本文關(guān)鍵詞：人胱抑素C的原核表達(dá)及包涵體復(fù)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：構(gòu)建胱抑素C原核表達(dá)載體p Cold1-cysc,p ET28a-cysc,p ET32a-cysc和p ET41a-cysc及相應(yīng)的BL21(DE3)表達(dá)菌株,最終得到重組人胱抑素C蛋白。應(yīng)用基因工程手段,原核表達(dá),親和層析及透析復(fù)性的方法對(duì)目的蛋白進(jìn)行表達(dá),純化和復(fù)性。結(jié)果:經(jīng)分析后,選取表達(dá)量較大的菌株BL21(DE3)p ET32a-cysc和BL21(DE3)p Cold1-cysc,對(duì)目的蛋白進(jìn)行提取及純化,對(duì)純化后的可溶及包涵體形式的重組胱抑素C進(jìn)行透析復(fù)性及免疫活性的檢測(cè)。Western blotting及ELISA結(jié)果顯示,攜帶有不同融合標(biāo)簽的可溶性重組胱抑素C或包涵體在透析復(fù)性后具有不同的免疫活性。結(jié)論:在大腸桿菌中成功表達(dá)并得到人胱抑素C的蛋白,復(fù)性后得到了重組胱抑素C的活性形式。
【作者單位】： 廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 胱抑素C 原核表達(dá) 重組蛋白 包涵體 復(fù)性
【分類號(hào)】：R392;Q78
【正文快照】： 胱抑素C(Cystatin C,Cys C)是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑,廣泛存在于人體各種組織的有核細(xì)胞和體液中[1],其基因cysc能在所有的有核細(xì)胞內(nèi)以恒定速度持續(xù)轉(zhuǎn)錄與表達(dá),無(wú)組織特異性,人體循環(huán)中的Cys C僅經(jīng)腎小球?yàn)V過(guò)而被清除,并在近曲小管重吸收,但重吸收后被完全代謝分解,不返回

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 車(chē)婧,韓金祥,王世立;促進(jìn)包涵體蛋白復(fù)性的幾種有效添加劑[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2004年02期

2 勞興珍;湯慧;吳國(guó)球;鄭珩;;抗栓肽基因的克隆和表達(dá)[J];藥物生物技術(shù);2006年03期

3 吉莉莉,楊吉成,孫萬(wàn)邦,盛偉華,李麗蛾;不同表達(dá)載體對(duì)人白細(xì)胞介素-18原核表達(dá)效率的影響[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王偉;瑞替普酶融合蛋白的表達(dá)、純化及分子伴侶對(duì)其復(fù)性的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 WU LingZhi;LI Ying;YANG Yang;QIN Meng;;Deciphering structural and functional roles of disulfide bonds in decorsin[J];Science China(Chemistry);2013年10期

2 楊帆;王蓮芳;陳亮;巴音查汗;;新孢子蟲(chóng)病P43蛋白質(zhì)(包涵體)的純化及rELISA方法的建立[J];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年04期

3 莊旭琴;霍建麗;楊天雨;孔毅;;血小板ADP受體及其拮抗劑的研究進(jìn)展[J];藥物生物技術(shù);2010年03期

4 湯慧;勞興珍;鄭珩;;抗栓肽Ala~(34)→Trp突變體的表達(dá)及活性研究[J];中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年06期

5 張海峰;盛偉華;繆競(jìng)誠(chéng);謝宇鋒;李麗娥;馬麗麗;莊文卓;楊吉成;;重組人IL-18在大腸桿菌中的表達(dá)及其抗腫瘤作用[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2006年02期

6 牛建樓;劉白玲;王斌;;促蛋白復(fù)性高分子及其作用機(jī)制[J];中國(guó)科學(xué)院研究生院學(xué)報(bào);2012年05期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 葛翔;N-異丙基丙烯酰胺類溫敏型聚合物的制備及其協(xié)助蛋白質(zhì)體外復(fù)性研究[D];浙江大學(xué);2009年

