本文關(guān)鍵詞：克欽邦佤邦惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹等五種抗瘧藥抗性的體外測(cè)定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探索克欽邦佤邦惡性瘧原蟲(chóng)pfcrt基因的多態(tài)性 方法：1.應(yīng)用Nest-PCR分別擴(kuò)增MSP1、MSP2及Glurp基因中具有特異性的片段,進(jìn)行基因分型,選出單一株。2.應(yīng)用Nest-PCR擴(kuò)增pfcrt基因上的兩個(gè)片段,進(jìn)行測(cè)序,再與標(biāo)準(zhǔn)株3D7的序列進(jìn)行比對(duì),得出基因突變結(jié)果。 結(jié)果：1.基因型鑒定：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)52株樣本的MSP1、MSP2、GLURP進(jìn)行基因型鑒定,獲得39株單一感染細(xì)胞株。 2. pfcrt基因擴(kuò)增結(jié)果：39株樣本的pfcrt第71、72、74、75、76、77、97、144、148、152、160、163、194、220位點(diǎn)中,發(fā)現(xiàn)第71、72、74、75、76、220號(hào)位點(diǎn)存在突變,突變率分別為23.1%、23.1%、92.3%、89.7%、100.0%、100.0%；突變型為V71V、C72S、M74I、N75E、K76T、A220S;第77、97、144、148、152、160、163、194位點(diǎn)未見(jiàn)突變。 結(jié)論：1.MSP1、MSP2、Glurp基因分型發(fā)現(xiàn)有39株樣本是單一感染株,其中13株來(lái)自克欽邦,26株來(lái)自佤邦。 2.39株樣本的pfcrt的71、72、74、75、76、220號(hào)位點(diǎn)存在突變�？藲J邦樣本CVIETS型的突變率明顯高于佤邦(P=0.0030.05)。 目的：測(cè)定克欽邦佤邦惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹、哌喹、奎寧、青蒿琥酯和雙氫青蒿素的體外抗藥性。 方法：將惡性瘧原蟲(chóng)的單一株進(jìn)行體外傳代培養(yǎng),同步化后進(jìn)行抗瘧藥(氯喹、哌喹、青蒿琥酯、雙氫青蒿素、奎寧)IC50值的測(cè)定。 結(jié)果：13株克欽邦惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹、哌喹、奎寧、青蒿琥酯和雙氫青蒿素的IC50值分別為690.9±243.2nM、65.71±23.8nM、1028±466.5nM、18.8±10.5nM和4.6+3.2nM；26株佤邦惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹、哌喹、奎寧、青蒿琥酯和雙氫青蒿素的IC50值分別為340.1±156.9nM、35.7±21.2nM、385.4±161.8nM、9.4±5.8nM和2.5+1.6nM；8株國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株(3D7、HB3、7G8、Dd2、W2、D10、K1和D6)對(duì)氯喹、哌喹、奎寧、青蒿琥酯和雙氫青蒿素IC50值分別為205.5±225.9nM、15.3±13.2nM、387.0±267.9nM、14.0±6.6nM和2.4±1.8nM。 結(jié)論：1.氯喹：本實(shí)驗(yàn)39株惡性瘧原蟲(chóng)中有1/39(25nM≤IC50值100nM)對(duì)氯喹為中度抗性株：有38/39(IC50值"g100nM)為高度抗性株；其中N11-1733和N11-966(IC50值1000nM)為嚴(yán)重抗藥性蟲(chóng)株。氯喹的體外抗藥性和pfcrt基因多態(tài)性有著密切的關(guān)系(P0.005)。 2.哌喹：39株惡性瘧原蟲(chóng)中有1/39(F07-127.5nM)對(duì)哌喹為敏感株；有38/39(IC50值12.8nM)為抗性株；其中N11-966(IC50值100nM)為嚴(yán)重抗性株。 3.奎寧：39株惡性瘧原蟲(chóng)中有22/39(IC5o值500nM)對(duì)奎寧為敏感株；有17/39(IC50值500nM)為抗性株；其中F07-12(IC50值2000nM)為嚴(yán)重抗性株。 4.