本文關(guān)鍵詞：P21蛋白亞細(xì)胞定位表達(dá)對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞凋亡的影響

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【摘要】：目的： 研究p21表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染16HBE細(xì)胞后，P21蛋白過(guò)表達(dá)的亞細(xì)胞定位及其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。 方法： 用p21表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染16HBE細(xì)胞，建立表達(dá)載體模型，再分別提取總RNA和胞核、胞漿蛋白，，用RT-PCR和western blot半定量方法研究P21蛋白過(guò)表達(dá)亞細(xì)胞定位情況，并用熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀分析P21蛋白過(guò)表達(dá)亞細(xì)胞定位對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果： 1.p21質(zhì)粒組RNA表達(dá)與空質(zhì)粒組、空白對(duì)照組有顯著性差異（p=0.000㖞，空質(zhì)粒組與空白對(duì)照組無(wú)明顯差異（p=0.704）。 2. p21質(zhì)粒組胞漿P21蛋白表達(dá)明顯高于胞核（p=0.002），空質(zhì)粒組和空白對(duì)照組胞核P21蛋白表達(dá)高于胞漿（p=0.033，0.007）。胞漿中P21蛋白表達(dá)，p21質(zhì)粒組高于對(duì)照組（p=0.000）；空質(zhì)粒組與空白對(duì)照組無(wú)明顯差異（p=0.87）。胞核中P21蛋白表達(dá)三組無(wú)明顯差異（p均＞0.05）。 3. p21質(zhì)粒轉(zhuǎn)染16HBE細(xì)胞24h-72h后能導(dǎo)致16HBE細(xì)胞凋亡，凋亡低于空質(zhì)粒組和空白對(duì)照組，并隨著時(shí)間延長(zhǎng)，16HBE細(xì)胞凋亡減少，但在72h時(shí)晚期凋亡和死亡細(xì)胞明顯增高。p21質(zhì)粒組24h凋亡率明顯高于48h（p=0.036）；空質(zhì)粒組和空白對(duì)照組24h凋亡率明顯低于48h（p=0.033, p=0.037）。p21質(zhì)粒組分別與空質(zhì)粒組和空白對(duì)照組有顯著性差異（p＜0.05），空質(zhì)粒組和空白對(duì)照組細(xì)胞凋亡無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。 結(jié)論： p21表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染16HBE細(xì)胞后主要在細(xì)胞漿內(nèi)過(guò)表達(dá)并可抑制細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：P21 亞細(xì)胞定位 凋亡 表達(dá)質(zhì)粒 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 人支氣管上皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 本文主要英漢縮略詞表8-9
• 第1章 引言9-10
• 第2章 材料與方法10-19
• 2.1 主要試劑和材料10-11
• 2.2 主要設(shè)備11-12
• 2.3 部分試劑配制12-13
• 2.3.1 PCR 電泳液 TBE12
• 2.3.2 瓊脂糖凝膠（2%）配制12
• 2.3.3 SDS-PAGE 電泳液12
• 2.3.4 轉(zhuǎn)膜液12-13
• 2.3.5 SDS-PAGE 凝膠配制13
• 2.3.6 PBST13
• 2.3.7 封閉液13
• 2.4 細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)13-15
• 2.4.1 細(xì)胞復(fù)蘇13-14
• 2.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)14
• 2.4.3 細(xì)胞傳代14
• 2.4.4 細(xì)胞凍存14
• 2.4.5 質(zhì)粒提取14
• 2.4.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染(六孔板)14-15
• 2.4.7 細(xì)胞分組及處理15
• 2.5 RT-PCR 法檢測(cè) p21 基因的表達(dá)15-16
• 2.5.1 提取總 RNA15
• 2.5.2 總 RNA 定量15-16
• 2.5.3 引物見(jiàn)下表16
• 2.5.4 cDNA 合成16
• 2.5.5 PCR 擴(kuò)增16
• 2.5.6 p21 mRNA 表達(dá)半定量分析16
• 2.6 Western blotting 方法檢測(cè) p21 蛋白的表達(dá)16-17
• 2.6.1 胞漿、胞核蛋白的提取16-17
• 2.6.2 Western blotting 方法操作步驟17
• 2.7 Annexin V/PI 檢測(cè)細(xì)胞凋亡17-18
• 2.7.1 熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡17-18
• 2.7.2 流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡18
• 2.8 統(tǒng)計(jì)方法18-19
• 第3章 結(jié)果19-25
• 3.1 熒光顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果19
• 3.2 RT-PCR 測(cè)三組細(xì)胞 p21 基因表達(dá)19-20
• 3.3 Western Blot 測(cè)定三組細(xì)胞 P21 蛋白表達(dá)20-22
• 3.4 熒光顯微鏡觀察三組細(xì)胞凋亡22-23
• 3.5 流式細(xì)胞儀分析三組細(xì)胞凋亡23-25
• 第4章 討論25-31
• 4.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染25-26
• 4.2 P21 蛋白亞細(xì)胞定位與細(xì)胞凋亡26-27
• 4.3 p21 作用途徑27-28
• 4.4 p21 與呼吸系統(tǒng)疾病的關(guān)系28-29
• 4.5 不足和展望29-31
• 4.5.1 不足29
• 4.5.2 展望29-31
• 第5章 結(jié)論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 附圖38-39
• 綜述39-45
• 參考文獻(xiàn)43-45

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 黃英,楊龍,張宗玉,童坦君;外源p21~(WAF1)轉(zhuǎn)染對(duì)人成纖維細(xì)胞凋亡的影響[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào);2000年01期

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本文編號(hào)：539705