2 杭小同;登革病毒感染診斷方法的研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊帆;新疆新孢子蟲(chóng)株tNcSRS2基因的原核表達(dá)及間接ELISA方法的建立[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 蕪為;懸浮芯片在病毒性出血熱多重血清學(xué)診斷中的應(yīng)用[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2011年

3 張瑩;重組谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的原核表達(dá)研究[D];中南民族大學(xué);2011年

4 張麗;抗菌肽ABPS1提取純化的初步研究及其與干擾素IFNa-2b融合表達(dá)載體的構(gòu)建[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 趙英杰;長(zhǎng)白豬IFN-γ基因的克隆、序列分析、原核高效表達(dá)及其抗病毒活性的測(cè)定[D];吉林大學(xué);2005年

6 唐娟;人類Neuritin在原核細(xì)胞中的克隆、表達(dá)及相關(guān)生物學(xué)功能的研究[D];石河子大學(xué);2006年

7 戚穎欣;通用干擾素與胸腺肽α1融合基因構(gòu)建與表達(dá)研究[D];吉林大學(xué);2007年

8 陳瑩瑩;線性聚N-異丙基丙烯酰胺協(xié)助蛋白質(zhì)體外復(fù)性研究[D];浙江大學(xué);2008年

9 蔣凡;納豆激酶的表達(dá)與復(fù)性研究[D];蘭州大學(xué);2008年

10 陸鵬;登革病毒E蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ的表達(dá)及其在登革熱血清學(xué)早期診斷中的初步應(yīng)用[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2008年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 董文甫;李艷紅;岳文斌;;硫氧還蛋白研究進(jìn)展[J];草食家畜;2006年04期

2 白光興;孫志偉;俞煒源;李晉;;共表達(dá)折疊調(diào)節(jié)因子對(duì)尿激酶功能性表達(dá)的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年17期

3 車(chē)婧,韓金祥,王世立;促進(jìn)包涵體蛋白復(fù)性的幾種有效添加劑[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2004年02期

4 杜勇,汪濤,杜桂鑫,徐靜,侯利華,王海濤;人PBM C中IL-18基因的克隆及在E.coli中的高效表達(dá)與純化[J];免疫學(xué)雜志;1999年04期

5 繆海珍,楊吉成,盛偉華,陽(yáng)小衛(wèi),李麗娥;人白細(xì)胞介素-18的基因克隆及原核表達(dá)[J];蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年09期

6 吳正輝;郜金榮;佘應(yīng)龍;葉力;葉林柏;;不同復(fù)性條件對(duì)重組人組織纖溶酶原激活劑復(fù)性的影響[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版);2008年04期

7 包義風(fēng);應(yīng)蓮芳;蔣琳;;包涵體蛋白復(fù)性技術(shù)研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2012年02期

8 萬(wàn)雪,王磊,寧官保;包涵體及其復(fù)性研究概況[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2005年02期

9 傅德建;張向陽(yáng);;心腔內(nèi)血栓形成機(jī)制與治療研究進(jìn)展[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2011年04期

10 楊亞萍;劉濤;陳家樹(shù);林熙;;五步蛇毒纖溶組分FⅨcaⅠ的分離純化和生物活性的測(cè)定[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2011年11期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高俊峰;李忠勤;景冠華;宋艾芝;;腺病毒感染胞核特殊型類包涵體的電鏡觀察[J];病毒學(xué)雜志;1989年04期

2 周永春,陸峰,金永明,賈林,林愛(ài)友,陸德如;重組人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子包涵體提取、復(fù)性和純化的研究[J];生物工程學(xué)報(bào);1997年02期

3 鐘彥偉,閻錫蘊(yùn),湯健,汪力亞,姜素椿;重組血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子包涵體復(fù)性條件研究[J];生物學(xué)雜志;1999年05期

4 王縛鯤,鄒全明,張衛(wèi)軍,田文標(biāo),朱永紅,楊s

本文編號(hào)：501290