青蒿琥酯：不同的參考標(biāo)準(zhǔn)對(duì)試驗(yàn)結(jié)論的影響較大。本文參考臨界值計(jì)算公式結(jié)合加權(quán)法,得出其抗性臨界值為29.6nM。39株惡性瘧原蟲(chóng)中有38/39(IC50值29.6nM)對(duì)青蒿琥酯為敏感株；有1/39(IC50值40nM)為敏感性下降株。 5.雙氫青蒿素：不同的參考標(biāo)準(zhǔn)對(duì)試驗(yàn)結(jié)論的影響本較大。本文參考藥物體外抗性臨界值計(jì)算公式(均數(shù)+2×標(biāo)準(zhǔn)差)結(jié)合加權(quán)法,得出其抗性臨界值為7.7nM。39株惡性瘧原蟲(chóng)中有37/39(IC5o值7.7nM)對(duì)雙氫青蒿素為敏感株；有2/39(ICso值"g7.7nM)為敏感性下降株。 6.交叉抗藥性：經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),對(duì)于中緬邊境地區(qū)的惡性瘧原蟲(chóng)而言,氯喹和哌喹二者之間,青蒿琥酯、雙氫青蒿素及奎寧三者之間存在交叉抗藥性。 7.克欽邦佤邦39株惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹、哌喹、奎寧、青蒿琥酯和雙氫青蒿素的IC50值的研究中發(fā)現(xiàn)：兩地區(qū)樣本均不同程度的對(duì)氯喹、哌喹和奎寧產(chǎn)生了抗性,且佤邦樣本對(duì)氯喹、哌喹和奎寧抗性低于克欽邦樣本；兩地區(qū)樣本對(duì)青蒿琥酯和雙氫青蒿素的藥物敏感性也不相同,且佤邦樣本對(duì)青蒿琥酯和雙氫青蒿素的藥物敏感性大于克欽邦樣本。 目的：比較4℃冷藏同步化和山梨醇同步化這兩種方法對(duì)體外測(cè)定藥物IC50值的影響。 方法：按照配對(duì)Hotelling T2設(shè)計(jì),將8株惡性瘧原蟲(chóng)分為兩組,分別應(yīng)用4℃冷藏同步化和山梨醇同步化處理,然后進(jìn)行4種抗瘧藥(氯喹、哌喹、雙氫青蒿素和奎寧)IC50值的測(cè)定。 結(jié)果：4℃同步化后得到的8株細(xì)胞對(duì)氯喹、哌喹、雙氫青蒿素、奎寧的IC50值分別為270.8±189.7nM、22.2±12.2nM、1.5±0.9nM和398.4±162.8nM,山梨醇同步化后8株細(xì)胞對(duì)氯喹、哌喹、雙氫青蒿素和奎寧的IC50值分別為261.0±178.7nM、25.4±15.8nM、1.4±1.0nM和380.7±162.6nM。 結(jié)論：經(jīng)配對(duì)Hotelling T2檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：4℃冷藏同步化方法和山梨醇同步化方法對(duì)抗瘧藥IC50值的影響無(wú)顯著性差異(P=0.8940.05)。
【關(guān)鍵詞】：惡性瘧原蟲(chóng) MSP2 基因突變 pfcrt 惡性瘧原蟲(chóng) 抗瘧藥IC_(50)值抗藥性 惡性瘧原蟲(chóng)IC_(50)值山梨醇同步化 4℃冷藏同步化
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R382.31
【目錄】：

• 英文縮略詞表7-9
• 中文摘要9-13
• 第一部分 克欽邦佤邦惡性瘧原蟲(chóng)PFCRT基因多態(tài)性研究9-10
• 第二部分 克欽邦佤邦惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹等五種抗瘧藥抗性的體外測(cè)定10-12
• 第三部分 4℃冷藏同步化法和山梨醇同步化法對(duì)抗瘧藥抗性體外測(cè)定的影響12-13
• ABSTRACT13-17
• PART1 RESEARCH ON PFCRT OF PLASMODIUMFALCIPARUMISOLATES FROM KACHIN AND WA STATE13-14
• PART2 EX VTVO DRUG-RESISTANCE ASSAY OF FIVE ANTIMALARIALSON THE ISOLATES FROM WA STATE AND KACHIN STATE14-16
• PART3 COMPARE THE EFFECTS ON THE EX VIVO DRUG-SENSITIVITYASSAY SEPARATELY TREATED WITH TWO SYNCHRONIZATIONMETHODS -4℃ REFRIGERATION AND 5% SORBITOLUM16-17
• 引言17-22
