發(fā)布時間：2017-06-27 03:04

  本文關鍵詞：銅綠假單胞菌外膜蛋白F與HSV-1 VP22融合基因真核表達質粒的構建與表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：構建銅綠假單胞菌外膜蛋白F與Ⅰ型單純皰疹病毒(herpessimplex virus1，HSV-1)間層蛋白VP22的融合表達的重組質粒，體外轉染，觀察其在真核細胞中的表達，為進一步研究銅綠假單胞菌DNA疫苗奠定基礎。 方法：從銅綠假單胞菌基因組中PCR擴增編碼外膜蛋白F的基因序列，然后克隆至真核表達載體pVAX1，構建重組質粒pVAX1-OprF；從重組質粒pcDNA3-VP22中酶切出HSV-1VP22全長基因，然后克隆至真核表達載體pVAX1中，構建重組質粒pVAX1-VP22，利用酶切和序列分析方法驗證所構建的載體的正確性。將VP22定向克隆至pVAX1-OprF中，構建pVAX1-VP22-OprF，將OprF定向克隆至pVAX1-VP22中，構建pVAX1-OprF-VP22（由上海生工完成）；同時利用原核表達系統在大腸桿菌中克隆、表達重組VP22蛋白的碳端，然后進行電洗脫得到純化蛋白，，將純化的重組VP22蛋白作為抗原，免疫BALB/c小鼠獲得抗VP22多抗血清，采用Western blot的方法對其特異性進行鑒定。最后，用脂質體法將構建完成的重組質粒轉染真核細胞，通過Western blot檢測其在真核細胞中的表達情況。 結果：酶切和核酸序列測序證實重組質粒構建完全正確；重組VP22蛋白可在大腸桿菌Rosetta2宿主菌中得到高效表達，得到相對分子質量約30KD的VP22蛋白，純化的蛋白免疫小鼠后，獲得了抗VP22多抗血清。將重組質粒轉染真核細胞，Western blot結果證實重組質粒在真核細胞中得到了表達。 結論：成功構建了含有VP22和OprF的雙表達載體；建立了HSV-1間層蛋白原核表達系統和成功制備了抗VP22多抗血清；構建的重組質�？稍谡婧思毎姓_表達，為下一步研究該重組質粒作為DNA疫苗的免疫學效應奠定了良好的基礎。
【關鍵詞】：銅綠假單胞菌 外膜蛋白F VP22 DNA 疫苗
【學位授予單位】：川北醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R378.991
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 引言10-15
• 實驗材料及方法15-29
• 實驗結果與分析29-36
• 討論36-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-46
• 綜述：Ⅰ型單純皰疹病毒 VP22 蛋白的轉導功能及其應用46-55
• 參考文獻52-55
• 附錄55-60
• 個人簡歷60

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

1 施曉群;孫景勇;倪語星;汪復;朱德妹;胡付品;蔣曉飛;徐英春;張小江;胡云建;艾效曼;楊青;孫自鏞;陳中舉;賈蓓;黃文祥;卓超;蘇丹虹;魏蓮花;吳玲;張朝霞;季萍;王傳清;王愛敏;張泓;孔菁;徐元宏;沈繼錄;單斌;杜艷;俞云松;林潔;;2011年中國CHINET銅綠假單胞菌耐藥性監(jiān)測[J];中國感染與化療雜志;2013年03期

2 汪復;朱德妹;胡付品;蔣曉飛;胡志東;李全;孫自鏞;陳中舉;徐英春;張小江;王傳清;王愛敏;倪語星;孫景勇;褚云卓;俞云松;林潔;徐元宏;沈繼錄;蘇丹虹;卓超;魏蓮花;吳玲;張朝霞;季萍;張泓;孔菁;胡云建;艾效曼;單斌;杜艷;;2012年中國CHINET細菌耐藥性監(jiān)測[J];中國感染與化療雜志;2013年05期

3 李家泰,李耘,王進,中國細菌耐藥監(jiān)測研究組;我國醫(yī)院和社區(qū)獲得性感染革蘭陰性桿菌耐藥性監(jiān)測研究[J];中華醫(yī)學雜志;2003年12期

  本文關鍵詞：銅綠假單胞菌外膜蛋白F與HSV-1 VP22融合基因真核表達質粒的構建與表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：488342