本文關(guān)鍵詞：Foxp3逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體增強Treg細胞功能，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建Treg(regulatory T cell)細胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Foxp3逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體,并將其轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定表達于Treg細胞中,檢測Treg細胞因子改變。方法設(shè)計編碼區(qū)全長序列引物,Hi Fi PCR(high fidelity reverse transcription polymerase chain reaction)擴增編碼區(qū)序列。膠回收PCR產(chǎn)物,將PCR產(chǎn)物與線性化p SCV-Bsd RFP質(zhì)粒連接并測序鑒定。將p SCV-Bsd RFP質(zhì)粒電轉(zhuǎn)入骨架質(zhì)粒BJ5183,將其轉(zhuǎn)染293病毒包裝細胞體系,包裝病毒。反復感染4次得到高滴度p SCV-Bsd RFP-Foxp3逆轉(zhuǎn)錄病毒液。將此高表達逆轉(zhuǎn)錄病毒命名為p SCV-Bsd RFP-Foxp3,感染大鼠脾臟來源Treg細胞,G418篩選穩(wěn)定表達細胞株。ELISA(enzymelinked immunosorbent assay)檢測Treg細胞因子IL-10和轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的改變。結(jié)果 Hi Fi PCR得到編碼區(qū)全長序列DNA,連接到p SCV-Bsd RFP質(zhì)粒,測序鑒定擴增序列符合編碼區(qū)序列。p SCV-Bsd RFP質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染BJ5183后,轉(zhuǎn)染293病毒包裝體系,可見感染細胞有紅色熒光表達。p SCV-Bsd RFP-Foxp3病毒感染Treg細胞穩(wěn)定表達后,可見細胞內(nèi)紅色熒光表達。IL-10和TGF-β表達增強。結(jié)論成功構(gòu)建Foxp3高表達逆轉(zhuǎn)錄病毒p SCV-Bsd RFP-Foxp3,轉(zhuǎn)染大鼠脾臟來源Treg細胞并得到穩(wěn)定高表達Foxp3的Treg細胞。p SCV-Bsd RFP-Foxp3可增強Treg細胞分泌IL-10和TGF-β功能。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院泌尿外科;
【關(guān)鍵詞】： 逆轉(zhuǎn)錄病毒 Foxp 質(zhì)粒 Treg
【基金】：博士點新教師基金(20115503120012) 重慶市衛(wèi)計委基金(2011-2-103) 重慶市教委基金(KJ1500207)
【分類號】：R392
【正文快照】： Foxp3是Treg細胞的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,Treg細胞發(fā)揮免疫調(diào)控的作用需要通過轉(zhuǎn)錄因子Treg細胞進行,因此調(diào)控Foxp3的表達是否可以調(diào)控Treg細胞在免疫調(diào)控中的作用值得我們研究和探索,本文構(gòu)建了Foxp3高表達逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,并將其轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定表達于Treg細胞中,檢測p SCV-Bsd RFP-Foxp3

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 金銀鵬;傅青春;陳成偉;;間充質(zhì)干細胞在肝臟疾病應(yīng)用的研究現(xiàn)況[J];中華細胞與干細胞雜志(電子版);2014年04期

2 韓英;;干細胞對肝臟疾病的治療現(xiàn)狀及前景[J];中華細胞與干細胞雜志(電子版);2015年01期

3 王蘭;楊帆;張麗;楊瑞寧;;Th17細胞及相關(guān)細胞因子在乙型病毒性肝炎中的作用機制[J];肝臟;2015年05期

4 Li-Sha Cheng;Yun Liu;Wei Jiang;;Restoring homeostasis of CD4~+ T cells in hepatitis-B-virusrelated liver fibrosis[J];World Journal of Gastroenterology;2015年38期

5 楊瑞寧;王蘭;;Th17/調(diào)節(jié)性T細胞在肝臟疾病中的作用機制[J];肝臟;2015年09期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李君;同種異型抗原特異性iTreg預防小鼠GVHD并保持GVL及其作用機理[D];中南大學;2013年

2 劉宏宇;PD-L1/PD-1共抑制信號通路在誘導小鼠肝移植免疫耐受中作用機制的研究[D];吉林大學;2014年

3 高巖;Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞調(diào)控結(jié)核發(fā)病的免疫機制研究[D];復旦大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 韓夫;IDO基因修飾BMSCs在大鼠異體復合組織移植免疫排斥反應(yīng)中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2014年

2 趙麗穎;青蒿素及其衍生物在大鼠角膜移植免疫中的作用[D];遼寧醫(yī)學院;2014年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 程立;逆轉(zhuǎn)錄病毒與人類白血病病毒研究的進展[J];中國病理生理雜志;1986年03期

2 徐麗英;;逆轉(zhuǎn)錄病毒和皮膚病學家[J];國外醫(yī)學.皮膚病學分冊;1987年05期

3 謝匡成,徐萍,顧青,劉文文,王豐,田毓華,陳霞芳,李川源,黃倩;利用GFP逆轉(zhuǎn)錄病毒標記腫瘤與血管內(nèi)皮細胞[J];中國肺癌雜志;2001年01期

4 楊東光;張日;;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的慢性粒細胞白血病模型研究進展與應(yīng)用[J];國際輸血及血液學雜志;2006年04期

5 嚴家新;;在人白血病中檢測人逆轉(zhuǎn)錄病毒序列[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);1984年05期

6 相洪琴;;減緩逆轉(zhuǎn)錄病毒復制的植物提取物[J];國外醫(yī)學情報;1988年15期

7 張強,徐榮臻;自身免疫性甲狀腺疾病與逆轉(zhuǎn)錄病毒的研究[J];國外醫(yī)學(內(nèi)科學分冊);1997年11期

8 解麗華,李殿俊,劉旭,夏天,劉威,曹雪濤,葉勝龍;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導癌基因療法體外安全實驗[J];哈爾濱醫(yī)科大學學報;1998年06期

