發(fā)布時間：2017-07-14 05:01

  本文關(guān)鍵詞：P21蛋白亞細胞定位表達對人支氣管上皮細胞凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： P21 亞細胞定位 凋亡 表達質(zhì)粒 細胞轉(zhuǎn)染 人支氣管上皮細胞

【摘要】：目的： 研究p21表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染16HBE細胞后，P21蛋白過表達的亞細胞定位及其對細胞凋亡的影響。 方法： 用p21表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染16HBE細胞，建立表達載體模型，再分別提取總RNA和胞核、胞漿蛋白，，用RT-PCR和western blot半定量方法研究P21蛋白過表達亞細胞定位情況，并用熒光顯微鏡及流式細胞儀分析P21蛋白過表達亞細胞定位對細胞凋亡的影響。 結(jié)果： 1.p21質(zhì)粒組RNA表達與空質(zhì)粒組、空白對照組有顯著性差異（p=0.000㖞，空質(zhì)粒組與空白對照組無明顯差異（p=0.704）。 2. p21質(zhì)粒組胞漿P21蛋白表達明顯高于胞核（p=0.002），空質(zhì)粒組和空白對照組胞核P21蛋白表達高于胞漿（p=0.033，0.007）。胞漿中P21蛋白表達，p21質(zhì)粒組高于對照組（p=0.000）；空質(zhì)粒組與空白對照組無明顯差異（p=0.87）。胞核中P21蛋白表達三組無明顯差異（p均＞0.05）。 3. p21質(zhì)粒轉(zhuǎn)染16HBE細胞24h-72h后能導致16HBE細胞凋亡，凋亡低于空質(zhì)粒組和空白對照組，并隨著時間延長，16HBE細胞凋亡減少，但在72h時晚期凋亡和死亡細胞明顯增高。p21質(zhì)粒組24h凋亡率明顯高于48h（p=0.036）；空質(zhì)粒組和空白對照組24h凋亡率明顯低于48h（p=0.033, p=0.037）。p21質(zhì)粒組分別與空質(zhì)粒組和空白對照組有顯著性差異（p＜0.05），空質(zhì)粒組和空白對照組細胞凋亡無顯著性差異（p＞0.05）。 結(jié)論： p21表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染16HBE細胞后主要在細胞漿內(nèi)過表達并可抑制細胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：P21 亞細胞定位 凋亡 表達質(zhì)粒 細胞轉(zhuǎn)染 人支氣管上皮細胞
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 本文主要英漢縮略詞表8-9
• 第1章 引言9-10
• 第2章 材料與方法10-19
• 2.1 主要試劑和材料10-11
• 2.2 主要設備11-12
• 2.3 部分試劑配制12-13
• 2.3.1 PCR 電泳液 TBE12
• 2.3.2 瓊脂糖凝膠（2%）配制12
• 2.3.3 SDS-PAGE 電泳液12
• 2.3.4 轉(zhuǎn)膜液12-13
• 2.3.5 SDS-PAGE 凝膠配制13
• 2.3.6 PBST13
• 2.3.7 封閉液13
• 2.4 細胞學實驗13-15
• 2.4.1 細胞復蘇13-14
• 2.4.2 細胞培養(yǎng)14
• 2.4.3 細胞傳代14
• 2.4.4 細胞凍存14
• 2.4.5 質(zhì)粒提取14
• 2.4.6 細胞轉(zhuǎn)染(六孔板)14-15
• 2.4.7 細胞分組及處理15
• 2.5 RT-PCR 法檢測 p21 基因的表達15-16
• 2.5.1 提取總 RNA15
• 2.5.2 總 RNA 定量15-16
• 2.5.3 引物見下表16
• 2.5.4 cDNA 合成16
• 2.5.5 PCR 擴增16
• 2.5.6 p21 mRNA 表達半定量分析16
• 2.6 Western blotting 方法檢測 p21 蛋白的表達16-17
• 2.6.1 胞漿、胞核蛋白的提取16-17
• 2.6.2 Western blotting 方法操作步驟17
• 2.7 Annexin V/PI 檢測細胞凋亡17-18
• 2.7.1 熒光顯微鏡觀察細胞凋亡17-18
• 2.7.2 流式細胞儀分析細胞凋亡18
• 2.8 統(tǒng)計方法18-19
• 第3章 結(jié)果19-25
• 3.1 熒光顯微鏡觀察細胞轉(zhuǎn)染結(jié)果19
• 3.2 RT-PCR 測三組細胞 p21 基因表達19-20
• 3.3 Western Blot 測定三組細胞 P21 蛋白表達20-22
• 3.4 熒光顯微鏡觀察三組細胞凋亡22-23
• 3.5 流式細胞儀分析三組細胞凋亡23-25
• 第4章 討論25-31
• 4.1 細胞轉(zhuǎn)染25-26
• 4.2 P21 蛋白亞細胞定位與細胞凋亡26-27
• 4.3 p21 作用途徑27-28
• 4.4 p21 與呼吸系統(tǒng)疾病的關(guān)系28-29
• 4.5 不足和展望29-31
• 4.5.1 不足29
• 4.5.2 展望29-31
• 第5章 結(jié)論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻33-38
• 附圖38-39
• 綜述39-45
• 參考文獻43-45

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 黃英,楊龍,張宗玉,童坦君;外源p21~(WAF1)轉(zhuǎn)染對人成纖維細胞凋亡的影響[J];生物化學與生物物理學報;2000年01期

2 孫照明,李希波;Ras基因產(chǎn)物p21在肺癌中的異常表達及與吸煙的關(guān)系[J];山東醫(yī)藥;2005年26期

3 馬寬生;羅昆侖;何振平;楊金亮;;p21基因過表達對人膽管癌細胞增殖和凋亡的影響[J];世界華人消化雜志;2000年11期

4 楊英;付士波;鞠桂芝;;siRNA沉默P21表達對細胞周期解偶聯(lián)和細胞凋亡的影響[J];中國病理生理雜志;2007年02期

5 鄭世營,葛錦鋒,沈振亞,趙軍,秦涌;腺病毒介導p21~(WAF1/CIP1)基因轉(zhuǎn)移及誘導胃癌細胞凋亡[J];中國癌癥雜志;2002年01期

6 楊帆,王文亮,曹云新,王冰峰;p21~(WAF1)基因介導誘發(fā)的人肝癌細胞系的細胞凋亡研究[J];中國癌癥雜志;1997年03期

本文編號：539705