本文關(guān)鍵詞：過氧化氫誘導小鼠巨噬細胞表達細胞因子和趨化因子的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：活性氧（Reactive oxygen species, ROS）是需氧生物利用氧氣的代謝過程中產(chǎn)生的一類性質(zhì)活潑的原子或者分子，主要產(chǎn)生部位為線粒體，具有較強的氧化能力。主要包括超氧陰離子(O_2-)、羥自由基(·OH)、過氧化氫(H_2O_2)、單線態(tài)氧(1O_2)等。長期以來，ROS被認為是損傷細胞的一類毒性物質(zhì)。但是近十年來的研究發(fā)現(xiàn)，短暫波動的生理水平的ROS在有關(guān)細胞增殖、分化、凋亡、促炎抗炎等的信號轉(zhuǎn)導中有著重要的角色，參與了細胞的基本生理活動，被稱為第二信使。H_2O_2是ROS的主要成分，不帶電荷且比較穩(wěn)定，可自由擴散進入細胞。據(jù)報道，H_2O_2可在體內(nèi)和體外誘導產(chǎn)生細胞因子和趨化因子。 巨噬細胞是免疫細胞的重要成員之一，由血液中的單核細胞進入結(jié)締組織或器官發(fā)育成熟而來。巨噬細胞在機體免疫中有著重要角色，不僅可以識別清除病原體等抗原性異物、提呈抗原啟動免疫應(yīng)答、抗腫瘤，還可以促進炎癥反應(yīng)�；罨蟮木奘杉毎置赥NF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子和白三烯、補體成分等炎癥介質(zhì)來參與促進炎癥反應(yīng)；分泌MCP-1、MIP-2、IL-8等趨化因子，招募活化更多的中性粒細胞、淋巴細胞等免疫細胞，，發(fā)揮免疫作用。 本課題以研究低劑量外源性H_2O_2對巨噬細胞表達細胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2的影響為目的，選取小鼠巨噬細胞RAW264.7為研究對象，MTT法確定外源性H_2O_2對于RAW264.7的最適生理濃度范圍及作用時間后，以過氧化氫酶（Catalase, CAT）預處理30min為對照，分別用不同濃度的H_2O_2處理RAW264.7細胞24h，收集細胞提取總RNA，采用Real-time PCR法檢測細胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2mRNA表達的變化；同時收集培養(yǎng)細胞上清，采用ELISA法檢測細胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2蛋白表達的變化。結(jié)果顯示，10、20、40μmol/L濃度的H_2O_2均能誘導RAW264.7細胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2的表達，且存在劑量依賴性，呈現(xiàn)出隨著H_2O_2濃度的增大作用增強的趨勢；而單獨用200U/mL CAT處理小鼠巨噬細胞RAW264.7，基本不影響其細胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2的表達；CAT能夠抑制低劑量H_2O_2對小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2表達量的誘導作用。
【關(guān)鍵詞】：過氧化氫 過氧化氫酶 小鼠巨噬細胞 腫瘤壞死因子-α 白細胞介素-1β 單核細胞趨化蛋白-1 巨噬細胞炎性蛋白-2
【學位授予單位】：河南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363;Q25
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 目錄8-11
• 縮略詞表11-12
• 文獻綜述12-24
• 1 活性氧12-16
• 1.1 活性氧的來源及調(diào)控12-13
• 1.2 活性氧：從毒性分子到信號分子13
• 1.3 活性氧對細胞生理的調(diào)控13-14
• 1.4 與活性氧有關(guān)的信號通路14-15
• 1.5 活性氧信號與創(chuàng)傷修復15-16
• 2 巨噬細胞16-19
• 2.1 巨噬細胞概述16-17
• 2.2 巨噬細胞的生物學功能17-19
• 3 致炎因子和趨化因子19-24
• 第一章 引言24-26
• 第二章 材料和方法26-42
• 2.1 實驗材料26-30
• 2.1.1 實驗細胞26
• 2.1.2 主要試劑26-27
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備27-28
• 2.1.4 試劑的配置28-30
• 2.2 RAW264.7 細胞的培養(yǎng)30-32
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)的準備工作30-31
• 2.2.2 實驗步驟31-32
• 2.3 MTT 法確定外源性 H_2O_2促進巨噬細胞增殖的最適生理濃度范圍及時間32-33
• 2.3.1 基本原理32
• 2.3.2 實驗步驟32-33
• 2.4 實驗分組及藥物處理33
• 2.4.1 實驗分組33
• 2.4.2 藥物處理33
• 2.5 取材33-34
• 2.6 實時熒光定量（RT-PCR）34-39
• 2.6.1 總 RNA 提取34-35
• 2.6.2 cDNA 第一鏈合成（逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)）35-36
• 2.6.3 RT-PCR36-39
• 2.7 ELISA 檢測39-42
• 2.7.1 基本原理39
• 2.7.2 實驗設(shè)計39
• 2.7.3 樣品處理39-40
• 2.7.4 RAW264.7 細胞上清中 TNF-α、IL-1β、MCP-1、MIP-2 濃度的測定40-42
• 第三章 結(jié)果42-54
• 3.1 MTT 實驗結(jié)果42-43
• 3.2 RNA 質(zhì)量檢測43-44
• 3.3 cDNA 可用性檢測結(jié)果44
• 3.4 RT-PCR 實驗結(jié)果44-50
• 3.4.1 RT-PCR 質(zhì)量檢測結(jié)果44-46
• 3.4.2 CAT 對 H_2O_2誘導小鼠巨噬細胞 RAW264.7 細胞因子基因表達的影響46-48
• 3.4.3 CAT 對 H_2O_2誘導小鼠巨噬細胞 RAW264.7 趨化因子基因表達的影響48-50
• 3.5 ELISA 實驗結(jié)果50-54
• 3.5.1 CAT 對 H_2O_2誘導小鼠巨噬細胞 RAW264.7 細胞因子蛋白生成的影響50-52
• 3.5.2 CAT 對 H_2O_2誘導小鼠巨噬細胞 RAW264.7 趨化因子蛋白生成的影響52-54
• 第四章 討論54-58
• 4.1 MTT 實驗結(jié)果分析54-55
• 4.2 CAT 對 H_2O_2誘導小鼠巨噬細胞 RAW264.7 細胞因子基因表達與生成的影響55-56
• 4.3 CAT 對 H_2O_2誘導小鼠巨噬細胞 RAW264.7 趨化因子基因表達與生成的影響56-58
• 第五章 結(jié)論58-60
• 參考文獻60-66
• 致謝66-68
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄68-69

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：過氧化氫誘導小鼠巨噬細胞表達細胞因子和趨化因子的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：510058