PLP-I基因在小鼠睪丸中的表達(dá)定位及多克隆抗體制備
發(fā)布時(shí)間:2017-06-24 00:06
本文關(guān)鍵詞:PLP-I基因在小鼠睪丸中的表達(dá)定位及多克隆抗體制備,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:目的: Prolactin-like protein I,簡(jiǎn)稱PLP-I,又名PLP-J、Prlpj、Prlpi、prl3c1,與其他PRL基因家族成員不同,PLP-I是目前新發(fā)現(xiàn)的一種催乳素樣基因。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,PLP-I主要在雌性胎盤蛻膜組織中有表達(dá),在雄性無(wú)表達(dá)。本課題組發(fā)現(xiàn),,PLP-I在雄性睪丸中也有表達(dá)。因此本研究擬探索PLP-I在小鼠睪丸中的表達(dá)定位,并制備多克隆抗體及PLP-J上調(diào)表達(dá)慢病毒,為深入研究PLP-J基因功能奠定基礎(chǔ)。 方法: 采用原位雜交、免疫組化及免疫熒光方法對(duì)PLP-I在小鼠睪丸中表達(dá)進(jìn)行定位,采用RT-PCR方法與Western Blotting方法檢測(cè)不同年齡段mRNA表達(dá)水平與蛋白表達(dá)水平。 設(shè)計(jì)多肽肽段序列,構(gòu)建原核表達(dá)載體PET30a-PLP-I,通過(guò)IPTG誘導(dǎo),獲得純化抗原,免疫兔,獲得PLP-I抗體。 構(gòu)建慢病毒過(guò)表達(dá)載體,制備和包裝PLP-I過(guò)表達(dá)慢病毒,轉(zhuǎn)染TM3睪丸Ledig細(xì)胞,篩選穩(wěn)定細(xì)胞株,采用RT-PCR及WB分別檢測(cè)PLP-I基因過(guò)表達(dá)后的mRNA及蛋白表達(dá)水平。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期改變情況。 結(jié)果: 1. RT-PCR以及WB結(jié)果顯示PLP-I在小鼠睪丸中有表達(dá),且表達(dá)趨勢(shì)為成年組最高,18day組最低。 2.ISH及IHC法結(jié)果顯示PLP-I陽(yáng)性表達(dá)于小鼠睪丸Ledig細(xì)胞,IF染色法結(jié)果顯示PLP-I在TM3Ledig細(xì)胞的胞漿中表達(dá)。 3.成功制備PLP-I抗體。 4.慢病毒介導(dǎo)PLP-I過(guò)表達(dá),細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)研究表明PLP-I可能不影響細(xì)胞增殖與凋亡。 結(jié)論: 首次發(fā)現(xiàn)PLP-I在雄性小鼠睪丸中表達(dá),其主要定位于睪丸Ledig細(xì)胞中;PLP-I過(guò)表達(dá)對(duì)TM3細(xì)胞增殖與凋亡無(wú)明顯作用。
【關(guān)鍵詞】:prolactin-like protein I Ledig細(xì)胞 睪丸
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號(hào)】:R3416
【目錄】:
- 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照6-8
- 中文摘要8-10
- 英文摘要10-12
- 前言12-13
- 第一部分 PLP-I 基因在睪丸組織中的表達(dá)13-28
- 前言13
- 1 材料13-16
- 2 方法16-23
- 3 結(jié)果23-27
- 4 討論27
- 5 小結(jié)27-28
- 第二部分 PLP-I 基因抗體制備及純化28-37
- 前言28
- 1 材料28-30
- 2 方法30-33
- 3 結(jié)果33-35
- 4 討論35-36
- 5 小結(jié)36-37
- 第三部分 PLP-I 基因慢病毒制備及其對(duì) TM3 細(xì)胞生長(zhǎng)周期及細(xì)胞凋亡的影響37-44
- 前言37
- 1 材料37-38
- 2 方法38-41
- 3 結(jié)果41-43
- 4 討論43
- 5 小結(jié)43-44
- 全文總結(jié)44-45
- 參考文獻(xiàn)45-47
- 文獻(xiàn)綜述47-52
- 參考文獻(xiàn)49-52
- 致謝52-53
- 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文53-54
【參考文獻(xiàn)】
中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條
1 王廣蘭;宮璀璀;劉亞利;劉珊;王文麗;王軒;邰蘇豫;高天藍(lán)星;;重組人sCR1多克隆抗體制備及純化鑒定[J];實(shí)用醫(yī)藥雜志;2008年10期
本文關(guān)鍵詞:PLP-I基因在小鼠睪丸中的表達(dá)定位及多克隆抗體制備,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號(hào):476632
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