發(fā)布時(shí)間：2017-07-02 13:14

  本文關(guān)鍵詞：過(guò)氧化氫誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子和趨化因子的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：活性氧（Reactive oxygen species, ROS）是需氧生物利用氧氣的代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一類(lèi)性質(zhì)活潑的原子或者分子，主要產(chǎn)生部位為線粒體，具有較強(qiáng)的氧化能力。主要包括超氧陰離子(O_2-)、羥自由基(·OH)、過(guò)氧化氫(H_2O_2)、單線態(tài)氧(1O_2)等。長(zhǎng)期以來(lái)，ROS被認(rèn)為是損傷細(xì)胞的一類(lèi)毒性物質(zhì)。但是近十年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，短暫波動(dòng)的生理水平的ROS在有關(guān)細(xì)胞增殖、分化、凋亡、促炎抗炎等的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中有著重要的角色，參與了細(xì)胞的基本生理活動(dòng)，被稱(chēng)為第二信使。H_2O_2是ROS的主要成分，不帶電荷且比較穩(wěn)定，可自由擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞。據(jù)報(bào)道，H_2O_2可在體內(nèi)和體外誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子。 巨噬細(xì)胞是免疫細(xì)胞的重要成員之一，由血液中的單核細(xì)胞進(jìn)入結(jié)締組織或器官發(fā)育成熟而來(lái)。巨噬細(xì)胞在機(jī)體免疫中有著重要角色，不僅可以識(shí)別清除病原體等抗原性異物、提呈抗原啟動(dòng)免疫應(yīng)答、抗腫瘤，還可以促進(jìn)炎癥反應(yīng)�；罨蟮木奘杉�(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子和白三烯、補(bǔ)體成分等炎癥介質(zhì)來(lái)參與促進(jìn)炎癥反應(yīng)；分泌MCP-1、MIP-2、IL-8等趨化因子，招募活化更多的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞，，發(fā)揮免疫作用。 本課題以研究低劑量外源性H_2O_2對(duì)巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2的影響為目的，選取小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7為研究對(duì)象，MTT法確定外源性H_2O_2對(duì)于RAW264.7的最適生理濃度范圍及作用時(shí)間后，以過(guò)氧化氫酶（Catalase, CAT）預(yù)處理30min為對(duì)照，分別用不同濃度的H_2O_2處理RAW264.7細(xì)胞24h，收集細(xì)胞提取總RNA，采用Real-time PCR法檢測(cè)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2mRNA表達(dá)的變化；同時(shí)收集培養(yǎng)細(xì)胞上清，采用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果顯示，10、20、40μmol/L濃度的H_2O_2均能誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2的表達(dá)，且存在劑量依賴(lài)性，呈現(xiàn)出隨著H_2O_2濃度的增大作用增強(qiáng)的趨勢(shì)；而單獨(dú)用200U/mL CAT處理小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7，基本不影響其細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2的表達(dá)；CAT能夠抑制低劑量H_2O_2對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1、MIP-2表達(dá)量的誘導(dǎo)作用。
【關(guān)鍵詞】：過(guò)氧化氫 過(guò)氧化氫酶 小鼠巨噬細(xì)胞 腫瘤壞死因子-α 白細(xì)胞介素-1β 單核細(xì)胞趨化蛋白-1 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R363;Q25
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 目錄8-11
• 縮略詞表11-12
• 文獻(xiàn)綜述12-24
• 1 活性氧12-16
• 1.1 活性氧的來(lái)源及調(diào)控12-13
• 1.2 活性氧：從毒性分子到信號(hào)分子13
• 1.3 活性氧對(duì)細(xì)胞生理的調(diào)控13-14
• 1.4 與活性氧有關(guān)的信號(hào)通路14-15
• 1.5 活性氧信號(hào)與創(chuàng)傷修復(fù)15-16
• 2 巨噬細(xì)胞16-19
• 2.1 巨噬細(xì)胞概述16-17
• 2.2 巨噬細(xì)胞的生物學(xué)功能17-19
• 3 致炎因子和趨化因子19-24
• 第一章 引言24-26
• 第二章 材料和方法26-42
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料26-30
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞26
• 2.1.2 主要試劑26-27
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備27-28
• 2.1.4 試劑的配置28-30
• 2.2 RAW264.7 細(xì)胞的培養(yǎng)30-32
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)的準(zhǔn)備工作30-31
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)步驟31-32
• 2.3 MTT 法確定外源性 H_2O_2促進(jìn)巨噬細(xì)胞增殖的最適生理濃度范圍及時(shí)間32-33
• 2.3.1 基本原理32
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)步驟32-33
• 2.4 實(shí)驗(yàn)分組及藥物處理33
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)分組33
• 2.4.2 藥物處理33
• 2.5 取材33-34
• 2.6 實(shí)時(shí)熒光定量（RT-PCR）34-39
• 2.6.1 總 RNA 提取34-35
• 2.6.2 cDNA 第一鏈合成（逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)）35-36
• 2.6.3 RT-PCR36-39
• 2.7 ELISA 檢測(cè)39-42
• 2.7.1 基本原理39
• 2.7.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)39
• 2.7.3 樣品處理39-40
• 2.7.4 RAW264.7 細(xì)胞上清中 TNF-α、IL-1β、MCP-1、MIP-2 濃度的測(cè)定40-42
• 第三章 結(jié)果42-54
• 3.1 MTT 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-43
• 3.2 RNA 質(zhì)量檢測(cè)43-44
• 3.3 cDNA 可用性檢測(cè)結(jié)果44
• 3.4 RT-PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-50
• 3.4.1 RT-PCR 質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果44-46
• 3.4.2 CAT 對(duì) H_2O_2誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7 細(xì)胞因子基因表達(dá)的影響46-48
• 3.4.3 CAT 對(duì) H_2O_2誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7 趨化因子基因表達(dá)的影響48-50
• 3.5 ELISA 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-54
• 3.5.1 CAT 對(duì) H_2O_2誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7 細(xì)胞因子蛋白生成的影響50-52
• 3.5.2 CAT 對(duì) H_2O_2誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7 趨化因子蛋白生成的影響52-54
• 第四章 討論54-58
• 4.1 MTT 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析54-55
• 4.2 CAT 對(duì) H_2O_2誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7 細(xì)胞因子基因表達(dá)與生成的影響55-56
• 4.3 CAT 對(duì) H_2O_2誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7 趨化因子基因表達(dá)與生成的影響56-58
• 第五章 結(jié)論58-60
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 致謝66-68
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄68-69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 邱坤良,觀志強(qiáng),徐錫金,霍霞;巨噬細(xì)胞與創(chuàng)傷修復(fù)[J];創(chuàng)傷外科雜志;2005年02期