9 鄭晴雯;董曉先;彭燕;董偉華;梁仲培;何慧華;周萍;劉金保;;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導外源基因高效感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2005年22期

10 Hosier DE;王龍妹;;逆轉(zhuǎn)錄病毒引起免疫缺陷病的動物模型[J];國外醫(yī)學(微生物學分冊);1987年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張新生;倪燕萍;伍治平;許鍵;陳德蕙;;中國獼猴逆轉(zhuǎn)錄病毒分離[A];海峽兩岸電子顯微學討論會論文專集[C];1991年

2 高光俠;;宿主細胞限制逆轉(zhuǎn)錄病毒復制的分子機理[A];中國的遺傳學研究——中國遺傳學會第七次代表大會暨學術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2003年

3 高光俠;;宿主細胞限制逆轉(zhuǎn)錄病毒復制的分子機理[A];中國的遺傳學研究——中國遺傳學會第七次代表大會暨學術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2003年

4 解麗華;李殿俊;劉旭;夏天;劉威;曹雪濤;葉勝龍;;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導癌基因療法體外安全實驗[A];慶祝黑龍江省免疫學會成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

5 張青云;王利民;王雅明;徐建軍;;多聚腺苷酸信號缺陷逆轉(zhuǎn)錄病毒致癌機制的研究[A];2000全國腫瘤學術(shù)大會論文集[C];2000年

6 林鑫子;齊麟;李治國;遲昊;劉廣波;潘明新;汪艷;高毅;;人源肝臟組織內(nèi)不同種類細胞對豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒易感性的初步研究[A];第6屆全國疑難及重癥肝病大會論文集[C];2011年

7 程昀靜;段綱;周曉黎;艾軍;;猴D型逆轉(zhuǎn)錄病毒的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2009學術(shù)年會論文集（下冊）[C];2009年

8 葛柳青;呂敏;夏冰;;MICA基因逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

9 靳麗妍;朱光發(fā);;靶向小鼠核因子κB P65逆轉(zhuǎn)錄病毒的構(gòu)建與鑒定[A];中華醫(yī)學會第七屆全國哮喘學術(shù)會議暨中國哮喘聯(lián)盟第三次大會論文匯編[C];2010年

10 林筱潔;高瑞蘭;吳超群;林圣云;;逆轉(zhuǎn)錄病毒pBabe介導的野生型p53基因在白血病K562細胞的表達及其增殖抑制作用[A];2006年浙江省血液病學學術(shù)年會論文匯編[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 記者 劉海英;哺乳動物體形越大患癌幾率越小[N];科技日報;2014年

2 雷蕾;終結(jié)艾滋？[N];人民日報海外版;2013年

3 姜長泓;20世紀80年代發(fā)現(xiàn)的“世紀瘟疫”[N];中國人口報;2003年

4 謝蜀生;發(fā)現(xiàn)艾滋病病原之爭[N];中華讀書報;2003年

5 王雪飛;“釘子”與“靶子”的故事[N];健康報;2008年

6 本報記者 劉霞;治愈艾滋病具有現(xiàn)實可能性[N];科技日報;2013年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 徐榮臻;人白血病相關(guān)逆轉(zhuǎn)錄病毒的分子克隆與鑒定[D];浙江大學;2001年

2 周建飛;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的一氧化氮合酶基因在貓間充質(zhì)干細胞中的表達[D];第二軍醫(yī)大學;2006年

3 張立;豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒分子特性的研究及抗病毒位點的選擇[D];四川大學;2007年

4 陽小衛(wèi);逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的耐藥基因轉(zhuǎn)移以保護造血功能的實驗研究[D];蘇州大學;2001年

5 馮鷹;MDQ治療小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒感染作用及機制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2006年

6 丁生財;豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒異種移植生物安全性的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學;2002年

7 楊勝輝;載有hTERT基因逆轉(zhuǎn)錄病毒感染日本血吸蟲童蟲的研究[D];中南大學;2010年

8 王征;AGR2基因在Barrett's食管中的差異表達及其腫瘤生物學功能和機制的研究[D];華中科技大學;2009年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王麗娜;未知逆轉(zhuǎn)錄病毒在蝙蝠與鯨基因組中的發(fā)現(xiàn)[D];華東師范大學;2013年

2 張子力;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導誘導型一氧化氮合酶基因轉(zhuǎn)染抑制血管平滑肌細胞增殖的研究[D];福建醫(yī)科大學;2004年

3 李婧;采用逆轉(zhuǎn)錄病毒技術(shù)建立人慢性粒細胞性白血病小鼠模型[D];浙江大學;2011年

4 余小菁;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的Bystin基因表達及其功能探討[D];華東師范大學;2004年

5 高庭;用于誘導多潛能性干細胞的人羊水細胞培養(yǎng)及逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝平臺的建立[D];中南大學;2010年

6 張悅;宿主因子MOV10抑制XMRV復制的機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2012年

7 張秋婷;逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體制備轉(zhuǎn)基因雞的初步研究[D];東北林業(yè)大學;2009年

8 付海洋;豬源性醫(yī)療器械中豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒的檢測方法研究及白蛋白生物膠的研制[D];中國藥品生物制品檢定所;2005年

9 馮軍峰;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導EGFP基因標記大鼠胚胎神經(jīng)干細胞及標記細胞的顱內(nèi)移植實驗研究[D];浙江大學;2005年

10 周瑩冰;反義人血管生成素重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及其體外功能的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學;2003年

  本文關(guān)鍵詞：Foxp3逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體增強Treg細胞功能，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：461877