本文關(guān)鍵詞：鉛全抗原制備及圓二色譜鑒別人工抗原免疫原性方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鉛是一種具有蓄積性毒性較強的重金屬污染物,并且不能通過化學(xué)和生物代謝手段去除其毒性。隨著我國食品重金屬鉛污染事件的頻發(fā),建立一種快速靈敏準(zhǔn)確的檢測方法勢在必行,鉛酶聯(lián)免疫快速檢測試劑盒具有得天獨厚的優(yōu)勢,該技術(shù)的關(guān)鍵在于合成高免疫原性的鉛抗原以獲得鉛抗體。本研究通過對傳統(tǒng)戊二醛法進(jìn)行改進(jìn),降低鉛離子對載體蛋白的毒性作用,制備了高免疫原性鉛全抗原；研究了鉛全抗原制備過程中載體蛋白BSA的α-螺旋二級結(jié)構(gòu)變化對BSA抗原活性和免疫原性的影響；研究鉛全抗原偶聯(lián)比及載體蛋白α-螺旋二級結(jié)構(gòu)的改變對全抗原免疫原性的影響。建立以圓二色譜法初步篩選重金屬全抗原的方法。主要研究內(nèi)容如下：1)改良戊二醛法制備鉛全抗原將傳統(tǒng)戊二醛法予以優(yōu)化,采用雙功能螯合劑[(R)-2-氨基-3-(4-氨基苯基)丙基]-(S-S)環(huán)己烷-1,2二乙三胺五乙酸(P-NH2-Bn-Chx-A"-Dtpa)與Pb2+配位結(jié)合,調(diào)節(jié)pH,去除游離態(tài)鉛離子,再與載體蛋白BSA偶聯(lián),得到鉛全抗原BSA-P-NH2-Bn-Chx-A"-Dtpa-Pb。該改良方法合成抗原純化后,偶聯(lián)比提高到21.68,并且載體蛋白具有很好的活性。2)偶聯(lián)比及Pb2+濃度對BSA二級結(jié)構(gòu)及抗原活性影響的研究用圓二色譜研究了偶聯(lián)比及Pb2+濃度對載體蛋白BSA二級結(jié)構(gòu)的影響規(guī)律,競爭ELISA分析了偶聯(lián)比及Pb2+濃度對BSA抗原活性的影響。結(jié)果表明,Pb2+與BSA的骨架結(jié)構(gòu)上的活性基團(tuán)相互作用,使BSA的α-螺旋二級結(jié)構(gòu)相對含量降低,抗原活性下降,當(dāng)Pb2+與BSA共存摩爾比為40：1時,其抗原活性降低最大,抗原性降低率為24.35%；隨著偶聯(lián)比的增加,載體蛋白BSA的α-螺旋二級結(jié)構(gòu)相對含量也呈現(xiàn)降低趨勢,當(dāng)偶聯(lián)比為21.68：1時,其抗原活性降低最大,抗原性降低率為62.6%；用不同濃度的Pb2+處理偶聯(lián)比為21.68：1的鉛全抗原,載體蛋白BSA的α-螺旋二級結(jié)構(gòu)相對含量的進(jìn)一步降低,當(dāng)Pb2+與鉛全抗原的共存摩爾比高于40：1時,載體蛋白CD曲線幾何形狀改變較大,基本喪失了a-螺旋特征峰,抗原性檢測結(jié)果顯示,該抗原已基本變性。3)圓二色譜初步篩選人工抗原免疫原性方法的建立研究鉛全抗原中載體蛋白二級結(jié)構(gòu)的變化對鉛全抗原免疫原性的影響,建立圓二色譜鑒別鉛全抗原免疫原性的方法。結(jié)果表明：鉛全抗原制備過程中,載體蛋白BSA的α-螺旋二級結(jié)構(gòu)含量與BSA免疫原性之間呈極顯著正相關(guān)關(guān)系。鉛全抗原免疫原性受偶聯(lián)比和載體蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的共同作用：偶聯(lián)比在10～30范圍內(nèi),鉛全抗原免疫原性隨偶聯(lián)比增加而上升；相同偶聯(lián)比鉛全抗原,載體蛋白結(jié)構(gòu)越穩(wěn)定性越高,其免疫原性越好。采用圓二色譜對人工抗原進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析,可以作為優(yōu)質(zhì)免疫原性全抗原的一個重要篩選依據(jù),為全抗原的合成條件優(yōu)化起指導(dǎo)作用。
【關(guān)鍵詞】：重金屬 鉛 人工抗原 二級結(jié)構(gòu) 免疫原性
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 第1章 緒論11-25
• 1.1 重金屬鉛概述11
• 1.2 食品中鉛污染現(xiàn)狀、鉛中毒的危害及其防治措施11-14
• 1.2.1 食品中鉛污染的現(xiàn)狀11-12
