發(fā)布時(shí)間：2017-06-21 20:01

  本文關(guān)鍵詞：實(shí)驗(yàn)型1型糖尿病模型動物在臨床前安全性評價(jià)中的應(yīng)用及其發(fā)病機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：疾病模型動物主要應(yīng)用于藥理學(xué)(藥效學(xué))方面的研究,在藥物臨床前安全性評價(jià)(毒理學(xué))中沒有得到廣泛的應(yīng)用。但在具有特殊藥理作用(如降糖藥、降血壓藥)藥物的安全性評價(jià)中,疾病模型動物的引入可能更有利于具有特殊藥理作用藥物的安全性評價(jià)。本課題以使用鏈脲佐菌素造模的實(shí)驗(yàn)型1型糖尿病動物為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)動物,進(jìn)行了生存能力考察、重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)并闡明了該類模型發(fā)病后自身調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)的變化情況,對于模型動物應(yīng)用于臨床前安全性評價(jià)有積極的作用。 首先,我們應(yīng)用健康大鼠對精蛋白重組人胰島素注射液進(jìn)行重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)來考察實(shí)驗(yàn)動物對低血糖的耐受性和該藥物可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。 再次,使用鏈脲佐菌素(streptozocin, STZ)55mg/kg劑量,對健康SD大鼠造模,并進(jìn)行六個(gè)月生存能力考察,STZ造模大鼠80只(雌鼠40只,雄鼠40只,隨機(jī)平均分成四組,每組雌雄各半)分別分為高劑量組(30U/kg)、中劑量組(12U/kg)、低劑量組(5U/kg)和對照組(10mL/kg),高、中、低劑量組給予精蛋白重組人胰島素注射液,對照組給予輔料空白液進(jìn)行4w重復(fù)給藥毒性試驗(yàn),觀察胰島素、C肽、糖化血紅蛋白等藥效學(xué)指標(biāo)和血液生化學(xué)、血液細(xì)胞學(xué)、組織病理學(xué)等毒理學(xué)指標(biāo)。模型大鼠依據(jù)血糖值確定造模成功,成功率為91.7%,六個(gè)月存活率為82%；重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)高劑量組實(shí)驗(yàn)動物死亡4只。藥效學(xué)指標(biāo)：給藥結(jié)束和恢復(fù)期結(jié)束后相比于其它劑量組,高劑量組糖化血紅蛋白降低(p0.01),給藥結(jié)束后胰島素、C肽升高(p0.05；p0.01),恢復(fù)期高、中劑量組胰島素、C肽升高(p0.05)。毒理學(xué)指標(biāo)：給藥結(jié)束后高劑量組雄鼠和雌鼠給藥結(jié)束白蛋白、血小板升高(p0.05),淋巴細(xì)胞數(shù)降低(p0.05),而高劑量組雌鼠紅細(xì)胞、白細(xì)胞減少(p0.05),其余指標(biāo)未見明顯差異；恢復(fù)期各劑量組指標(biāo)均無差異。用STZ造模的1型糖尿病大鼠對于胰島素產(chǎn)生的低血糖反應(yīng)有較好的耐受性,接近于臨床患者的病理生理特征,在精蛋白重組人胰島素這類具有特殊藥理作用的藥物進(jìn)行重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)時(shí)有應(yīng)用價(jià)值。 最后,使用鏈脲佐菌素(STZ)對健康SD大鼠造模,分別選取造模成功大鼠和健康大鼠各12只,各項(xiàng)體征均符合成模標(biāo)準(zhǔn)后,分別選取模型和健康大鼠各6只(雌雄各半)解剖,取脾臟、胸腺和外周血使用流式細(xì)胞儀檢測CD4+CD25+Foxp3+(Tregs)水平狀況,剩余大鼠解剖取脾臟分選CD4+CD25+細(xì)胞后檢測其免疫抑制功能。兩組大鼠脾臟、胸腺和外周血CD4+CD25+Foxp3+水平無差異(p0.05),自體和異體大鼠CD4+CD25-細(xì)胞增殖率無差異(p0.05)。 本研究引入使用鏈脲佐菌素造模的實(shí)驗(yàn)型1型糖尿病模型動物,通過對其自身特點(diǎn)進(jìn)行研究、進(jìn)行生存能力考察、重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)和造模后其自身調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)的變化研究揭示了實(shí)驗(yàn)型1型糖尿病模型動物在藥物臨床前安全性評價(jià)中的應(yīng)用前景和發(fā)病機(jī)理上的自身特點(diǎn)；研究表明使用STZ造模的1型糖尿病大鼠對于胰島素產(chǎn)生的低血糖反應(yīng)有較好的耐受性,接近于臨床患者的病理生理特征,在精蛋白重組人胰島素這類具有特殊藥理作用的藥物進(jìn)行重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)時(shí)有應(yīng)用價(jià)值；同時(shí)研究證明了使用鏈脲佐菌素造模的I型糖尿病大鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量和功能無顯著變化,其發(fā)病機(jī)理與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞無直接關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：1型糖尿病模型 重復(fù)給藥毒性試驗(yàn) 精蛋白重組人胰島素注射液 藥物臨床前安全性評價(jià) 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 免疫磁珠分選技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R-332;R587.1
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 第一章 緒論11-16
• 1.1 研究背景11
• 1.2 疾病模型動物和1型糖尿病模型動物的種類11-12
• 1.3 1型糖尿病模型動物自身主要特征簡介12-13
• 1.4 1型糖尿病模型動物應(yīng)用于臨床前安全性評價(jià)中的優(yōu)勢13-14
• 1.5 1型糖尿病模型動物應(yīng)用于臨床前安全性評價(jià)中的前景和存在的問題14
• 1.6 研究目的和意義14-15
• 1.7 研究內(nèi)容15-16
• 第二章 重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)前期準(zhǔn)備16-25
• 2.1 前言16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分16-18
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-23
• 2.4 分析與討論23-25
• 第三章 健康大鼠重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)25-35
• 3.1 前言25
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分25-27
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-33
• 3.4 分析與討論33-35
• 第四章 實(shí)驗(yàn)型1型糖尿病模型動物在重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中的應(yīng)用35-44
• 4.1 前言35
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分35-37
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-42
• 4.4 分析與討論42-44
• 第五章 實(shí)驗(yàn)型1型糖尿病模型動物發(fā)病機(jī)制與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的關(guān)系44-50
• 5.1 前言44
• 5.2 實(shí)驗(yàn)部分44-46
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-48
• 5.4 分析與討論48-50
• 第六章 總結(jié)與展望50-51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 發(fā)表論文54-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：469734