本文關(guān)鍵詞：間日瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白基因多態(tài)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本課題主要通過研究間日瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白(PvCSP)基因多態(tài)性特征,對(duì)我省本地和輸入的間日瘧原蟲進(jìn)行基因型分析。 材料和方法2008年-2013年間,在河南省范圍內(nèi)收集經(jīng)鏡檢和PCR雙重方法確定的間日瘧病人血標(biāo)本,取患者外周血或靜脈血制作成濾紙血,供DNA提取用。根據(jù)PvCSP序列特征設(shè)計(jì)特異性引物,經(jīng)巢式PCR擴(kuò)增后,對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行正反雙向測(cè)序,測(cè)序結(jié)果用ChromasPro軟件進(jìn)行拼接,然后在NCBI中BLAST查找,看有無(wú)相同序列,進(jìn)而與Genbank中的CSP基因進(jìn)行比對(duì)分析,選取國(guó)內(nèi)外代表株,對(duì)其核苷酸和氨基酸序列進(jìn)行比對(duì),采用mega40繪制進(jìn)化樹。 結(jié)果(1)52份間口瘧原蟲現(xiàn)場(chǎng)分離株經(jīng)巢式PCR擴(kuò)增,均能擴(kuò)增出一條600-750bp的條帶,用惡性瘧患者及健康人標(biāo)本對(duì)照未擴(kuò)增出任何條帶。(2)52份間日瘧原蟲分離株中,51份屬VK210型,只有一份來(lái)自騰沖的蟲株屬VK247型,河南省本地的32份間日瘧原蟲分離株均屬于VK210型。(3)32份本地PvCSP中央重復(fù)單位的數(shù)目在20-22之間,在中央重復(fù)區(qū)后,本地PvCSP氨基酸序列均能見到一段12肽的插入序列：GGNAANKKAEDA,插入序列之后大部分本地株出現(xiàn)重復(fù)兩次的亞重復(fù)單位：GGNA;20份輸入的間日瘧患者血樣中,共觀察到VK210型的6種不同的序列,PvCSP中央重復(fù)區(qū)重復(fù)單位的數(shù)目在17-19之間,部分蟲株出現(xiàn)了中央重復(fù)區(qū)后12肽的插入序列,GGNA亞重復(fù)單位的數(shù)目分別為1、2、3、5、6、7。(4)河南本地PvCSP序列主要有兩種：VK210A(33.33%)和VK210G(42.42%)。與VK210重復(fù)單位基本序列相比,本地PvCS P序列有75%以上的中央重復(fù)單位至少有一個(gè)非沉默的堿基變換。9肽單位氨基酸序列觀察到了7種變化,重復(fù)單位的變異主要發(fā)生在第3、4、6、7、9、14、21、22核苷酸,其中,第3、21核苷酸常發(fā)生沉默的堿基變換,第4、7、9、14、22核苷酸常發(fā)生非沉默的堿基變換,而第6核苷酸既可以發(fā)生沉默的堿基變換,又可以發(fā)生非沉默的堿基變換。(5)本地PvCSP可以分為2個(gè)基因亞型A和B,亞型A又可以進(jìn)一步劃分為A1、A2、A3。在本地序列各個(gè)亞型中任選一個(gè)序列與輸入性序列及Genbank中的序列做同源性分析：A1、A2、A33型的同源性為91.9%-96.0%,與M28746的同源性為89.8%-94.0%,與U08977的同源性為93.3%-97.4%,與M28745的同源性為16.8%-21.2%；基因亞型B與M28746的同源性為71.7%；與U08977的同源性為72.5%,與M28745的同源性為35.7%。HNSR27與M28745的同源性為99.3%,與AF316584的同源性為97.4%,與M28746的同源性為13.7%。 結(jié)論河南省間日瘧原蟲CSP基因?qū)賄K210型,共觀察到八種不同的序列；河南省PvCSP與非洲、東南亞等瘧區(qū)輸入的PvCSP差異較大,與中國(guó)貴州株、朝鮮株P(guān)vCSP相似但仍可以區(qū)分。
【關(guān)鍵詞】：間日瘧原蟲 環(huán)子孢子蛋白 多態(tài)性
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R382.31
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 中英文~.略詞8-12
• 1 引言12-16
• 1.1 瘧疾流行情況12-13
• 1.2 間日瘧原蟲分子標(biāo)志研究現(xiàn)狀13-14
• 1.3 本課題研究?jī)?nèi)容及其意義14-16
• 2 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2.1 實(shí)驗(yàn)樣本16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑16-17
• 2.3 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備17-18
• 3 實(shí)驗(yàn)方法18-23
• 3.1 血涂片鏡檢法18
• 3.2 濾紙血樣的DNA提取18
• 3.2.1 試劑盒組分18
• 3.2.2 樣品處理18
• 3.2.3 提取步驟18
• 3.3 PCR檢測(cè)瘧原蟲種類18-20
• 3.3.1 引物設(shè)計(jì)18-19
• 3.3.2 擴(kuò)增體系及反應(yīng)條件19-20
• 3.4 巢式PCR擴(kuò)增PvCSP基因20-21
• 3.4.1 引物設(shè)計(jì)20
• 3.4.2 擴(kuò)增體系及反應(yīng)條件20-21
• 3.5 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物21-22
• 3.6 目的基因測(cè)序22
• 3.7 測(cè)序結(jié)果比對(duì)22
• 3.8 進(jìn)化樹分析22-23
• 4 結(jié)果23-36
• 4.1 一般情況23
• 4.2 PvCSP基因擴(kuò)增結(jié)果23-24
• 4.3 預(yù)實(shí)驗(yàn)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物序列測(cè)定結(jié)果24
• 4.4 序列比對(duì)分析24-27
• 4.5 PvCSP基因相似性分析27-29
• 4.6 PvCSP基因多態(tài)性分析29-31
• 4.7 PvCSP的進(jìn)化樹分析31-36
• 5 討論36-39
• 6 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述44-54
• 1. PvCSP的分子結(jié)構(gòu)44-46
• 2. PvCSP基因多態(tài)性的研究46-50
• 2.1 國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)PvCSP基因多態(tài)性的研究46-49
• 2.2 國(guó)外學(xué)者對(duì)PvCSP基因多態(tài)性的研究49-50
• 3. 結(jié)語(yǔ)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷54-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：間日瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白基因多態(tài)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：453822