本文關鍵詞：青蒿琥酯對急性胰腺炎動物模型的治療作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景： 急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是臨床常見病，發(fā)病率高。由于急性胰腺炎發(fā)病急，病情發(fā)展快而復雜，可從最初的胰腺組織的局部病變迅速發(fā)展成為全身炎癥反應綜合征(systematic inflammatory response syndrome, SIRS)、膿毒癥、膿毒癥休克乃至多器官功能衰竭，甚至死亡，治療非常棘手，雖然臨床采用綜合療法進行治療，但效果并不滿意，總體死亡率仍然高達5％～13.6％，因此研究新的有效藥物具有重要意義。 目的： 急性胰腺炎是由各種原因引起的全身炎癥反應綜合征，膿毒癥是由感染因素導致的SIRS，又稱SIRS亞型。鑒于SIRS貫穿急性胰腺炎的病理生理過程，，早期階段的SIRS如果得不到有效控制，晚期將出現(xiàn)膿毒癥、膿毒癥休克，發(fā)生多器官功能衰竭的風險將大為增加，病死率也將增加4～5倍。因此，急性胰腺炎的本質(zhì)是SIRS和膿毒癥。 青蒿琥酯(artesunate，AS)為有效的抗瘧藥物。前期我們課題組發(fā)現(xiàn)，青蒿琥酯可顯著提高膿毒癥模型動物的存活率，顯著降低模型小鼠體內(nèi)血清內(nèi)毒素、血清TNF-α、IL-6等炎癥細胞因子的水平。鑒于急性胰腺炎的本質(zhì)是SIRS和膿毒癥，而青蒿琥酯具有良好的治療SIRS和膿毒癥作用，我們開展了青蒿琥酯治療AP的研究：在建立雨蛙素聯(lián)合脂多糖致AP小鼠模型的基礎上，進行青蒿琥酯對急性胰腺炎模型小鼠的治療作用研究。 研究方法： 1.青蒿琥酯對急性胰腺炎模型小鼠的治療作用 ⑴急性胰腺炎模型小鼠的制模方法 采用雨蛙素聯(lián)合脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)致小鼠急性胰腺炎模型：用劑量為100μg/kg的雨蛙素對小鼠進行腹腔注射，連續(xù)6次給藥，每次需間隔1小時，在最后一次注射雨蛙素后立即腹腔注射劑量為10mg/kg的LPS，完成造模。 ⑵青蒿琥酯對急性胰腺炎模型小鼠的治療作用 將60只昆明種小鼠隨機分為正常組、模型組和AS治療組，每組12只，其中治療組為3個濃度(AS5.0mg/kg，AS2.5mg/kg，AS1.5mg/kg)的AS組。 正常組小鼠給予生理鹽水；模型組小鼠在造模后，平行給予生理鹽水；治療組在造模完成后0小時和4小時肌肉注射不同濃度的青蒿琥酯。在造模完成后18小時，所有組別的小鼠采取眼眶取血，脫臼處死小鼠，留取胰腺組織，并進行以下工作：①胰腺和周圍組織的大體形態(tài)學觀察；②胰腺組織病理學評分：取胰腺頭部進行HE染色，鏡下觀察其組織形態(tài)學，并采用雙盲法按Rongione法對胰腺組織病理學評分；③計算胰腺系數(shù)：胰腺系數(shù)=胰腺濕重(毫克)/小鼠體重(克)；④組織、血清生化指標檢測：用試劑盒測定胰腺組織中胰蛋白酶、脂肪酶、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力和丙二醛(malondialdehyde，MDA)的含量，以及血清淀粉酶(amylase，AMS)活力。采用軟件SPSS16.0對所測得的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。 2.青蒿琥酯對重癥急性胰腺炎模型(SAP)大鼠的治療作用 ⑴重癥急性胰腺炎模型大鼠模型的制作方法 采用逆行性膽胰管注射3.5%牛黃膽酸鈉方法建立SAP大鼠模型。 ⑵青蒿琥酯對重癥急性胰腺炎大鼠模型的治療作用。 將48只SD大鼠隨機分為正常組、假手術組、SAP模型組，AS治療組(5.00mg/kg,3.5mg/kg,1.75mg/kg,0.7mg/kg)和烏司他丁(US)組，每組6只。除正常組以外，各組采用逆行性膽胰管注射牛黃膽酸鈉方法制作SAP大鼠模型后，4個AS組在0小時和4小時給予不同劑量的青蒿琥酯治療，連續(xù)三天給藥，每次間隔24小時。US組造模后平行給予烏司他丁制劑10000U/kg。正常組不給予任何操作，假手術組造模后平行給予生理鹽水。第三天給藥結束后，采用腹主動脈取血，同時摘取胰腺組織做病理學檢查、生存曲線及各項生化指標檢測，主要包括胰腺系數(shù)、組織脂肪酶活力和SOD活力、組織MDA含量，血清AMS活力等。 3.青蒿琥酯對急性胰腺炎治療作用的分子機制研究 ⑴大鼠胰腺腺泡細胞分離和培養(yǎng) 采用膠原酶消化法分離SD大鼠原代胰腺腺泡細胞，將細胞分為正常組、脂多糖組、AS干預脂多糖組、AS組。