本文關(guān)鍵詞：腸道病毒71型3C蛋白酶拮抗TAK1復(fù)合體介導(dǎo)的天然免疫信號(hào)通路的機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：自2008年被列為丙類傳染病以來,手足口病報(bào)告發(fā)病數(shù)和死亡數(shù)一直居于我國(guó)丙類傳染病首位,嚴(yán)重危害兒童身體健康,影響經(jīng)濟(jì)發(fā)展,并引起社會(huì)問題,成為當(dāng)前我國(guó)傳染病防控的重點(diǎn)。腸道病毒71型(EV71)是引起手足口病最重要病原體之一,但其致病機(jī)制尚未闡明。研究表明天然免疫逃逸在EV71感染致病中發(fā)揮重要作用。盡管我們和其他課題組前期研究發(fā)現(xiàn)EV71可以通過阻斷天然免疫信號(hào)通路的多個(gè)靶點(diǎn),從而拮抗宿主天然免疫,但其機(jī)制尚不完全清楚。我們發(fā)現(xiàn)EV713C還可切割天然免疫信號(hào)通路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子TGF-p活化激酶1(TAK1),本研究以此為切入點(diǎn),深入研究了EV71對(duì)于TAK1復(fù)合體的影響及調(diào)控機(jī)制。 EV71感染細(xì)胞試驗(yàn)顯示病毒感染可引起TAK1復(fù)合體蛋白表達(dá)的減少,包括TAK1, TAK1結(jié)合蛋白1,2和3(TAB1, TAB2和TAB3)。免疫共沉淀試驗(yàn)表明EV71編碼的3C蛋白酶可以與TAK1和TAB2蛋白結(jié)合,并引起TAK1、TAB1、TAB2和TAB3這四個(gè)蛋白的切割,從而抑制該復(fù)合物引起的NF-κB啟動(dòng)子的激活。通過檢測(cè)3C蛋白酶抑制劑和3C蛋白酶活性位點(diǎn)突變對(duì)于TAK1蛋白復(fù)合體的影響,發(fā)現(xiàn)其抑制劑能夠抑制3C蛋白酶對(duì)于TAK1復(fù)合體的切割作用,而缺失3C蛋白酶活性的突變體則不能切割TAK1復(fù)合體,表明3C的蛋白酶活性對(duì)于TAK1復(fù)合體的切割是必需的。利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng),顯示缺失3C蛋白酶活性位點(diǎn)的突變體不能抑制TAK1復(fù)合物引起的NF-κB啟動(dòng)子的激活,進(jìn)一步說明3C蛋白酶在TAK1介導(dǎo)的信號(hào)通路中的重要作用。通過突變TAK1復(fù)合體四個(gè)蛋白中3C可能的切割區(qū)域,明確了3C在TAK1復(fù)合體中的切割位點(diǎn),TAK1中為Q360-S361, TAB1中為Q414-G415和Q451-S452, TAB2中為Q113-S114, TAB3中為Q173-G174和Q343-G344。過表達(dá)TAB2可以明顯抑制病毒復(fù)制,而TAB2切割片段則不能抑制病毒復(fù)制,提示TAK1復(fù)合體和3C蛋白之間的平衡可能是病毒感染的一個(gè)重要調(diào)控點(diǎn)。 另外,還發(fā)現(xiàn)EV71感染可引起干擾素信號(hào)通路的重要分子TRAF3蛋白的下調(diào),這一作用可通過3C切割TRAF3(切割位點(diǎn)為Q242-S243)來實(shí)現(xiàn)。3C可減少TRIF和TRAF3的相互作用,從而干擾宿主的干擾素反應(yīng)。 綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)了EV71拮抗宿主天然免疫反應(yīng)的新靶點(diǎn),提示了EV71拮抗宿主天然免疫機(jī)制的復(fù)雜性,進(jìn)一步豐富了對(duì)于EV71天然免疫拮抗機(jī)制的認(rèn)識(shí),為闡明EV71的致病機(jī)制和發(fā)現(xiàn)抗病毒藥物靶點(diǎn)提供了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：腸道病毒71型 3C蛋白酶 天然免疫 TAK1復(fù)合體 TRAF3
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R373
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-27
• 一、EV71和手足口病10-14
• 二、抗病毒天然免疫14-22
• 三、TAK1復(fù)合體在天然免疫信號(hào)通路中的地位和作用22-25
• 四、TRAF3在抗病毒天然免疫中的作用25-26
• 五、總結(jié)與展望26-27
• 實(shí)驗(yàn)材料和方法27-40
• 一、實(shí)驗(yàn)材料27-33
• 二、實(shí)驗(yàn)方法33-40
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-58
• 第一部分 腸道病毒71型3C蛋白酶拮抗TAK1復(fù)合體介導(dǎo)的天然免疫信號(hào)通路的機(jī)制研究40-54
• 1 EV71感染可降低TAK1復(fù)合體蛋白的表達(dá)40-41
• 2 EV71感染對(duì)細(xì)胞因子表達(dá)的影響41-42
• 3 EV713C蛋白引起TAK1復(fù)合體的切割42
• 4 3C切割TAK1復(fù)合體可抑制其引起的NF-κB激活42-43
• 5 EV713C的蛋白酶活性對(duì)于切割TAK1復(fù)合體是必需的43-46
• 6 3C蛋白酶活性對(duì)TAK1復(fù)合體介導(dǎo)NF-κB激活的影響46
• 7 EV713C可與TAB2和TAK1相互作用46-47
• 8 3C對(duì)TAK1復(fù)合體切割位點(diǎn)的確定47-50
• 9 過表達(dá)TAB2可以抑制EV71復(fù)制50-52
• 10 TAB2的切割片段不引起NF-κB的激活52
• 11 TAB2的切割片段不能抑制病毒復(fù)制52-54
• 第二部分 EV71 3C蛋白引起腫瘤壞死因子3的切割54-58
• 1 EV71感染細(xì)胞可降低TRAF3蛋白表達(dá)54
• 2 EV71 3C蛋白切割TRAF354-55
• 3 EV71 3C蛋白酶活性在切割TRAF3中發(fā)揮重要作用55-56
• 4 TRAF3切割位點(diǎn)的確定56
• 5 3C可減少TRAF3與TRIF的結(jié)合56-58
• 討論58-61
• 總結(jié)61-62
• 參考文獻(xiàn)62-71
• 縮略表71-74
• 發(fā)表文章74-75
• 致謝75

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張壽斌;廖華;黃呈輝;譚慶瑜;張煒靈;黃艷;陳侃;邱素清;林靜;幸思忠;廖月紅;;深圳237例手足口病腸道病毒血清型基因及臨床特征[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2008年01期

2 管玉雷;馬海霞;宋紀(jì)蓉;孟佳寧;胡榮祖;;3-硝基-1,2,4-三唑-5-酮的二甲胺鹽的比熱容、熱力學(xué)性質(zhì)及絕熱至爆時(shí)間[J];化學(xué)通報(bào);2009年01期

  本文關(guān)鍵詞：腸道病毒71型3C蛋白酶拮抗TAK1復(fù)合體介導(dǎo)的天然免疫信號(hào)通路的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：503393