• 1. 瘧疾的流行情況17-20
• 2. 抗瘧藥及抗藥性問(wèn)題20-22
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法22-47
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 2. 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑來(lái)源及配制23-28
• 3. 試驗(yàn)方法與步驟28-46
• 3.1. 惡性瘧原蟲(chóng)的體外培養(yǎng)28-30
• 3.2. MSP2和PFCRT基因的擴(kuò)增與檢測(cè)30-37
• 3.2.1. PCR技術(shù)的基本原理30-31
• 3.2.2. 實(shí)驗(yàn)總路線31-37
• 3.3. 體外抗藥性測(cè)定37-44
• 3.3.1. 實(shí)驗(yàn)原理37
• 3.3.2. 實(shí)驗(yàn)要求37
• 3.3.3. 實(shí)驗(yàn)總路線37-38
• 3.3.4 惡性瘧原蟲(chóng)的配置38-40
• 3.3.5 藥板制作40-43
• 3.3.6.IC50值的測(cè)定43-44
• 3.4 同步化對(duì)比試驗(yàn)44-46
• 3.4.1. 實(shí)驗(yàn)總路線44-45
• 3.4.2. 實(shí)驗(yàn)具體步驟45-46
• 4. 數(shù)據(jù)資料統(tǒng)計(jì)學(xué)分析46-47
• 結(jié)果47-68
• 第-部分 克欽邦佤邦惡性瘧原蟲(chóng)PFCRT基因多態(tài)性研究47-54
• 1. 基因分型結(jié)果47-48
• 2. PFCRT基因PCR擴(kuò)增結(jié)果48-50
• 3. PFCRT突變結(jié)果50-54
• 第二部分 克欽邦佤邦惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹等五種抗瘧藥抗性的體外測(cè)定54-65
• 1. 體外抗藥性測(cè)定結(jié)果54-57
• 2. 39株病人株和8株國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株對(duì)5種藥物的IC_(50)值綜合結(jié)果57-58
• 3. 克欽邦和佤邦樣本對(duì)5種藥物的IC_(50)值的比較58
• 4. 五種抗瘧藥(氯喹、哌喹、奎寧、青蒿琥酯和雙氫青蒿素)之間的交叉抗藥性58
• 5. 中緬邊境病人株對(duì)5種抗瘧藥物抗性或敏感性的判斷58-61
• 6. 氯喹IC_(50)值與PFCRT基因多態(tài)性的相關(guān)性61-65
• 第三部分 4℃冷藏同步化法和山梨醇同步化法對(duì)抗瘧藥體外抗性測(cè)定的影響65-68
• 討論68-78
• 第一部分 克欽邦佤邦惡性瘧原蟲(chóng)PFCRT基因多態(tài)性研究68-73
• 第二部分 克欽邦佤邦惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹等五種抗瘧藥抗性的體外測(cè)定73-77
• 第三部分 4℃冷藏同步化法和山梨醇同步化法對(duì)抗瘧藥抗性體外測(cè)定的影響77-78
• 結(jié)論78-79
• 實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)新性79-80
• 有待深入研究的問(wèn)題80-81
• 參考文獻(xiàn)81-89
• 附圖89-90
• 論著90-111
• 碩士在讀期間發(fā)表文章111-112
• 致謝112

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 楊恒林,劉德全,黃開(kāi)國(guó),楊亞明,楊品芳,廖明錚,張春勇;云南省惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹、氨酚喹、哌喹、甲氟喹、奎寧敏感性的體外測(cè)定[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;1999年01期

  本文關(guān)鍵詞：克欽邦佤邦惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹等五種抗瘧藥抗性的體外測(cè)定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：457702