發(fā)布時(shí)間：2017-06-20 03:03

  本文關(guān)鍵詞：大鼠TBI原位植入帶有GFP的BMSCs后可向神經(jīng)元分化，腦內(nèi)GDNF濃度增加，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的在創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)后1w原位移植同種骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs),觀察移植后1w,2w局部GDNF濃度與細(xì)胞向神經(jīng)元分化有無相關(guān)性,探究臨床細(xì)胞移植治療腦損傷的可能機(jī)制。 方法1,采用Feeney自由落體方法制作大鼠中度外傷性腦損傷模型(重量10g,高度20cm),HE染色鑒定損傷程度。2.體外采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠BMSCs,細(xì)胞傳三代后用攜帶綠色熒光蛋白(GFP)基因的慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs進(jìn)行標(biāo)記,流式細(xì)胞儀檢測標(biāo)記GFP的細(xì)胞比例。3.將GFP標(biāo)記的BMSCs (GFP-BMSCs)原位(損傷區(qū))植入損傷模型大鼠后觀察細(xì)胞存活狀態(tài),并分別于植入GFP-BMSCs后1w、2w、3w處死大鼠行腦組織切片,熒光顯微鏡下觀測表達(dá)GFP的細(xì)胞。4.將體外轉(zhuǎn)染GFP1w后的BMSCs(2×106個(gè)細(xì)胞)原位植入腦損傷模型建立后1w大鼠腦內(nèi),在植入GFP-BMSCs后1w、2w兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠,部分鼠取傷側(cè)腦組織行ELISA法檢測GDNF的表達(dá)；部分鼠固定、取腦、切片,損傷區(qū)細(xì)胞行神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)免疫雙標(biāo)染色,激光共聚焦顯微鏡下計(jì)數(shù)GFP-NSE雙標(biāo)記陽性細(xì)胞數(shù)。比較各時(shí)點(diǎn)生理鹽水組、細(xì)胞移植組的雙標(biāo)記陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)與相應(yīng)的GDNF濃度間有無相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果1.采用Feeney自由落體打擊制作大鼠中度外傷性腦損傷模型(重量10g,高度20cm)穩(wěn)定可靠。2. BMSCs在初代培養(yǎng)時(shí)5-7天后出現(xiàn)增殖,貼壁法可純化BMSCs,慢病毒可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染BMSCs,平均感染率為95%。3.GFP-BMSCs移植入鼠腦后能夠存活,3w時(shí)仍可見到表達(dá)GFP的細(xì)胞。4.腦損傷1w后原位植入GFP-BMSCs,發(fā)現(xiàn)在傷后1w、2w組中植入的細(xì)胞都可分化為GFP-NSE的雙陽性細(xì)胞,只是數(shù)量較少,同時(shí)可以增加GDNF的表達(dá),但是GFP-NSE的陽性細(xì)胞數(shù)量與GDNF濃度間無相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論在腦損傷后原位移植骨髓基質(zhì)細(xì)胞可分化為神經(jīng)元,腦中GDNF表達(dá)增加,但是二者之間無相關(guān)關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：創(chuàng)傷性腦損傷 骨髓基質(zhì)細(xì)胞 細(xì)胞分化 GDNF 細(xì)胞移植
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 1 序言10-13
• 2 材料與方法13-19
• 2.1 材料13
• 2.2 試劑13
• 2.3 主要儀器13-14
• 2.4 方法14-19
• 2.4.1 大鼠中度顱腦損傷模型的建立14-15
• 2.4.2 HE染色15-16
• 2.4.3 BMSCs的體外培養(yǎng)16
• 2.4.4 BMSCs慢病毒轉(zhuǎn)染GFP基因16
• 2.4.5 動物分組16-17
• 2.4.6 大鼠腦內(nèi)原位細(xì)胞移植17
• 2.4.7 ELISA法檢測GDNF的表達(dá)17-18
• 2.4.8 免疫雙標(biāo)法檢測移植細(xì)胞GFP-NSE的表達(dá)18-19
• 2.4.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19
• 3 結(jié)果19-27
• 3.1 腦損傷后實(shí)驗(yàn)動物的一般表現(xiàn)19
• 3.2 病理形態(tài)學(xué)改變19-21
• 3.2.1 大體病理學(xué)改變19-20
• 3.2.2 蘇木精-伊紅染色組織病理學(xué)改變20-21
• 3.3 BMSCs的培養(yǎng)、傳代21-22
• 3.4 慢病毒載體介導(dǎo)GFP轉(zhuǎn)染BMSCs22-24
• 3.5 移植細(xì)胞在腦內(nèi)的存活24-25
• 3.6 ELISA檢測GDNF的表達(dá)25
• 3.7 免疫雙標(biāo)組織化學(xué)染色檢測NSE的表達(dá)25-26
• 3.8 統(tǒng)計(jì)分析26-27
• 4 討論27-32
• 4.1 BMSCs的生物學(xué)特性27-29
• 4.2 BMSCs的GFP基因慢病毒載體轉(zhuǎn)染29-30
• 4.3 BMSCs移植與損傷區(qū)腦內(nèi)分化30-32
• 5 參考文獻(xiàn)32-36
• 6 文獻(xiàn)綜述36-40
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 7 附錄40-41
• 8 致謝41-42
• 9 在讀碩士其間發(fā)表論文情況42

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 徐強(qiáng);徐如祥;姜曉丹;潘力;陳劍榮;蔡穎謙;張世忠;;恒河猴骨髓基質(zhì)細(xì)胞向成熟神經(jīng)細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2006年05期

2 李云玲,陳笛,王璐,江和碧,卓本慧,梁熙,李廷玉;成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的體外研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年11期

3 宋揚(yáng);韓一生;畢龍;王樹森;張振宇;侯巍;黃兆松;;創(chuàng)傷性腦損傷大鼠動物模型及其評價(jià)體系的建立[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2009年06期

  本文關(guān)鍵詞：大鼠TBI原位植入帶有GFP的BMSCs后可向神經(jīng)元分化，腦內(nèi)GDNF濃度增加，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：464372