本文關鍵詞：TLR信號在呼吸道合胞病毒疫苗增強性免疫病理中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:呼吸道合胞病毒(RSV)是嬰幼兒下呼吸道感染的最重要病原體,接種疫苗是重要的預防措施,福爾馬林滅活疫苗(RSV)因其疫苗增強性免疫病理(VEP)成為呼吸道合胞病毒(RSV)疫苗成功研制的主要障礙。已知TLR激動劑作為佐劑可以調(diào)節(jié)疫苗誘導的免疫應答類型。本研究選用三種TLR激動劑(分別為TLR-9配體CpG2216,TLR-2配體PamCys3和TLR-3配體poly(I:C))作為佐劑,同時采用MyD88~(-/-)小鼠,觀察TLR信號增強或抑制后受到RSV攻擊的小鼠肺組織免疫病理的變化,進而研究TLR信號在呼吸道合胞病毒疫苗增強性免疫病理中的作用。方法:1培養(yǎng)細胞來源RSV病毒,并測其病毒滴度。2制備福爾馬林滅活疫苗FI-RSV及對照組疫苗FI-C。3分別用FI-C,FI-RSV,FI-RSV+CpG2216,FI-RSV+PamCys3,FI-RSV+poly(I:C)免疫C57BL/6野生型小鼠,用FI-RSV免疫MyD88~(-/-)C57BL/6小鼠,共免疫三次,正常對照組不免疫。4用ELISA方法測末次免疫后血清抗體IgG,觀察不同組對體液免疫的影響。5末次免疫28天后用RSV鼻腔感染小鼠,正常對照組不感染,觀察感染前至感染后5天的體重變化。6感染第5天,處死小鼠,取小鼠肺組織及肺組織勻漿上清,用實時定量PCR檢測肺組織中RSV病毒N基因(RSV-N),考察病毒在小鼠體內(nèi)的復制情況;ELISA測肺勻漿上清中細胞因子IL-4,IL-6,IL-12,IL-17,TNF-α,IFN-γ的含量;考察感染后Th1和Th2應答是否平衡以及肺部炎癥反映情況;肺部組織切片經(jīng)HE染色,觀察炎癥浸潤和組織損傷情況;PAS(periodic acid Schiff)染色,觀察氣道粘液分泌情況。結果:1成功培養(yǎng)出RSV,并測定病毒滴度為10~(73) pfu/ml。2成功制備福爾馬林滅活疫苗(FI-RSV)和對照組疫苗(FI-C)。3 ELISA檢測血清IgG結果:與正常對照組、FI-C對照組比較,各疫苗免疫組均誘導了產(chǎn)生IgG抗體,有顯著性差異(P0.05),各組間IgG水平無顯著性差異(P0.05)。說明單獨疫苗與佐劑+疫苗在誘導IgG方面的效果是相似的。4體重變化情況:與正常對照組相比,各組均有顯著性的體重減輕,各組之間無顯著性差異。肺組織染色5.1 HE染色的肺組織切片顯示:正常對照組,肺泡壁結構完整,無水腫,無明顯炎性細胞浸潤;與FI-RSV組相比,FI-RSV+CpG2216組、FI-RSV+PamCys3組經(jīng)RSV攻擊后肺部的炎癥反應明顯增強,均有大量的炎癥細胞浸潤,肺泡壁明顯增厚,肺泡間出現(xiàn)融合和水腫,偶見出血點,而FI-RSV+poly(I:C)組、FI-RSV MyD88~(-/-)C57BL/6組肺部的炎癥反應較FI-RSV組明顯減輕。5.2 PAS染色的肺組織切片顯示:正常對照組沒有或僅有少量的粘液分泌,FI-control、FI-RSV組、FI-RSV+CpG2216組、FI-RSV+PamCys3組、FI-RSV+poly(I:C)組、FI-RSV MyD88~(-/-)C57BL/6組經(jīng)RSV攻擊后出現(xiàn)不同程度的粘液增加,FI-RSV+PamCys3組粘液分泌顯著高于FI-RSV組,FI-RSV+CpG2216組、FI-RSV+poly(I:C)組、FI-RSV MyD88~(-/-)C57BL/6組粘液分泌顯著低于FI-RSV組。6實時定量PCR檢測RSV-N結果顯示:FI-C組明顯被RSV感染,其他各組都得到一定的保護作用,且佐劑組和FI-RSV MyD88~(-/-)C57BL/6組的保護效果顯著優(yōu)于FI-RSV野生組(P0.05)7ELISA測肺勻漿液中細胞因子結果顯示:FI-RSV+CpG2216組、FI-RSV+PamCys3組、FI-RSV+poly(I:C)組的IL-4、IL-6、IL-12顯著低于FI-RSV組(P0.05),FI-RSV MyD88~(-/-)C57BL/6組顯著低于FI-RSV組(P0.05);FI-RSV+CpG2216組、FI-RSV+PamCys3組、FI-RSV+poly(I:C)組的TNF-α,IFN-γ顯著高于FI-RSV組(P0.05),FI-RSV MyD88~(-/-)C57BL/6組與FI-RSV組無顯著差異(P0.05);FI-RSV+PamCys3組和FI-RSVMyD88~(-/-)C57BL/6組的IL-17顯著低于其他組。IFN-γ/IL-4顯示,FI-RSV+CpG2216組、FI-RSV+PamCys3組、FI-RSV+poly(I:C)組顯著低于FI-RSV組(P0.05),FI-RSV+poly(I:C)組顯著高于FI-RSV+CpG2216組、FI-RSV+PamCys3組;FI-RSV+CpG2216組、FI-RSV+PamCys3組無顯著差異(P0.05);MyD88~(-/-)C57BL/6組與FI-RSV組無顯著差異(P0.05)結論:1增強TLR信號或敲除MyD88對FI-RSV誘導的IgG水平無影響。2以TLR激動劑CpG2216或PamCys3作為FI-RSV的佐劑,加重了疫苗增強性免疫病理;而以TLR激動劑poly(I:C)為佐劑或敲除MyD88均減輕了疫苗增強性免疫病理。3TLR信號對呼吸道合胞病毒疫苗增強性免疫病理的影響可能與其調(diào)節(jié)的Th1、Th2以及Th17型免疫應答有關。
【關鍵詞】：TLR信號 呼吸道合胞病毒 FI-RSV CpG2216 PamCys3 poly(I:C)
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-22
• 結果22-25
• 附圖25-32
• 討論32-33
• 結論33-34
• 參考文獻34-35
• 綜述 Notch對固有免疫和適應性免疫的調(diào)節(jié)35-45
• 參考文獻38-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

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本文編號：505995