• 1.2.2 重金屬鉛對人體的影響及危害12-13
• 1.2.3 鉛中毒的防治措施13-14
• 1.3 國內(nèi)外檢測鉛殘留方法研究的現(xiàn)狀14
• 1.4 重金屬全抗原合成概述14-18
• 1.4.1 鉛人工抗原合成的重要試劑15-17
• 1.4.2 鉛人工抗原的合成常用方法17-18
• 1.5 影響機(jī)體對人工抗原免疫應(yīng)答的因素18-22
• 1.5.1 人工抗原的化學(xué)結(jié)構(gòu)19-20
• 1.5.2 宿主方面的因素20
• 1.5.3 抗原進(jìn)入機(jī)體方式的影響20-22
• 1.6 選題意義22-23
• 1.7 主要研究內(nèi)容23-25
• 第2章 重金屬鉛全抗原的合成及鑒定25-35
• 2.1 概述25
• 2.2 實驗試劑與器材25-26
• 2.2.1 主要試劑25-26
• 2.2.2 主要儀器與材料26
• 2.3 實驗方法26-29
• 2.3.1 鉛全抗原的合成26-27
• 2.3.2 鉛全抗原的鑒定27-28
• 2.3.3 鉛全抗原的純化28
• 2.3.4 鉛全抗原偶聯(lián)比的初步測定28-29
• 2.4 實驗結(jié)果29-33
• 2.4.1 半抗原修飾29-30
• 2.4.2 鉛全抗原合成結(jié)果鑒定30-32
• 2.4.3 鉛全抗原純化結(jié)果鑒定32
• 2.4.4 鉛全抗原偶聯(lián)率的初步測定32-33
• 2.5 本章小結(jié)33-35
• 第3章 偶聯(lián)比及Pb~(2+)濃度對載體蛋白BSA二級結(jié)構(gòu)及抗原活性影響的研究35-48
• 3.1 概述35
• 3.2 實驗試劑與器材35-36
• 3.2.1 主要試劑35
• 3.2.2 主要儀器與材料35-36
• 3.2.3 主要試劑的配置36
• 3.3 實驗方法36-40
• 3.3.1 不同手段處理BSA樣品溶液的制備36-37
• 3.3.2 圓二色光譜分析37
• 3.3.3 動物免疫37-38
• 3.3.4 酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)38-40
• 3.4 實驗結(jié)果40-47
• 3.4.1 圓二色光譜分析結(jié)果40-43
• 3.4.2 免疫效果鑒定結(jié)果43-45
• 3.4.3 抗原活性分析45-47
• 3.5 本章小結(jié)47-48
• 第4章 圓二色譜初步篩選人工抗原免疫原性方法的建立48-60
• 4.1 概述48
• 4.2 試驗材料48
• 4.2.1 試驗試劑48
• 4.2.2 主要材料和儀器48
• 4.3 實驗方法48-52
• 4.3.1 免疫樣品的選擇48-49
• 4.3.2 圓二色光譜測定49
• 4.3.3 動物免疫49-50
• 4.3.4 間接ELISA方法測定免疫抗原的免疫原性50-51
• 4.3.5 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析51-52
• 4.4 實驗結(jié)果與討論52-58
• 4.4.1 載體蛋白BSA的α-螺旋二級結(jié)構(gòu)含量與其免疫原性之間的關(guān)系52-53
• 4.4.2 鉛免疫抗原的免疫原性53-54
• 4.4.3 半抗原免疫效果鑒定54-58
• 4.6 本章小結(jié)58-60
• 第5章 結(jié)論與展望60-62
• 5.1 結(jié)論60-61
• 5.2 展望61-62
• 致謝62-63
• 參考文獻(xiàn)63-70
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 吳根華,汪春華;熒光法研究Pb~(2+)與牛血清白蛋白的相互作用[J];光譜學(xué)與光譜分析;2005年02期

2 李勇;;生物活性肽研究現(xiàn)況和進(jìn)展[J];食品與發(fā)酵工業(yè);2007年01期

3 王茂起,王竹天,冉陸,韓宏偉,王永芳,楊大進(jìn);2000～2001年中國食品污染物監(jiān)測研究[J];衛(wèi)生研究;2003年04期

  本文關(guān)鍵詞：鉛全抗原制備及圓二色譜鑒別人工抗原免疫原性方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：458927