發(fā)布時間：2017-06-25 05:05

  本文關(guān)鍵詞：狂犬病病毒糖蛋白在昆蟲細胞中的表達及其免疫學(xué)特性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 :利用Bac-To-Bac桿狀病毒昆蟲細胞表達系統(tǒng)對狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因進行克隆、表達、純化,并對重組RVG進行免疫學(xué)特性鑒定。方法:參照Gen Bank收錄的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,設(shè)計特異性引物,擴增目的基因。RVG基因經(jīng)Bam HⅠ/KpnⅠ雙酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B載體上,陽性重組轉(zhuǎn)座質(zhì)粒進一步轉(zhuǎn)化E.Coli DH10Bac感受態(tài)細胞,經(jīng)藍白斑篩選及PCR鑒定后獲得重組穿梭載體r Bacmid-RVG,將其轉(zhuǎn)染至對數(shù)生長期的Sf-9昆蟲細胞,進行重組RVG的真核表達。His-Trap HP純化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot進行鑒定。重組RVG免疫小鼠,檢測其免疫原性和血清中和活性。結(jié)果:用Bac-To-Bac桿狀病毒昆蟲細胞表達系統(tǒng)表達并純化了重組RVG,分子量約58 000。經(jīng)重組RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。結(jié)論:重組RVG具有天然RVG的活性,為進一步研制亞單位疫苗及制備篩選中和抗體奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)系;南京醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生部抗體技術(shù)重點實驗室;江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 狂犬病病毒 狂犬病病毒糖蛋白 Bac-To-Bac桿狀病毒昆蟲細胞表達系統(tǒng) 純化 抗體
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(81273325,81202370) 江蘇省社會發(fā)展項目(BE2011842) 大學(xué)生創(chuàng)新計劃(Ky101J201217)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RV)所致的自然疫源性人畜共患急性傳染病。臨床表現(xiàn)主要為恐水、畏光、吞咽困難、狂躁等,發(fā)病后病死率為100%�？袢〔《緸樨撴淩NA病毒,可編碼核蛋白、磷蛋白、基質(zhì)蛋白、糖蛋白和轉(zhuǎn)錄酶大蛋白,其中糖蛋白是狂犬病病毒的主要保護性抗原,有

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李祥魁;范翠英;崔亞君;劉璇;;重組蛋白可溶性表達促進標簽的研究進展[J];生物技術(shù);2013年02期

2 劉春;曾偉偉;王慶;李凱彬;王芳;常藕琴;梁慧麗;吳淑勤;;雜交鱧(斑鱧♀×烏鱧♂)彈狀病毒TaqMan實時熒光定量PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J];水產(chǎn)學(xué)報;2014年01期

3 崔婷婷;王q，

本文編號：480837