本文關(guān)鍵詞：呼吸道合胞病毒分離培養(yǎng)及其F蛋白基因變異分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分巢式PCR與病毒分離培養(yǎng)對(duì)RSV檢測(cè)的差異及其臨床意義分析 目的：探討巢式PCR (N-PCR)、病毒分離培養(yǎng)兩種不同方法檢測(cè)呼吸道合胞病毒（RSV）的差異性及其差異性提示的臨床意義。 方法：收集2010年1月-2012年8月呼吸病房住院患兒鼻咽抽吸物（NPAs），同時(shí)采用N-PCR、病毒分離培養(yǎng)方法檢測(cè)RSV。采集患兒臨床資料，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：1143份病例中，N-PCR檢出RSV陽(yáng)性共458份（總陽(yáng)性率：40.1%，其中RSVA31.7%；RSV B為7.7%；RSVA及RSV B同時(shí)檢出標(biāo)本0.7%）。病毒分離培養(yǎng)方法檢出RSV陽(yáng)性標(biāo)本204份（17.8%）。分析N-PCR及病毒分離培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果：兩種方法檢測(cè)均陽(yáng)性（P+I+）標(biāo)本共165份，均陰性標(biāo)本（P-I-）646份（一致性為70.1%），，兩種方法差異最大部分在于N-PCR陽(yáng)性、病毒分離培養(yǎng)陰性的（P+I-）標(biāo)本共293份，占總標(biāo)本數(shù)25.6%。P+I-組與P-I-組比較有如下臨床特點(diǎn)：患兒年齡小、住院時(shí)間長(zhǎng)；RSV檢出率冬季最高、夏季最低；發(fā)熱患兒比例低；咳痰、喘息、呼吸困難、重癥肺炎、呼吸衰竭患兒比例較高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），臨床符合RSV感染的特征。P+I-組與P+I+組比較具有患兒入院前病程更長(zhǎng)（P=0.005），喘息患兒比例低（P=0.009）的特點(diǎn)。 結(jié)論：N-PCR和病毒分離培養(yǎng)兩種方法對(duì)RSV檢出的差異性與患兒入院前病程有關(guān)，推測(cè)隨著病程延長(zhǎng)患兒呼吸道RSV滴度降低導(dǎo)致病毒分離培養(yǎng)陽(yáng)性率下降。P+I-組符合RSV感染的特征，其臨床特點(diǎn)與該組患兒處于病程后期病毒滴度較低有關(guān)。N-PCR檢測(cè)RSV的敏感性及特異性良好。 第二部分呼吸道合胞病毒F蛋白基因變異及帕利珠單抗對(duì)臨床分離株的中和能力分析 背景：RSV是嬰幼兒時(shí)期急性下呼吸道感染最主要的病毒病原體。F蛋白是RSV重要的表面糖蛋白之一，F(xiàn)蛋白不僅是HLA限制性CTL細(xì)胞識(shí)別的靶蛋白還是中和抗體識(shí)別的靶點(diǎn)，目前唯一應(yīng)用于臨床預(yù)防高�；純篟SV感染的帕利珠單抗即與F蛋白結(jié)合。研究F蛋白分子流行病學(xué)對(duì)于RSV的疫苗研發(fā)有相當(dāng)重要。 目的：研究中國(guó)重慶地區(qū)RSV F蛋白基因變異、CTL識(shí)別表位的變異及帕利珠單抗對(duì)臨床分離株的中和能力。 方法：采集2009年6月-2012年3月重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸一病房因急性下呼吸道感染住院的患兒鼻咽抽吸物共1800份。標(biāo)本進(jìn)行RSV病毒分離培養(yǎng)，提取RSV臨床株的核酸，逆轉(zhuǎn)錄后擴(kuò)增F基因全長(zhǎng)。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)測(cè)序，序列拼接。用MEGA軟件進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析及分析CTL識(shí)別表位變異情況。用western blot及微量中和試驗(yàn)的方法驗(yàn)證帕利珠單抗與臨床分離株的結(jié)合能力。 結(jié)果：分離RSV臨床株333例，陽(yáng)性率為18.5%（RSVA：277；RSV B：55；RSV A與RSV B同時(shí)陽(yáng)性標(biāo)本1例)。對(duì)107例RSV A，23例RSV B進(jìn)行F基因全長(zhǎng)測(cè)序。系統(tǒng)進(jìn)化分析提示RSV F基因高度保守，在氨基酸位點(diǎn)16,25,45,102,122,124,209及447存在顯著的氨基酸變異，同時(shí)也存在HLA限制性CTL識(shí)別表位氨基酸變異。在RSV A臨床分離株中，帕利珠單抗結(jié)合的抗原位點(diǎn)276存在氨基酸天冬酰胺→絲氨酸(N→S)的變異，且有09年-12年逐年增加的趨勢(shì)。Western blot及微量中和實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)在位點(diǎn)276N→S的變異不影響帕利珠單抗與RSVA臨床分離株的結(jié)合。 結(jié)論：中國(guó)地區(qū)RSV F基因在地域及時(shí)間上高度保守的同時(shí)也存在變異，F(xiàn)基因的分子流行病學(xué)監(jiān)測(cè)研究將對(duì)疫苗的發(fā)展起至關(guān)重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：呼吸道合胞病毒 N-PCR 病毒分離培養(yǎng) 臨床特點(diǎn) F蛋白 基因變異 帕利珠單抗
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R725.6;R3416
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-14
• 第一部分 巢式 PCR 與病毒分離培養(yǎng)對(duì) RSV 檢測(cè)的差異及其臨床意義分析14-23
• 前言14
• 1.材料與方法14-18
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-21
• 3.討論21-23
• 第二部分 呼吸道合胞病毒 F 蛋白基因變異及帕利珠單抗對(duì)臨床分離株的中和能力分析23-39
• 前言23-24
• 1.材料與方法24-29
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-36
• 3.討論36-39
• 全文總結(jié)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 文獻(xiàn)綜述46-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 致謝52-53
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章目錄53-54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 趙林清 ,錢(qián)淵,王之j,朱汝南,鄧潔;呼吸道合胞病毒檢測(cè)方法比較[J];臨床兒科雜志;2003年01期

2 楊瑞生;呼吸道合胞病毒四種檢測(cè)方法的比較分析[J];中國(guó)誤診學(xué)雜志;2005年17期

  本文關(guān)鍵詞：呼吸道合胞病毒分離培養(yǎng)及其F蛋白基因變異分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：474188