發(fā)布時(shí)間：2017-06-22 20:12

  本文關(guān)鍵詞：阿奇霉素誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型的建立及其分子病理的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立阿奇霉素誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型并研究急性肝損傷過(guò)程中相關(guān)分子的動(dòng)態(tài)變化，從而探討其作用的可能機(jī)制。 方法取小鼠300只，每100只為一組，共分三組，每組中有90只給予0.3%阿奇霉素溶液200mg.kg~(-1)、400mg.kg~(-1)、800mg.kg~(-1)腹腔注射，建立小鼠急性肝損傷模型，剩余10只為對(duì)照組，在注射阿奇霉素后0h、3h、6h、12h、24h、30h、36h、42h、48h和54h10個(gè)時(shí)間點(diǎn)取材，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取10只小鼠，利用賴氏法檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）的活性變化；同時(shí)利用HE染色的方法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)小鼠肝組織的病理變化；利用蛋白印跡的方法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)小鼠肝組織中PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP27、TNF-α、VEGF等分子的表達(dá)變化，用Gel Pro4.0軟件計(jì)算蛋白相對(duì)表達(dá)值。 結(jié)果與正常對(duì)照組小鼠相比較，200mg/kg阿奇霉素模型組小鼠血清ALT和AST活性變化不明顯；400mg/kg阿奇霉素模型組其ALT、AST活性于12h明顯升高，24h逐漸降低并于54h時(shí)恢復(fù)正常；800mg/kg阿奇霉素模型組其ALT、AST活性均呈顯著升高(P0.05)，在24h可達(dá)高峰，于30h開始降低，54h時(shí)可恢復(fù)至正常。200、400mg/kg阿奇霉素注射后小鼠肝臟組織學(xué)變化不明顯；800mg/kg阿奇霉素注射，肝受到一定損傷之后，小鼠的肝臟失去正常結(jié)構(gòu)，組織病理學(xué)結(jié)果顯示注射阿奇霉素后24h肝組織損傷最為嚴(yán)重，然后開始逐漸恢復(fù)，于54h可恢復(fù)至正常。阿奇霉素所誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷在3h，6h，12h，24h，30h，36h，42h，48h，54h之后肝PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP27、TNF-α、VEGF蛋白的表達(dá)均可出現(xiàn)顯著的變化趨勢(shì)(P0.05)。PCNA在阿奇霉素誘導(dǎo)后6h至30h明顯降低，36h時(shí)開始升高，42h又有所下降，，隨后又升高，54h又降低； Bcl-2在阿奇霉素誘導(dǎo)后明顯降低，在6h時(shí)達(dá)最低點(diǎn)，然后于30h開始升高，到36h和42h其表達(dá)又降低；Bax在阿奇霉素誘導(dǎo)后3h到6h逐漸升高，在12h達(dá)到高峰，然后降低，并逐漸向正常水平恢復(fù)。HSP27在阿奇霉素誘導(dǎo)后3h到6h開始升高，然后降低，在30h降至最低，隨后逐漸恢復(fù)至正常；HSP70在阿奇霉素誘導(dǎo)后3h至12h先升高，24h時(shí)降低，并逐漸恢復(fù)至正常; TNF-α在阿奇霉素誘導(dǎo)后先逐漸升高，30h達(dá)到高峰，然后又逐漸降低，TNF-α致細(xì)胞膜的通透性增加，從而大量分泌，但因其高度的表達(dá)，可加重肝的損傷程度，因而后期又有逐漸降低趨勢(shì)；VEGF在阿奇霉素誘導(dǎo)后于24h逐漸升高，30h達(dá)最高，于36h開始下降，48h逐漸向正常水平恢復(fù)。 結(jié)論 1利用800mg/kg阿奇霉素注射小鼠成功建立小鼠急性肝損傷動(dòng)物模型。 2阿奇霉素誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷后肝組織PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP27、TNF-α、VEGF蛋白的表達(dá)均出現(xiàn)顯著的變化，這7種分子在此過(guò)程中可能起到重要作用。
【關(guān)鍵詞】：阿奇霉素 急性肝損傷 增殖 凋亡 炎癥 小鼠
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R-332;R575
【目錄】：

• 摘要2-4
• ABSTRACT4-8
• 第1章 綜述8-14
• 1.1 引言8
• 1.2 藥物性肝損傷的病理生理8-9
• 1.3 常見的藥物性肝損傷模型9-11
• 1.3.1 四氯化碳（CCl4）性肝損傷9-10
• 1.3.2 D-氨基半乳糖性肝損傷(D-galactosanine, D-GalN)10
• 1.3.3 對(duì)乙酰氨基酚肝損傷10-11
• 1.4 其它類型的肝損傷模型11-13
• 1.4.1 刀豆蛋白 A 誘導(dǎo)法11-12
• 1.4.2 卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)誘導(dǎo)法12
• 1.4.3 酒精性肝損傷12-13
• 1.5 總結(jié)和展望13-14
• 第2章 前言14-18
• 第3章 材料與方法18-24
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料18
• 3.2 主要儀器18
• 3.3 主要試劑及配置18-20
• 3.4 實(shí)驗(yàn)具體操作方法及分組20-22
• 3.4.1 實(shí)驗(yàn)組的設(shè)計(jì)20
• 3.4.2 阿奇霉素誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型的建立20
• 3.4.3 監(jiān)測(cè)血清 ALT 和 AST20
• 3.4.4 常規(guī)蘇木素伊紅 HE 染色20-21
• 3.4.5 測(cè)定相關(guān)蛋白21-22
• 3.5 統(tǒng)計(jì)方法22-24
• 第4章 結(jié)果24-26
• 4.1 血清 ALT 和 AST 活性檢測(cè)24
• 4.2 觀察肝臟的組織病理學(xué)24
• 4.3 檢測(cè)有關(guān)的蛋白24-26
• 4.3.1 肝臟 PCNA 蛋白的表達(dá)24
• 4.3.2 肝臟凋亡蛋白 Bcl-2 和 Bax 的兩種表達(dá)24-25
• 4.3.3 肝臟 HSP27、HSP70 兩者蛋白的表達(dá)25
• 4.3.4 肝臟 TNF-α蛋白的表達(dá)25
• 4.3.5 肝臟 VEGF 蛋白的表達(dá)25-26
• 第5章 討論26-30
• 5.1 受損后的血清酶變化26
• 5.2 肝臟組織受損后的病理學(xué)變化26
• 5.3 肝細(xì)胞受損后的增殖變化26-27
• 5.4 肝細(xì)胞受損后的凋亡變化27
• 5.5 肝細(xì)胞受損后熱休克蛋白的變化27-28
• 5.6 肝細(xì)胞受損后的細(xì)胞因子28
• 5.7 問(wèn)題與展望28-30
• 第6章 結(jié)論30-32
• 參考文獻(xiàn)32-38
• 縮略語(yǔ)詞匯表38-40
• 附錄 圖表40-46
• 致謝46-48
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果48

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：472964