本文關(guān)鍵詞：細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)GAPDH蛋白的生物信息學(xué)分析及其重組表達(dá)純化和酶活性檢測(cè)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的以生物信息學(xué)預(yù)測(cè)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)甘油醛3-磷酸脫氫酶(EgGAPDH)編碼基因及其編碼蛋白的結(jié)構(gòu)和功能,利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)高效表達(dá)EgGAPDH重組蛋白,體外檢測(cè)其酶活性。方法運(yùn)用各軟件對(duì)EgGAPDH的理化性質(zhì)、保守功能域、系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)和二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)等方面進(jìn)行分析后,將EgGAPDH基因亞克隆于表達(dá)載體pET30a(+),轉(zhuǎn)化入E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)菌,表達(dá)、純化重組蛋白,并利用底物3-磷酸甘油醛測(cè)定重組蛋白EgGAPDH的酶催化活性。結(jié)果 EgGAPDH cDNA序列長(zhǎng)度為1 011bp,編碼一個(gè)336個(gè)氨基酸的蛋白。該GAPDH蛋白理論相對(duì)分子質(zhì)量為36 128.3Da,等電點(diǎn)為8.44,具有GAPDH蛋白家族的兩個(gè)功能結(jié)構(gòu)域,富含6種類型的特定功能位點(diǎn)。成功構(gòu)建的原核表達(dá)載體pET30a(+)-EgGAPDH在E.coli BL21(DE3)中高效表達(dá),且發(fā)現(xiàn)表達(dá)產(chǎn)物主要以可溶形式分布于裂解上清,制備甘油醛3-磷酸脫氫酶純品并通過(guò)酶活檢測(cè)顯示其具有高效酶活性。結(jié)論 EgGAPDH基因可在原核系統(tǒng)中獲得有酶催化活性的高效表達(dá),為進(jìn)一步研究其在糖代謝中的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)研究所;海南醫(yī)學(xué)院寄生蟲(chóng)學(xué)教研室;甘肅省新藥臨床前重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)粒棘球絳蟲(chóng) 甘油醛-磷酸脫氫酶 生物信息學(xué) 原核表達(dá) 酶活性檢測(cè)
【基金】：國(guó)家自然基金資助項(xiàng)目(No.81171632)資助~~
【分類號(hào)】：Q78
【正文快照】： 細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)(Echinococcus granulosus,Eg,又名單房包蟲(chóng))病是流行于我國(guó)(特別是西北地區(qū))常見(jiàn)的人獸共患寄生蟲(chóng)病,是我國(guó)規(guī)劃防治的五大寄生蟲(chóng)病之一[1]。目前研究中,人們多采用多價(jià)復(fù)合疫苗即“雞尾酒”式疫苗對(duì)其進(jìn)行預(yù)防[2]。甘油醛3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde 3-phos-ph

【參考文獻(xiàn)】

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1 尚海旭;井然;賈弘y，

本文編號(hào)：446854