脂多糖終濃度為1μg/mL，AS干預組先加入終濃度為10μg/mL的AS，2h后加入脂多糖孵育。加入脂多糖6h后進行指標檢測. ⑵各項指標檢測 ①應用半定量RT-PCR和ELISA法分別檢測AS處理對LPS誘導的大鼠胰腺腺泡細胞TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA表達及蛋白釋放的影響。 ②應用半定量RT-PCR技術檢測大鼠胰腺腺泡細胞經(jīng)青蒿琥酯或LPS處理前后，其TLR2、TLR4和p65mRNA表達的變化情況。 主要結果： 1.青蒿琥酯對重癥急性胰腺炎大鼠模型的治療作用 ⑴胰腺組織觀察：不同劑量AS組小鼠和大鼠胰腺組較模型組血管充血情況減輕、出血點明顯減少，顏色接近正常組，胰腺系數(shù)較模型組有顯著降低。 ⑵胰腺組織的病理學評分：①AS組的胰腺組織較模型組在壞死、出血和炎性浸潤方面較模型組小鼠和大鼠有不同程度的減輕。②Rongione法病理學評分結果：治療組與模型組相比，胰腺損傷的組織病理學評分均降低，有顯著性差異(P0.05)，各AS組間有一定的量-效關系趨勢，但各組間無顯著差異(P0.05)。 ⑶組織、血清生化指標檢測： ①組織脂肪酶、蛋白酶和SOD活力、MDA含量測定：與正常組比較，模型組小鼠組織胰脂肪酶、胰蛋白酶活力和MDA含量有顯著增加(P0.01)，AS組與模型組比較，其各項指標都有降低(P0.05)，各AS組間有一定的量-效關系趨勢，但各組間無顯著差異(P0.05)。同時與模型組比較，AS組的SOD活力有明顯升高。②模型組的AMS活力較正常組明顯升高，而AS各組較模型組有明顯降低。 2.青蒿琥酯對重癥急性胰腺炎大鼠模型治療作用的機制研究。 ⑴青蒿琥酯能夠抑制由LPS誘導的促炎性因子IL-1β和IL-6的分泌。 ⑵青蒿琥酯對LPS誘導產(chǎn)生的急性胰腺炎大鼠胰腺細胞的TLR2、TLR4和p65的表達產(chǎn)生抑制作用。 結論： 1.青蒿琥酯能明顯改善急性胰腺炎模型小鼠胰腺組織的病變情況，可顯著降低其血清淀粉酶、胰腺組織脂肪酶和蛋白酶的活力，增加組織的SOD活力以及降低組織MDA含量。 2.青蒿琥酯能明顯改善重癥急性胰腺炎模型大鼠胰腺組織的病變情況，可顯著降低其血清淀粉酶、胰腺組織脂肪酶的活力，增加組織的SOD活力以及降低組織MDA含量。 3.青蒿琥酯治療急性胰腺炎的作用機制與抑制LPS誘導的TLR2、TLR4和NF-κB表達，從而減少前炎癥細胞因子IL-1β及IL-6的釋放有關。
【關鍵詞】：急性胰腺炎 青蒿琥酯 脂多糖 雨蛙素
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R576;R-332
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• Abstract5-9
• 中文摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 青蒿琥酯對重癥急性胰腺炎模型小鼠的治療作用14-30
• 2.1 材料和方法14-19
• 2.2 結果19-29
• 2.3 小結29-30
• 第三章 青蒿琥酯對重癥急性胰腺炎模型大鼠的治療作用30-44
• 3.1 材料和方法30-33
• 3.2 結果33-43
• 3.3 小結43-44
• 第四章 青蒿琥酯對急性胰腺炎治療作用的分子機制研究44-56
• 4.1 材料和方法44-50
• 4.2 結果50-55
• 4.3 小結55-56
• 全文討論56-66
• 一、急性胰腺炎與膿毒癥56
• 二、急性胰腺炎非手術治療方法的研究進展56-57
• 三、常見的急性胰腺炎動物模型及本研究中模型的選擇57-61
• 四、大鼠胰腺腺泡細胞分離方法61
• 五、青蒿琥酯的抗炎作用以及在急性胰腺炎治療中的意義61-63
• 六、青蒿琥酯對急性胰腺炎治療作用的機制研究63-65
• 七、小結65-66
• 全文總結66-67
• 一、青蒿琥酯對急性胰腺炎模型小鼠的治療作用66
• 二、青蒿琥酯對重癥急性胰腺炎模型大鼠的治療作用66
• 三、青蒿琥酯對急性胰腺炎治療作用的分子機制研究66-67
• 參考文獻67-74
• 文獻綜述74-105
• 參考文獻92-105
• 碩士研究生期間撰寫論文105-106
• 致謝106

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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  本文關鍵詞：青蒿琥酯對急性胰腺炎動物模型的治療作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：500608