發(fā)布時間：2017-07-04 11:16

  本文關(guān)鍵詞：TLR7激活對HepG2細(xì)胞的增殖和遷移的影響

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【摘要】：目的探討TLR7配體Gardiquimod對HepG2細(xì)胞增殖及遷移的影響及其可能信號機(jī)制。 方法HepG2細(xì)胞經(jīng)不同時間和劑量的Gardiquimod處理后，MTT技術(shù)分析Gardiquimod對HepG2細(xì)胞增殖的影響；Gardiquimod(2μg/ml)體外刺激細(xì)胞1-5d后流式細(xì)胞技術(shù)分析Gardiquimod對HepG2細(xì)胞增殖的影響；不同時間的Gardiquimod（2μg/ml）體外刺激HepG2細(xì)胞后，提取細(xì)胞總RNA和總蛋白， RT-PCR分析VEGF和TIMP1轉(zhuǎn)錄水平的變化；Western blot分析檢測CyclinB1和CyclinE的表達(dá)量以及絲裂原蛋白激活激酶-胞外信號調(diào)節(jié)激酶（MAPKs-ERK1/2）信號通路，并通過MAPKs-ERK1/2特異性阻斷劑PD98059阻斷相應(yīng)的信號途徑，進(jìn)而分析兩者的相關(guān)性；細(xì)胞劃痕技術(shù)檢測Gardiquimod對HepG2遷移的影響。 結(jié)果HepG2細(xì)胞中表達(dá)TLR7，但較外周血單個核細(xì)胞（peripheral bloodmononuclear cell,PBMC）較少。MTT結(jié)果顯示，不同時間或者劑量的Gardiquimod刺激HepG2細(xì)胞后，細(xì)胞的增殖被抑制。流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果表明，Gardiquimod（2μg/ml）處理細(xì)胞1-5d后，S期細(xì)胞的比例明顯降低；Gardiquimod刺激HepG210min后下調(diào)細(xì)胞中VEGF mRNA的表達(dá)，而刺激細(xì)胞30min后TIMP1mRNA的表達(dá)有明顯的上調(diào)；Western blot結(jié)果顯示，不同時間的Gardiquimod（2μg/ml）能夠抑制細(xì)胞中CyclinB1和CyclinE的表達(dá)；并且細(xì)胞中的ERK1/2的磷酸化水平明顯降低；抑制劑結(jié)果顯示PD98059能有效抑制HepG2細(xì)胞中ERK1/2磷酸化作用，并且上述VEGF的降低與其相關(guān)；細(xì)胞劃痕結(jié)果表明，Gardiquimod（2μg/ml）刺激細(xì)胞不同時間后，細(xì)胞的遷移速度和程度都明顯受到了抑制。 結(jié)論TLR7激動劑Gardiquimod可以有效的抑制HepG2細(xì)胞的增殖和遷移；并且TLR7激活能夠下調(diào)HepG2細(xì)胞中VEGF的表達(dá)，，并與ERK1/2信號通路相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：HepG2細(xì)胞 TLR7Gardiquimod 信號通路
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-10
• 1 引言10-15
• 2 材料與方法15-29
• 3 結(jié)果29-37
• 4 討論37-40
• 5 結(jié)論40
• 6 參考文獻(xiàn)40-45
• 7 附錄45-46
• 致謝46-47
• 綜述47-55
• 參考文獻(xiàn)52-55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李莉,張聲,林華,林建銀;基質(zhì)金屬蛋白酶和組織金屬蛋白酶抑制劑表達(dá)失衡與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];癌癥;2002年03期

本文編號：517566