發(fā)布時間：2017-06-24 00:06

  本文關(guān)鍵詞：PLP-I基因在小鼠睪丸中的表達定位及多克隆抗體制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： Prolactin-like protein I，簡稱PLP-I，又名PLP-J、Prlpj、Prlpi、prl3c1，與其他PRL基因家族成員不同，PLP-I是目前新發(fā)現(xiàn)的一種催乳素樣基因。據(jù)文獻報道，PLP-I主要在雌性胎盤蛻膜組織中有表達，在雄性無表達。本課題組發(fā)現(xiàn)，，PLP-I在雄性睪丸中也有表達。因此本研究擬探索PLP-I在小鼠睪丸中的表達定位，并制備多克隆抗體及PLP-J上調(diào)表達慢病毒，為深入研究PLP-J基因功能奠定基礎(chǔ)。 方法： 采用原位雜交、免疫組化及免疫熒光方法對PLP-I在小鼠睪丸中表達進行定位，采用RT-PCR方法與Western Blotting方法檢測不同年齡段mRNA表達水平與蛋白表達水平。 設(shè)計多肽肽段序列，構(gòu)建原核表達載體PET30a-PLP-I，通過IPTG誘導，獲得純化抗原，免疫兔，獲得PLP-I抗體。 構(gòu)建慢病毒過表達載體，制備和包裝PLP-I過表達慢病毒，轉(zhuǎn)染TM3睪丸Ledig細胞，篩選穩(wěn)定細胞株，采用RT-PCR及WB分別檢測PLP-I基因過表達后的mRNA及蛋白表達水平。采用流式細胞儀檢測細胞周期改變情況。 結(jié)果： 1． RT-PCR以及WB結(jié)果顯示PLP-I在小鼠睪丸中有表達，且表達趨勢為成年組最高，18day組最低。 2．ISH及IHC法結(jié)果顯示PLP-I陽性表達于小鼠睪丸Ledig細胞，IF染色法結(jié)果顯示PLP-I在TM3Ledig細胞的胞漿中表達。 3．成功制備PLP-I抗體。 4．慢病毒介導PLP-I過表達，細胞周期及細胞凋亡實驗研究表明PLP-I可能不影響細胞增殖與凋亡。 結(jié)論： 首次發(fā)現(xiàn)PLP-I在雄性小鼠睪丸中表達，其主要定位于睪丸Ledig細胞中；PLP-I過表達對TM3細胞增殖與凋亡無明顯作用。
【關(guān)鍵詞】：prolactin-like protein I Ledig細胞 睪丸
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-13
• 第一部分 PLP-I 基因在睪丸組織中的表達13-28
• 前言13
• 1 材料13-16
• 2 方法16-23
• 3 結(jié)果23-27
• 4 討論27
• 5 小結(jié)27-28
• 第二部分 PLP-I 基因抗體制備及純化28-37
• 前言28
• 1 材料28-30
• 2 方法30-33
• 3 結(jié)果33-35
• 4 討論35-36
• 5 小結(jié)36-37
• 第三部分 PLP-I 基因慢病毒制備及其對 TM3 細胞生長周期及細胞凋亡的影響37-44
• 前言37
• 1 材料37-38
• 2 方法38-41
• 3 結(jié)果41-43
• 4 討論43
• 5 小結(jié)43-44
• 全文總結(jié)44-45
• 參考文獻45-47
• 文獻綜述47-52
• 參考文獻49-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文53-54

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王廣蘭;宮璀璀;劉亞利;劉珊;王文麗;王軒;邰蘇豫;高天藍星;;重組人sCR1多克隆抗體制備及純化鑒定[J];實用醫(yī)藥雜志;2008年10期

  本文關(guān)鍵詞：PLP-I基因在小鼠睪丸中的表達定位及多克隆抗體制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：476632