本文關(guān)鍵詞：我國(guó)霍亂弧菌流行菌株的毒素基因特征和分子型別分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：自1817年至今,霍亂已經(jīng)引起了七次世界范圍的大流行,前六次大流行均由O1群古典(classical)生物型霍亂弧菌引起,從1961年開始,O1群埃爾托(E1Tor)生物型霍亂弧菌替代了古典型而引起了第七次世界大流行。1992年,在印度和孟加拉又出現(xiàn)了O139血清群霍亂弧菌引起的霍亂暴發(fā)和流行,并隨后在東南亞(包括我國(guó))傳播。霍亂的歷次世界大流行均波及到我國(guó),目前仍是我國(guó)重點(diǎn)防范的傳染病,但第七次世界大流行以來,引起我國(guó)霍亂流行菌株的分子特征和演化規(guī)律尚未完全闡明。本研究選取第七次世界大流行以來,我國(guó)不同時(shí)期、不同地區(qū)/省份的865株霍亂弧菌,包括650株O1群(1961-2010年)和215株O139群(1993-2010年)霍亂弧菌進(jìn)行了分析,以闡明引起我國(guó)霍亂流行菌株的重要分子特征,為我國(guó)流行菌株的變異和流行演化提供基因特征依據(jù)。 霍亂弧菌的致病因子是霍亂毒素(Cholera Toxin, CT),由ctxAB基因編碼。PCR檢測(cè)選擇的865株菌中產(chǎn)毒株(ctxAB+)為487株(56.3%),其中病人菌株(n=420)中的產(chǎn)毒株為359株(85.5%),環(huán)境菌株(n=445)中的產(chǎn)毒株為128株(28.8%)。進(jìn)一步按血清群分類,在O1群菌株(n=650)中,病人和環(huán)境菌株的產(chǎn)毒株分別為278(84.2%)和83(25.9%)；在O139群菌株(n=215)中,病人和環(huán)境菌株的產(chǎn)毒株分別為81(90.0%)和45(36.0%)。繼續(xù)對(duì)所有菌株的ctxB測(cè)序發(fā)現(xiàn),在O1群產(chǎn)毒株(n=361)中,El Tor型ctxB (ctxBET)占67.6%,古典型ctxB (ctxBCL)占29.6%,自1992年開始出現(xiàn)ctxBCL型的菌株,并且在隨后的時(shí)期里,與ctxBET型O1群菌株長(zhǎng)期共存。但在O139群菌株中均為ctxBET型。同時(shí),還發(fā)現(xiàn)三種目前尚未報(bào)道過的ctxB基因型。 我們進(jìn)而檢測(cè)了霍亂弧菌第七次世界大流行的特征性基因--rtxC和VSP-Ⅰ/Ⅱ基因簇,結(jié)果發(fā)現(xiàn),rtxC陽性率為95.4%(825/865)；對(duì)VSP-Ⅰ/Ⅱ基因簇中部分基因的檢測(cè)結(jié)果,在產(chǎn)毒株(ctxB陽性,n=486)中,87.0%(423/486)攜帶VSP-Ⅰ/Ⅱ基因簇,在非產(chǎn)毒株(ctxB陰性,n=379)中,16.6%(63/379)攜帶VSP-Ⅰ/Ⅱ基因簇。進(jìn)一步按血清群分類,在01群菌株(n=650)中,產(chǎn)毒株(n=361)和非產(chǎn)毒株(n=289)VSP-Ⅰ/Ⅱ的攜帶率分別為82.8%和20.1%；在0139群菌株(n=215)中,產(chǎn)毒株(n=126)和非產(chǎn)毒株(n=89) VSP-Ⅰ/Ⅱ的攜帶率分別為99.2%和5.6%,表明無論是O1群還是O139群菌株,產(chǎn)毒株的VSP-Ⅰ/Ⅱ攜帶率均明顯高于非產(chǎn)毒株(P0.0001),這些結(jié)果表明我國(guó)自1961年以來流行的菌株絕大多數(shù)具有El Tor型的特點(diǎn),另外,VSP-Ⅰ/Ⅱ基因簇主要存在于產(chǎn)毒株中。VSP-Ⅰ/Ⅱ基因簇是否與霍亂弧菌的致病性相關(guān)還有待進(jìn)一步研究。 本科室前期研究了我國(guó)O1群霍亂弧菌基于管家基因的序列分型(MLST),進(jìn)行了克隆群構(gòu)成分析。在本研究中,對(duì)我國(guó)1993-2010年間的O139群霍亂弧菌也進(jìn)行了MLST分析,測(cè)定了七個(gè)管家基因的序列進(jìn)行MLST分析,將來自不同地區(qū)、不同年份的72株O139群菌株分為16個(gè)ST序列型,其中產(chǎn)毒株有兩個(gè)ST序列型,非產(chǎn)毒株有14個(gè)ST型,提示產(chǎn)毒株和非產(chǎn)毒株分別來自不同的世系(lineage),我國(guó)流行的O139群產(chǎn)毒株則來自有限的世系；對(duì)這些菌株的PFGE (Not1酶切)分析,顯示197株菌可分為五個(gè)大群,產(chǎn)毒株單獨(dú)聚為一群,另外四群均為非產(chǎn)毒株。但在每個(gè)群內(nèi),又存在多個(gè)PFGE帶型,并且產(chǎn)毒株的PFGE帶型相似度(84%)高于非產(chǎn)毒株(66%),提示我國(guó)流行的O139群菌株在固定世系內(nèi)不斷演化出變異的菌株。另外,PFGE也顯示出非產(chǎn)毒株的基因組多樣性明顯高于產(chǎn)毒株。 攜帶霍亂腸毒素基因ctxAB的噬菌體CTXΦ,在產(chǎn)毒株與非產(chǎn)毒株之間轉(zhuǎn)移,是新(型)霍亂弧菌產(chǎn)生的重要機(jī)制,這種轉(zhuǎn)移主要以霍亂弧菌TCP菌毛(tcpA編碼其主要亞單位)為受體完成,但不同來源菌株(主要為非產(chǎn)毒株)的tcpA基因有序列多態(tài)性。我們?cè)诘谝徊糠盅芯拷Y(jié)果中,篩選不同型別非產(chǎn)毒(ctxAB-但tcpA+)的優(yōu)勢(shì)克隆群,使用攜帶氯霉素抗性基因標(biāo)記的CTXΦ對(duì)非產(chǎn)毒優(yōu)勢(shì)克隆群菌株進(jìn)行感染,發(fā)現(xiàn)所選取的ctxAB-tcpA+優(yōu)勢(shì)克隆群菌株中,tcpA序列型為El Tor型的菌株獲得了CTXΦ的感染,提示這類非產(chǎn)毒的克隆群所代表的菌株可能作為潛在的受體菌獲得毒素基因而引起霍亂的流行。
【關(guān)鍵詞】：霍亂弧菌 流行菌株 毒素基因 分子型別
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R378.3
【目錄】：

