本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌特異性抗原Rv0315和Rv2971的克隆、表達(dá)及初步應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 由于艾滋病的蔓延、多種耐藥結(jié)核菌的增多、移民,不少國(guó)家和地區(qū)對(duì)結(jié)核病控制的不重視等諸多原因，無(wú)論在發(fā)達(dá)國(guó)家還是在發(fā)展中國(guó)家，全球結(jié)核病形勢(shì)正在急劇惡化，結(jié)核病患者人數(shù)一直不斷增加。而能夠快速、準(zhǔn)確地診斷結(jié)核分枝桿菌感染，尤其是對(duì)菌陰肺結(jié)核和潛伏性感染的診斷，對(duì)結(jié)核病的控制工作具有非常重要的意義，診斷水平的提高也直接影響了對(duì)結(jié)核病的防控能力。由于目前臨床上常用的檢測(cè)方法存在涂片檢出率低、培養(yǎng)周期長(zhǎng)等諸多局限性，尋找新的快速準(zhǔn)確的結(jié)核病診斷方法已成為當(dāng)前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。 目的 獲得可以用于結(jié)核病診斷的新型標(biāo)志物，克隆表達(dá)得到結(jié)核分枝桿菌特異性抗原Rv0315、Rv2971，評(píng)價(jià)單一抗原和復(fù)合抗原在體液免疫和細(xì)胞免疫診斷價(jià)值。 方法 分析結(jié)核分枝桿菌全基因序列，設(shè)計(jì)引物，通過分子克隆方法獲得重組質(zhì)粒pET21a-Rv0315、pET32a-Rv2971，轉(zhuǎn)化后進(jìn)行表達(dá)與純化，得到重組蛋白R(shí)v0315、Rv2971，采用Triton X-114相分離法去除內(nèi)毒素，建立合適細(xì)胞和抗原濃度的ELISPOT方法，進(jìn)行抗原組合，，ELISA法評(píng)價(jià)Rv0315、Rv2971、ESAT-6、CFP-10、復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315在體液免疫診斷中的敏感性和特異性。分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，用ELISPOT法評(píng)價(jià)Rv2971、復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315在細(xì)胞免疫診斷中的價(jià)值。 結(jié)果 1．成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET21a-Rv0315、pET32a-Rv2971，轉(zhuǎn)化后進(jìn)行表達(dá)純化得到重組蛋白R(shí)v0315、Rv2971，內(nèi)毒素含量低于5EU/mg。 2．Rv0315、復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315、ESAT-6、CFP-10、Rv2971的ELISA法檢測(cè)的敏感性依次為20.8%（10/48）、37.5%（18/48）、31.3%（15/48）、25%（12/48）、4.2%（2/48），特異性依次為93.8%（30/32）、87.5%（28/32）、87.5%（28/32）、90.6%（29/32）、90.6%（29/32）。 3．ELISPOT法評(píng)價(jià)Rv0315、Rv2971、EAST6肽段庫(kù)和CFP10肽段庫(kù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌感染的陽(yáng)性率依次為58.3%（14/24）、16.7%（4/24）、75.0%（18/24）、66.7%（17/24），特異性依次為92.9%（13/14）、85.7%（12/14）、92.9%（13/14）、92.9%（13/14）； 4．Rv0315與ESAT-6總體陽(yáng)性率相比，校正χ2=0.900，P=0.344；與CFP-10總體陽(yáng)性率相比，χ2=0.125，P=0.727。Rv2971與ESAT-6總體陽(yáng)性率相比，校正χ2=10.564，P=0.001；與CFP-10總體陽(yáng)性率相比，χ2=6.667，P=0.007。復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315、EAST6肽段庫(kù)和CFP10肽段庫(kù)的敏感度依次為85.7%（60/70）、77.1%（54/70）、72.9%（51/70），特異性依次為82.4%（28/34）、85.3%（29/34）、88.2%（30/34）。復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315與ESAT-6總體陽(yáng)性率相比，χ2=4.167，P=0.031；與CFP-10總體陽(yáng)性率相比，χ2=7.111，P=0.004。復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315、EAST6肽段庫(kù)和CFP10肽段庫(kù)在菌陽(yáng)肺結(jié)核組的陽(yáng)性率依次為94.0%（47/50）、90.0%（45/50）、78.0%（39/50），在菌陰肺結(jié)核組的陽(yáng)性率依次為65%（13/20）、45.0%（9/20）、60.0%（12/20）。 結(jié)論 1．采用Triton X-114相分離法能去除原核表達(dá)所產(chǎn)生的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素含量符合免疫實(shí)驗(yàn)應(yīng)用要求。 2．結(jié)核分枝桿菌特異性抗原Rv0315有望成為結(jié)核病診斷的候選抗原； 3．結(jié)核分枝桿菌特異性抗原Rv2971不具有較高的或潛在的免疫原性，不適用于作為結(jié)核病診斷的免疫學(xué)指標(biāo)。 4．復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315有成為結(jié)核感染輔助診斷的潛力，值得進(jìn)一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 Rv0315 Rv2971 ESAT-6 CFP-10 肺結(jié)核 體液免疫 細(xì)胞免疫
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R378.911
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文縮略詞對(duì)照表11-12
• 前言12-15
• 1 材料15-20
• 2 方法20-25
• 3 結(jié)果25-34
• 4 討論34-39
• 5 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述 細(xì)胞免疫在結(jié)核病診斷中的研究進(jìn)展44-57
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 致謝57-59
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及讀研期間發(fā)表論文59

【參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌特異性抗原Rv0315和Rv2971的克隆、表達(dá)及初步應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：456066