2 李建喜;楊志強(qiáng);王學(xué)智;;活性氧自由基在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的生物學(xué)作用[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年10期

3 李衛(wèi);劉佳;白家媛;谷長(zhǎng)勤;張萬(wàn)坡;程國(guó)富;胡薛英;;α腫瘤壞死因子的研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年12期

4 李學(xué)鋒,王慧君;巨噬細(xì)胞在損傷時(shí)間推斷中的作用[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2003年02期

5 涂永生;嚴(yán)鵬科;朱炳陽(yáng);黃紅林;廖端芳;;普羅布考抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞周期素D1蛋白表達(dá)和G1→S轉(zhuǎn)換[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2005年06期

6 盛林;馬承恩;郝琳;岳欣;潘其興;;普羅布考抑制過(guò)氧化氫刺激大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的機(jī)制[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2007年09期

7 李文軍,李二紅,楊宗城;巨噬細(xì)胞在炎癥消散中的作用[J];免疫學(xué)雜志;2000年S1期

8 吳鳳霞;袁國(guó)華;;趨化因子及其受體研究進(jìn)展[J];川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年03期

9 劉春英;張勇;高玲;牟其蕓;孫曉紅;周傳鳳;;活性氧的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能[J];食品與藥品;2007年02期

10 趙云罡,徐建興;線粒體,活性氧和細(xì)胞凋亡[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2001年02期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 霍亞楠;活性氧自由基參與介導(dǎo)表皮生長(zhǎng)因子刺激的角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)和創(chuàng)傷修復(fù)的研究[D];浙江大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：過(guò)氧化氫誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子和趨化因子的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：510058