• 縮略詞5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 第一部分 我國(guó)霍亂弧菌流行菌株的毒素基因特征分析13-41
• 前言13-14
• 材料與方法14-21
• 結(jié)果21-38
• 討論38-41
• 第二部分 我國(guó)O139群霍亂弧菌的分子型別分析41-55
• 前言41-42
• 材料和方法42-45
• 結(jié)果45-53
• 討論53-55
• 第三部分 噬菌體CTXΦ對(duì)霍亂菌株的感染55-67
• 前言55-56
• 材料和方法56-62
• 結(jié)果62-66
• 討論66-67
• 小結(jié)67-68
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 綜述71-78
• 參考文獻(xiàn)75-78
• 附錄78-99
• 致謝99-100
• 碩士期間已發(fā)表論文100

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 畢振強(qiáng),楊彬,王國(guó)永,王梅,段玉芹;霍亂弧菌含編碼霍亂毒素基因的溶源性噬菌體轉(zhuǎn)染檢測(cè)[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)信息;2002年03期

2 梁未麗,闞飆,祁國(guó)明,劉延清,高守一;O139群霍亂弧菌中溶原性噬菌體CTXФ的誘導(dǎo)及轉(zhuǎn)染性研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2003年01期

3 劉廣文,閆梅英,祁國(guó)明,劉延清,高守一,闞飆;霍亂弧菌溶原性噬菌體CTXΦ的氯霉素抗性基因標(biāo)記及誘導(dǎo)[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2004年04期

4 闞飆,祁國(guó)明,劉延清,劉彩蓮,高守一;霍亂弧菌中存在不含霍亂毒素基因的噬菌體CTXΦ基因組[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1999年03期

  本文關(guān)鍵詞：我國(guó)霍亂弧菌流行菌株的毒素基因特征和分子型別分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：498919