本文關(guān)鍵詞：利用293細(xì)胞拯救和擴(kuò)增重組人41型腺病毒，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：人41型腺病毒(Human adenovirus type 41,HAdV-41)為難養(yǎng)腺病毒,E1區(qū)缺失的HAdV-41無法在293細(xì)胞中拯救并擴(kuò)增,本研究試圖通過反向遺傳學(xué)操作獲得能夠在293細(xì)胞中拯救并擴(kuò)增的重組HAdV-41。首先,對(duì)原有的骨架質(zhì)粒pAdbone41進(jìn)行改造:通過重疊延伸PCR方法將HAdV-41的E3區(qū)基因替換為HAdV-5E4orf6編碼區(qū);將HAdV-5E1A增強(qiáng)子克隆至HAdV-41E4區(qū)啟動(dòng)子上游,獲得新的骨架質(zhì)粒pAdbone41E4EE。該骨架質(zhì)粒與線性化的穿梭質(zhì)粒pSh41-GFP在E.coli BJ5183菌株同源重組得到腺病毒質(zhì)粒pAd41E4EE-GFP。pAd41E4EE-GFP經(jīng)Pme I酶切線性化后轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,拯救出重組病毒HAdV-41-E4EE-GFP。經(jīng)過7輪擴(kuò)增,超速離心純化后獲得1.0ml濃度為8.0×1010 vp/mL的重組腺病毒,其感染滴度為1.7×109 IU/mL,電子顯微鏡下觀察可見形態(tài)完整的病毒顆粒,限制性內(nèi)切酶酶切分析及PCR鑒定結(jié)果均表明攜帶HAdV-5E4orf6基因與E1A增強(qiáng)子基因的重組腺病毒載體構(gòu)建正確。本研究利用反向遺傳學(xué)技術(shù)對(duì)病毒載體進(jìn)行改造,實(shí)現(xiàn)了在293細(xì)胞中培養(yǎng)E1區(qū)缺失的HAdV-41的目的。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所;
【關(guān)鍵詞】： 人型腺病毒 病毒載體 反向遺傳 Eorf
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31400156) 國(guó)家科技重大專項(xiàng)課題(2013ZX10004-101)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 人腺病毒分為A~G共7個(gè)種,包括50多個(gè)型。HAdV-41屬于腺病毒F組(種),能引起嬰幼兒腹瀉,又稱腹瀉腺病毒或腸道腺病毒,具有開發(fā)為腸道靶向基因轉(zhuǎn)移載體的潛力。由于體外培養(yǎng)困難,F組腺病毒也被稱為難養(yǎng)腺病毒,這阻礙了F組腺病毒用于口服疫苗載體的開發(fā)。腺病毒早期基因的表達(dá)起到

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