàn)不同因子的表達(dá)水平因子代號(hào)水平1 2 3加IPTG菌OD600值e 0.5 0.8 1IPTG終濃度/mmol f 0.1 0.3 0.5

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本文編號(hào)：540826