發(fā)布時(shí)間：2017-06-27 03:04

  本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌外膜蛋白F與HSV-1 VP22融合基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：構(gòu)建銅綠假單胞菌外膜蛋白F與Ⅰ型單純皰疹病毒(herpessimplex virus1，HSV-1)間層蛋白VP22的融合表達(dá)的重組質(zhì)粒，體外轉(zhuǎn)染，觀察其在真核細(xì)胞中的表達(dá)，為進(jìn)一步研究銅綠假單胞菌DNA疫苗奠定基礎(chǔ)。 方法：從銅綠假單胞菌基因組中PCR擴(kuò)增編碼外膜蛋白F的基因序列，然后克隆至真核表達(dá)載體pVAX1，構(gòu)建重組質(zhì)粒pVAX1-OprF；從重組質(zhì)粒pcDNA3-VP22中酶切出HSV-1VP22全長(zhǎng)基因，然后克隆至真核表達(dá)載體pVAX1中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pVAX1-VP22，利用酶切和序列分析方法驗(yàn)證所構(gòu)建的載體的正確性。將VP22定向克隆至pVAX1-OprF中，構(gòu)建pVAX1-VP22-OprF，將OprF定向克隆至pVAX1-VP22中，構(gòu)建pVAX1-OprF-VP22（由上海生工完成）；同時(shí)利用原核表達(dá)系統(tǒng)在大腸桿菌中克隆、表達(dá)重組VP22蛋白的碳端，然后進(jìn)行電洗脫得到純化蛋白，，將純化的重組VP22蛋白作為抗原，免疫BALB/c小鼠獲得抗VP22多抗血清，采用Western blot的方法對(duì)其特異性進(jìn)行鑒定。最后，用脂質(zhì)體法將構(gòu)建完成的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞，通過(guò)Western blot檢測(cè)其在真核細(xì)胞中的表達(dá)情況。 結(jié)果：酶切和核酸序列測(cè)序證實(shí)重組質(zhì)粒構(gòu)建完全正確；重組VP22蛋白可在大腸桿菌Rosetta2宿主菌中得到高效表達(dá)，得到相對(duì)分子質(zhì)量約30KD的VP22蛋白，純化的蛋白免疫小鼠后，獲得了抗VP22多抗血清。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞，Western blot結(jié)果證實(shí)重組質(zhì)粒在真核細(xì)胞中得到了表達(dá)。 結(jié)論：成功構(gòu)建了含有VP22和OprF的雙表達(dá)載體；建立了HSV-1間層蛋白原核表達(dá)系統(tǒng)和成功制備了抗VP22多抗血清；構(gòu)建的重組質(zhì)�？稍谡婧思�(xì)胞中正確表達(dá)，為下一步研究該重組質(zhì)粒作為DNA疫苗的免疫學(xué)效應(yīng)奠定了良好的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：銅綠假單胞菌 外膜蛋白F VP22 DNA 疫苗
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R378.991
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 引言10-15
• 實(shí)驗(yàn)材料及方法15-29
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析29-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 綜述：Ⅰ型單純皰疹病毒 VP22 蛋白的轉(zhuǎn)導(dǎo)功能及其應(yīng)用46-55
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 附錄55-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 施曉群;孫景勇;倪語(yǔ)星;汪復(fù);朱德妹;胡付品;蔣曉飛;徐英春;張小江;胡云建;艾效曼;楊青;孫自鏞;陳中舉;賈蓓;黃文祥;卓超;蘇丹虹;魏蓮花;吳玲;張朝霞;季萍;王傳清;王愛(ài)敏;張泓;孔菁;徐元宏;沈繼錄;單斌;杜艷;俞云松;林潔;;2011年中國(guó)CHINET銅綠假單胞菌耐藥性監(jiān)測(cè)[J];中國(guó)感染與化療雜志;2013年03期

2 汪復(fù);朱德妹;胡付品;蔣曉飛;胡志東;李全;孫自鏞;陳中舉;徐英春;張小江;王傳清;王愛(ài)敏;倪語(yǔ)星;孫景勇;褚云卓;俞云松;林潔;徐元宏;沈繼錄;蘇丹虹;卓超;魏蓮花;吳玲;張朝霞;季萍;張泓;孔菁;胡云建;艾效曼;單斌;杜艷;;2012年中國(guó)CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)[J];中國(guó)感染與化療雜志;2013年05期

3 李家泰,李耘,王進(jìn),中國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)研究組;我國(guó)醫(yī)院和社區(qū)獲得性感染革蘭陰性桿菌耐藥性監(jiān)測(cè)研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2003年12期

  本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌外膜蛋白F與HSV-1 VP22融合基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：488342